EFECTOS REEPITELIZANTES, CICATRIZANTES Y ANTIINFLAMATORIOS DE CALENDULA Alumna: Maringeles Chiarada INTRODUCCIONLa Calndula officinalis pertenece a la familia Calndula officinalis L., es una planta anual, oriunda de la regin mediterrnea, que se cultiva en todo el mundo y sus flores son utilizadas tanto desde el punto de vista ornamental como para la preparacin de productos terminados en las industrias farmacutica y cosmtica. Su nombre genrico, calndula, deriva del latn calendulae que significa "a lo largo de los meses" con lo que se quiso subrayar el largo periodo de floracin que tiene esta planta; al nombre especfico, officinalis, expresa su carcter medicinal.(1) Se la conoce popularmente como Calndula, maravilla, virreina, clavel de muerto, marquesita, marigold (Inglaterra), copetuda (Cuba). Es una hierba anual, de 30 a 60 cm de altura; tallos erectos y ramificados; hojas simples, alternas, algo gruesas, oblongolanceoladas, pilosas por ambas caras; e inflorescencias grandes de fuerte tonalidad anaranjada o amarilla, que se cierran por la noche. Su fruto es un aquenio espinoso. Se utilizan las inflorecscencias o flsculos aislados. (2) Para su uso ineterno se preparan infusiones al 4%, tinturas 1:10 y extractos fluido (1g= 40 gotas) que son indicados en gastritis y lceras gastroduodenales, amenorreas y dismenorreas, cefaleas y colitis.(2) Por la va externa, se emplean decocciones de calndula (6-8%) para lavajes o compresas en casos lceras dermicas, heridas infectadas, dermatitis de paal, aczemas, eritemas, varices y hermorroides. Tambin se emplea el oleato de calndula en forma de pomadas, unguentos, cremas, jabones y talcos. Segn Alonso J. R., 1998 (2) las flores de Calndula presentan un amplio espectro de compuestos qumicos, lo cual est en concordancia con la diversidad de acciones farmacolgicas que presenta la planta. Entre los compuestos ms investigados, dado su inters farmacolgico, estn: Carotenoides (calendulina, licopeno, rubixantina, violaxantina, zeina, entre otros); Flavonoides (derivados del quercetol (quercetin-3-0-glicsido) y del isorramnetol); Saponsidos ( calendulsidos A, D, D2, F); Alcoholes triterpnicos pentacclicos (arnidiol, faradiol, etc.); Polisacridos (ramno-arabino-galactano y dos arabinogalactanos); Aceite esencial (01-0.2%, abundante en mono y cesquiterpeno oxigenados: carvona, geranilacetona, mentona, isomentona, etc.); Otros (cido mlico (6.8%), muclago (1.5%), resina, goma (calendulina), sustancia amarga (calendeno o calendina), taninos, poliacetilenos, esteroles (sitosterol, estigmasterol, isofucosterol, campesterol, metilencolesterol y colesterol), cido saliclico (0.34 g/kg), arvsido A (glicsido sesquiterpnico) e insulina (raz)). La propiedades farmacolgicas de la Calndula officinalis son variadas y ampliamente conocidas.

