Citometría de-flujo-
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La técnica de citometría de flujo
como herramienta inmunológica y su
aplicación en el diagnóstico clínico
Zaida I. FelicianoAida M. VegaYainary SegarraDavid G. MendozaBiol 4009 LB1 Dr. Anibal J. Valentín
Objetivos
• Explicar la técnica de citometría de flujo
• Aplicación de la técnica en LLA
• Explicar la importancia de CMF en la detecciónLLA
Citometría de flujo• ¿Qué es la citometría de flujo?
• Capacidad de medir múltiples párametrocelulares
• Técnica clásica utilizada.
• Amplia utilidad en las ciencias.
Citometría de flujoFluorocromos
• Absorbe luz a una determinadalongitud de onda y emite a unasuperior
• Se utilizan unidos a anticuerposespecíficos
• Células en suspensiónalineadas una a una frente a un haz luminoso
• Información:
▫ Originada por la dispersiónde la luz
▫ Generada por la emisión de la luz de los fluorocromos
Citómetro de flujo
Partes fundamentales
• Rayo láser
• Sistema de flujo
• Detectores lumínicos y fluorescentes
• Sistema electrónico de registro de información
Mecanismo de función
Análisis de datos
• Histograma
Análisis de datos
• Gráficos de puntos (Dot plots)
Análisis de datos
• Gráficos de puntos (Fluorescencia)
Parámetros Analizados por Citometría de Flujo
Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. vol.17 no.1 México mar. 2004
Aplicaciones Clínicas
• Diagnóstico basado en el análisis celular
• Aplicaciones pronósticas
• Evaluación y monitorización del tratamiento
Citometría de flujo en la evaluación
de enfermedad mínima residual en
leucemia linfoblástica aguda
Citometría de Flujo en la evaluación de EMR
• EMR - cantidad pequeña de células malignas circulantes o en ganglios linfáticos.
• Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) Resultado: cambios moleculares y celulares
Expresan perfiles anormales de marcadores celulares
Marcadores moleculares
• Combinación de marcadoresmoleculares que identifican los inmunofenotipos en pacientescon LLA
Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012
Citometría de Flujo en la evaluación de EMR
• Las células se incuban con los anticuerpos monoclonales adecuados.
• Se reconocen los antígenos expresados (células leucémicas y células normales)
• Expresión diferencial
Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012
Acta Pediátrica de México Volumen 33, Núm. 4, julio-agosto, 2012
Aplicación de otros marcadores en la
detección de EMR
Marcadores utilizados paradetecnción EMR
Porcentaje de detección de LLA en células B
TDT/ CD10/ CD19 78%
CD10/CD20/CD19 64%
CD34/CD38/CD19 56%
CD34/CD22/CD19 46%
CD19/ CD34/ CD45 22%
Aplicación de otros marcadores en la
detección de EMR
• TdT/ CD7/cyCD3b – para LLA-T
• Permiten vigilar la presencia de EMR en cualquier fase.
• Alta especificidad de detección de célulasleucémicas.
Importancia de CMF en la detección
LLA
• Método accesible.
• Prueba específica
• Cuantificación directa y precisa de las célulasleucémicas residuales
• Identifica células muertas
• Evalúa el estado de las células hematopoyéticasnormales.
Conclusión
• Técnica rápida, altamente sensible y específica
• Permite la cuantificación directa y precisa de las células leucémicas residuales
• Es posible realizarla en todos los casos estudiados
Referencias
• Juárez-Velázquez R, Pérez-Vera P.Citometría de flujo en la evaluación de enfermedad mínima residual en leucemia linfoblástica aguda. Acta Pediatr Mex 2012;33(4):198-206.
• http://www.medigraphic.com/pdfs/iner/in-2004/in041g.pdf
• Koh DN, Park M, Kim BE, Im HJ, Park CJ, Jang S y cols. Prognostic significance of minimal residual disease detected by a simplified flow cytometric assay during remission induction chemotherapy in children with acute lymphoblastic leukemia. Korean J Pediatr 2010;53(11):957-64.
• http://www.medigraphic.com/pdfs/actpedmex/apm-2012/apm124g.pdf
• Grimwade D, Vyas P, Freeman S. Assessment of minimal residual disease in acutemyeloid leukemia. Curr Opin Oncol 2010;22(6):656-63.
• van der Velden VH, van der Sluijs-Geling A, Gibson BE, te Marvelde JG, HoogeveenPG, Hop WC y cols. Clinical significance of flow cytometric minimal residual disease detection in pediatric acute myeloid leukemia patients treated according to theDCOG ANLL97/MRC AML12 protocol. Leukemia 2010;24(9):1599-606.