OBTENCIÓN DE MUESTRAS FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO INCLUSIÓN CORTE MONTAJE TINCIÓN DE LOS CORTES

PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICAPASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA

OBTENCIÓN DE MUESTRASOBTENCIÓN DE MUESTRAS

Todas las muestras de tejido, ya sea Todas las muestras de tejido, ya sea

obtenidas de materiales quirúrgicos, obtenidas de materiales quirúrgicos,

necropsias, biopsias deben ser procesadas necropsias, biopsias deben ser procesadas

adecuadamente para obtener buenos adecuadamente para obtener buenos

cortes histológicos.cortes histológicos.

Se debe obtener toda la Se debe obtener toda la

información posible del información posible del

material a procesar.material a procesar.

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS

En caso de ser necesario se debe realizar En caso de ser necesario se debe realizar

un examen y descripción preliminar de los un examen y descripción preliminar de los

materiales y su adecuación para un materiales y su adecuación para un

correcto procesamiento.correcto procesamiento.

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS

OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS

FIJACIÓNFIJACIÓN

Tratamiento del tejido con sustancias químicas que no solo retardan las alteraciones hísticas posteriores a la muerte, sino que conservan la configuración normal del tejido.

Fijador: Fijador:

Sustancia que detiene en forma rápida los procesos de autólisis y que, al mismo tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el estado en que se encontraban en la vida.

FIJACIÓNFIJACIÓN

Desecación: Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.Extendidos, líquidos de punciones.

Calor seco: Calor seco: Bacteriología.Bacteriología.

Calor húmedo: Calor húmedo: Microquímica, Zoología.Microquímica, Zoología.

Frío: Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los No es una verdadera fijación. Detiene los

procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja

de actuar los mismos se reanudan.de actuar los mismos se reanudan.

TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES

Físicos:

FIJACIÓNFIJACIÓN

Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) . (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .

Mercuriales Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).(precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).

AlcoholesAlcoholes (precipitan proteínas) (precipitan proteínas)..

Agentes oxidantes Agentes oxidantes (precipitan proteínas(precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).y tóxico por sus vapores).

Picratos Picratos (precipitan proteínas).(precipitan proteínas).

Químicos:

TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES

FIJACIÓNFIJACIÓN

AldehídosAldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más (formaldehido/glutaraldehido): Son los más

utilizados. Los tejidos son fijados por uniones utilizados. Los tejidos son fijados por uniones

cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los

grupos amino.grupos amino.

La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza

normalmente al 10%, en una solución bufferada.normalmente al 10%, en una solución bufferada.

TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES

Químicos:

FIJACIÓNFIJACIÓN

FIJACIÓNFIJACIÓN

Un defecto de fijación no Un defecto de fijación no puede ser subsanado. puede ser subsanado.

Es inútil hacer un estudio Es inútil hacer un estudio histológico de un material histológico de un material mal fijado.mal fijado.

No debe olvidarse que:No debe olvidarse que:

FIJACIÓNFIJACIÓN

DESHIDRATACIÓNDESHIDRATACIÓN

Se obtiene por medio de un reactivo anhidro Se obtiene por medio de un reactivo anhidro pero ávido de agua:pero ávido de agua:

Alcohol Etílico.Alcohol Etílico.

Alcohol Isopropílico.Alcohol Isopropílico.

Alcohol Butílico.Alcohol Butílico.

AcetonaAcetona

ACLARADOACLARADOSe debe embeber la pieza con una sustancia Se debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina:miscible con el alcohol y la parafina:

Xileno.Xileno.

Tolueno.Tolueno.

Benceno.Benceno.

INCLUSIÓNINCLUSIÓN La La parafinaparafina penetra en los vasos, en los espacios penetra en los vasos, en los espacios

intercelulares y también en el interior de las células intercelulares y también en el interior de las células

embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención

de cortes con el micrótomo.de cortes con el micrótomo.

Procesador AutomáticoProcesador Automático

Procesador AutomáticoProcesador Automático

Obtención del bloque de parafina de forma Obtención del bloque de parafina de forma

regular, para ser cortado con el micrótomo.regular, para ser cortado con el micrótomo.

CONFECCIÓN DEL TACO

CONFECCIÓN DEL TACO

CORTECORTE

Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.

Micrótomo de Deslizamiento.Micrótomo de Deslizamiento.

Micrótomo de Congelación.Micrótomo de Congelación.

Crióstato.Crióstato.

Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.

Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.

Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.

CrióstatoCrióstato

CrióstatoCrióstato

EXTENSIÓNEXTENSIÓN

Utilizar portaobjetos limpios y preparados con el adhesivo adecuado.

Se realiza en agua tibia (38oC).

Precaución: el preparado debe quedar bien extendido y sin pliegues.

Rotular.

Luego de escurrir el exceso de agua llevar a estufa (60 °C) no más de dos horas.

EXTENSIÓNEXTENSIÓN

TINCIÓN DE LOS CORTES

Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:

Colorantes que diferencian los componentes básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y eosina).

Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.

Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:

TINCIÓN DE LOS CORTES

La reacción de los grupos aniónicos con un colorante básico se denomina BASOFILIA

(que tiene afinidad por lo básico)

La reacción de los grupos catiónicos con un colorante ácido se denomina EOSINOFILIA

(que tiene afinidad por lo ácido)

Coloración con Hematoxilina

Coloración conEosina

Coloración Hematoxilina-Eosina

Basófilo(azul)

Acidófilo(rosado)