Muchos estudios demuestran que los extractos de las flores de la Calndula officinalis poseen actividad antiinflamatoria, reepitelizante y cicatrizante (1)(2)(4). Adems se ha comprobado su efectividad en procesos dermatolgicos como neurodermatitis, liquen, eczemas hmedo y seco, dermatitis del paal y post-solar y otros procesos inflamatorios crnicos (2). Otras propiedades, como actividad antiviral (1)(2)(8) y actividad antibacteriana, especialmente contra Staphylococcus aureus y S. fecaelis (2)(3), actividad citotxica y antitumoral (1)(2)(4), son tambin atribuidas a los extractos de C. officinalis. Estudios in vivo plantean que el uso del extracto de polifenoles totales posee marcado efecto colagogo en ratas y tambin una accin benfica en el tratamiento de hepatitis inducida por tetracloruro de carbono (3). Adems de estas actividades farmacolgicas refrendadas por el uso popular, los estudios farmacolgicos experimentales han descubierto nuevas propiedades para la Calndula: los saponsidos de las flores de C. officinalis ayudan a la normalizacin del colesterol, los cidos grasos libres, los fosfolpidos, las blipoprotenas, los lpidos totales y los triglicridos presentes en la sangre de ratas con hiperlipemia experimental (3). Por otro lado, ha sido develada la accin anti-HIV, hipolipemiante, inhibitoria del vaciamiento gstrico y gastro protectora del extracto de las flores de C. officinalis (4) En la medicina popular se utiliza como diafortica, diurtica, antiespasmdica, antihelmntica y emenagoga, todos usos que carecen de base cientfica (1). Las decocciones de las flores de Calndula tienen un amplio espectro en cuanto al tratamiento de diversas afecciones, entre las que se pueden citar: la curacin de heridas como colutorios en las estomatitis y en la piorrea; el tratamiento de la gastritis, de las lceras y otras enfermedades gastrointestinales; el tratamiento de la hipertensin, taquicardia y arritmia; el tratamiento de diversas afecciones del sistema urinario, as como en enfermedades del SNC y perifrico (3). Esta monografa tiene como objetivo brindar la informacin sobre los estudios preclnicos y clnicos encontrados que fundamentan la utilizacin de las flores de C. officinalis como agentes reepitelizantes, cicatrizantes y antiinflamatorios. Se mencionan adems posibles efectos toxicolgicos.

ESTUDIOS PRECLINCOSEn los estudios farmacolgicos realizados con extractos o fracciones a partir de las flores de C. officinalis se han detectado las mismas propiedades que se informan en la medicina tradicional. Ukiya y col., 2006 (4) demostraron que algunos triterpenos glicosdicos presentes en extractos de flores secas de calndula posee accin inhibitoria en la inflamacin inducida por 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetato (TPA) en ensayos de edema de oreja en ratones. Diez triterpenos y cinco flavonoides glicosdicos fueron aislados desde una fraccin soluble en n-butanol del extracto metanlico de flores de C. officinalis. Los citados investigadores evaluaron el efecto del extracto metanlico, de las

fracciones solubles en acetato de etilo, n-butanol y en agua y de nueve de los diez triterpenos glicosdicos (del 1 al 9) en inflamacin inducida por TPA en ratones. La fraccin soluble en acetato de etilo produjo la mayor inhibicin (84% a 1.0% g/oreja) por lo que consideraron que contiene los componentes responsables de la accin antiinflamatoria. Efecto inhibitorio de componentes 1-15 en la inflamacin inducida por TPA en ratones INHIBICION DE LA COMPONENTES INFLAMACION. ID50 (mg/oreja) 1- Calendulaglicosido A 0,32 2- Calendulaglicosido A 6-O-n-metilester 0.06 3- Calendulaglicosido A 6-O-n-butilester 0.06 4- Calendulaglicosido B 0.05 5- Calendulaglicosido B 6-O-n-butilester 0.06 6- Calendulaglicosido C 0.20 7- Calendulaglicosido C 6-O-n-metilester 0.10 8- Calendulaglicosido C 6-O-n-butilester 0.06 9- Calendulaglicosido F 6-O-n-butilester 0.07 10- Calendulaglicosido G 6-O-n-metilester 11- Isorhamnetina 3-O-neoesperidosido 12- Isorhamnetina 3-O-2G-ramnosilrutinosido 13- Isorhamnetina 3-O-rutinosido 14- Quersetina 3-O-glucosido 15- Quersetina 3-O- rutinosido 16- Indometacina 0.30 17- Hidrocortisona 0.03 ID50: Dosis inhibitoria 50% Los 9 triterpenos evaluados mostraron una accin antiinflamatoria con dosis ID50 comparables con la del control positivo de Indometacina (ID50=0.3 mg/oreja). Seis de ellos (2, 3, 4, 5, 8 y 9) mostraron un potente efecto inhibitorio (0.05 0.07 mg/oreja) comparable con la potencia del segundo agente antiinflamatorio, hidrocortisona (ID50= 0.03 mg/oreja). Muoz Centeno, 2004 (2) en su trabajo tambin se refiri a la actividad antiinflamatoria evidenciada en edemas producidos por carragenina y prostaglandinas E1 en ratas, quien atribuy esta accin tambin a los triterpenos (al faradiol mayoritariamente). Por otro lado, encontr que experimentos in vivo, con extracto de la flores de C. Officinalis, muestran una accin estimulante de la epitelizacin de heridas hechas quirrgicamente en ratas, en concordancia con lo descrito por Lastra Valds y Piquet Garca en su revisin publicada en diciembre de 1999 (3). Alonso, 1998 describi que los ungentos de extractos florales de calndula al 5% en combinacin con alantona, proveen una marcada epitelizacin en modelos

de heridas experimentales en ratas, sealando una mayor intensidad en el metabolismo de glicoprotenas, nuclenas y fibras colgenas durante el periodo regenerativo tisular. Ms an, el autor indic que la aplicacin tpica de cremas con extracto de Calndula, confrey, propleo y miel ha acelerado la cicatrizacin de heridas infectadas experimentalmente. (2) Investigaciones efectuadas en Gran Bretaa sugirieron un papel inductor de la microvascularizacin en los extractos acuosos de flores de calndula aplicados sobre heridas de piel, contribuyendo as a una ms rpida cicatrizacin. (2)

ESTUDIOS CLINICOSPommier y col., 2001 (5) realizaron un estudio en fase 3 randomizado simple ciego, en el que midieron la efectividad del extracto de C. officinalis comparndolo con Trolamina en la prevencin de dermatitis aguda grado II o superior inducida por la radioterapia postoperatoria como tratamiento del cncer de mamas. La trolamina es una emulsin que acta mejorando la salud de la piel expuesta a radiacin reclutando macrfagos y modificando las concentraciones de distintos inmunomoduladores y es considerada agente tpico de referencia. En lo referente a la proteccin de la piel midieron el dolor, la interrupcin del tratamiento radioterpico como resultado de la dermatitis, la satisfaccin de los pacientes y la cantidad de extracto usado. En el estudio citado, 251 pacientes fueron divididas al azar en dos grupos, uno recibi trolamina (128 mujeres) y el otro el extracto de C. officinalis (126 mujeres). Las pacientes se aplicaron sus ungentos al comenzar con la radioterapia, dos veces por da o ms, dependiendo de la ocurrencia de la dermatitis y del dolor hasta completar su tratamiento. En cada paciente se evalu la toxicidad de la piel una vez por semana segn una escala preestablecida por el grupo de Radioterapia de Oncologa (ROTG). RTGO Grados de toxicidad aguda 0Sin cambios basales

1Folicular, leve eritema, descamacin seca, disminucin en sudoracin

2Brotada, eritema intenso, irregular, descamacin hmeda o edema moderado

3Descamacin seca adems de pliegues en la piel, edema

4Ulceraciones, hemorragias, necrosis.

RTGO: Grupo de radioterapia oncolgica

Los autores encontraron que la incidencia de la toxicidad aguda de grado II a III

fue 41% en el grupo que recibi Calndula y 63% en el grupo con Trolamina. 9 pacientes (7%) tratados con calndula y 20 (20%) con Trolamina presentaron toxicidad grado III. En ningn grupo observaron toxicidad de grado IV. Solamente uno de las pacientes tratadas con calndula interrumpi el tratamiento por razones no reveladas, mientras que en el grupo con Trolamina hubo 15 interrupciones: 12 a causa de la toxicidad de la piel (9%), 1 a causa de un absceso linfocitico y 2 no revelaron sus causas. No observaron reacciones alrgicas en el grupo con calndula mientras que con Trolamina 4 pacientes desarrollaron reacciones alrgicas. Encontraron que el padecimiento fue mayor para el grupo con Trolamina, este coincidi en tiempo con las semanas donde la dermatitis fue mxima y con la interrupcin del tratamiento en el grupo con Trolamina. La adherencia a la aplicacin del tratamiento fue buena, 84% de los pacientes para Calndula y 92% para el grupo que recibi Trolamina. Para medir la satisfaccin respecto a la facilidad de la aplicacin, padecimiento y alivio de la dermatitis entregaron a cada paciente un cuestionario para completar. La aplicacin del ungento fue dificultosa para el 30% de las pacientes que recibieron Calndula y 5% para Trolamina, dos pacientes dejaron de usar calndula a causa de su dificultad. El nmero de potes usado por paciente fue menor en el grupo que recibi calndula. El estudio demostr la efectividad de agentes teraputicos no esteroides en la prevencin del desarrollo de dermatitis aguda grado II o superior durante la radioterapia en cncer de pecho. El tratamiento con calndula fue significativamente superior que con Trolamina tanto en la prevencin de toxicidad de la piel como en la prevencin de alergias, interrupcin de tratamiento, satisfaccin en cuanto al alivio del dolor aunque mas difcil de aplicar que Trolamina. Fuchs y cols., 2005 (6) evaluaron la accin protectora de cremas que contenan distintos extractos de calndula y rosemary (Rosmarinus officinalis) en voluntarios sanos a quienes se les indujo dermatitis irritante de contacto usando lauril-sulfato de sodio durante 4 das consecutivos. Rosmarinum officinalis, tambin llamada romero pertenece a la familia de las Lamiaceae (Labiateae), es un arbusto de hojas perennes muy aromtico. El principio activo ms importante que poseen sus hojas y sumidades aparte una pequea cantidad de resina, es la esencia de romero. Su contenido en aceite esencial le confiere una accin tnica y estimulante sobre el sistema nervioso y circulatorio. En uso externo es antisptico, analgsico, cicatrizante y estimulante del cuero cabelludo. Se emplean decocciones de romero sobre las llagas y heridas, que se lavarn un par de veces al da con esta agua, preparada de nuevo cada vez. Por otro lado, los extractos de romero tambin poseen uso interno en afecciones del sistema digestivos (10). El efecto protector de las cremas con extractos de calendula y rosemary fue visualmente evaluado y cuantificado por mtodos no invasivos. Cuando los productos testeados fueron aplicados paralelamente a la induccin de la dermatitis, observaron un significativo efecto protector de todas la cremas preparadas. Por otro lado, cuando el tratamiento se realizo en forma secuencial, es decir, la aplicacin de la crema una vez al da durante 5 das luego de la

induccin de dermatitis, no observaron cambios respecto al control (6). Por su parte, Duran y cols., 2005 (7) demostraron el efecto del extracto de C. officinalis aplicados en forma tpica en la reepitelizacin de venas ulceradas en las piernas. Su estudio incluyo 31 pacientes divididos en dos grupos. En el primero fueron tratados 21 pacientes con 33 ulceras, aplicndose un ungento que contena extracto de calndula dos veces diarias, durante 3 semanas. El extracto fue preparado mediante una extraccin en un equipo Soxleth e incorporado en una base neutra. Al segundo grupo se le indico la aplicacin de un vendaje con solucin salina en las ulceras tambin durante 3 semanas. Encontraron que en el grupo tratado con el ungento de C. officinalis la superficie total de todas las ulceraciones haba disminuido en un 44,71% luego de las 3 semanas de aplicacin, 7 pacientes obtuvieron un epitelizacin completa. En el grupo control la superficie total de todas la ulceras solo se redujo un 14.52% luego de las 3 semanas, 4 de los pacientes obtuvieron epitelizacin completa.

TOXICIDADA pesar de que los extractos de C. officinalis son ampliamente conocidos, no hay suficiente informacin a cerca de su toxicidad. Silva y cols. (8) en el ao 2007 evaluaron la toxicidad aguda en ratones y subaguda del extracto hidroalcohlico (HEA) de C. officinalis en ratas y ratones por va oral. Tambin midieron parmetros bioqumicos y morfolgicos en ratas. Las conclusiones del estudio fueron las siguientes:

Toxicidad aguda en ratones y ratasMidieron la toxicidad de distintas dosis del extracto hidroalcohlico administradas por va oral en ratas y ratones, machos y hembras, que fueron divididos al azar en 5 grupos de 10 animales cada uno. No registraron muertes ni cambios en el comportamiento durante el periodo de observacin con dosis desde 0.625 gr/Kg hasta los 5.0 gr/Kg del extracto administrado.

Toxicidad subaguda en ratasAdministraron distintas dosis del extracto durante 30 das por va oral a ratones machos divididos en 5 grupos de 10 animales. El grupo control recibi agua destilada. Las dosis administradas fueron: 1, 10, 20 y 40 veces las usadas para obtener efecto antiinflamatorio y de cicatrizacin de heridas. Luego observaron si hubo manifestaciones de toxicidad y muerte. Adems ganancia de peso y consumo de alimento y agua diarios. No registraron muertes de ratas con dosis desde 0.025 gr/Kg hasta 1.0 gr/Kg administradas por va oral, tampoco alteraciones en el comportamiento o signos de toxicidad. Por otro lado, el consumo de agua y comida no mostr cambios en todas las dosis administradas.

TIEMPO (DIAS)

Como muestra el grfico, tampoco vieron diferencias entre el peso de las ratas del grupo control y el de las ratas tratadas con las dosis administradas.

Anlisis hematolgicoEfecto del extracto hidroalcohlico de C. officinalis (HAE) (0.025, 0.25, 0.5 y 1.0 g/kg) por va oral en parmetros hematolgicos en ratas Wistar testeadas durante 30 das consecutivos. Estimaron la frmula sangunea y los siguientes parmetros: MCV: Volumen corpuscular medio; MCH: Hemoglobina corpuscular media; MCHC: Concentracin de hemoglobina corpuscular media, WBC: clulas blancas sanguneas. Se midieron valores representativos de la media SEM (n= 10 por grupo). El perfil hematolgico no mostr diferencias significativas entre el control y grupos tratados, excepto para el recuento de glbulos rojos, volumen corpuscular medio, hemoglobina corpuscular media, eosilfilos y monocitos. Sin embargo todos los valores entran dentro del rango de valores de referencia.

Anlisis bioqumicoEfecto del extracto hidroalcohlico de C. officinalis (HAE) (0.025, 0.25, 0.5 y 1.0 g/kg) por va oral en parmetros bioqumicos en ratas Wistar testeadas durante 30 das consecutivos. PARAMETROS CONTROLHAE 0.025 g/kg HAE 0.25 g/kg HAE 0.5 g/kg HAE 1.0 g/kg

Glucosa (mg/dl) BUN (mg/dl) Creatinina (mg/dl) AST (U/L) ALT (U/L) Colesterol total (mg/dl) Triglicridos (mg/dl ) Fosfatasa alcalina (U/L) Bilirrubina total (mg/dl) Bilirrubina directa (mg/dl) Protenas totales (g/dl) Albumina (g/dl) Globulina (g/dl)

62.43.7 38.71.7 0.450.02 246.39.6 48.33.3 62.42.3 91.97.4 135.710.8 0.20.02 0.10.01 7.10.1 1.50.1 5.60.1

70.83.6 39.31.8 0.490.03 215.618.7 51.43.7 71.54.1 87.512.7 120.711.4 0.210.02 0.110.01 7.00.2 1.50.2 5.50.2

72.04.6 52.00.8* 0.50.04 201.414.1 76.45.1* 66.45.3 11615.7 121.610.1 0.230.02 0.110.01 7.00.1 1.60.1 5.50.1

77.86.1 53.53.2* 0.530.02 225.034.4 69.42.3* 74.01.8 67.76.7 127.012.9 0.220.02 0.120.02 7.20.3 1.60.1 5.60.1

72.06.7 58.30.10* 0.480.04 252.021.6 67.03.6* 73.46.6 126.526.3 115.08.3 0.210.02 0.10.02 7.00.1 1.50.1 5.00.1

BUN: Urea en sangre; AST: Aspartato amino transferasa; ALT: Alanina amino transferasa Valores representativos de la media SEM (n= 8-10/grupo) *diferencia significativa desde el grupo control (Anova seguido por Newman-Keuls, P