cypa
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Resumen narrativo Resultados finales Medios de verificación Problema Poco conocimiento de métodos para la incorporación de aminoácidos no naturales en proteínas para la expansión del código genético. 20 aminoácidos canónicos Objetivo General Expandir el código genético mediante la incorporación química y la incorporación selectiva por presión. Objetivos específicos Insertar un aminoácido no natural mediante un aminoacetil ortogonal tRNA sintetasa y un tRNA. La incorporación de un aminoácido no natural en una cadena polipeptidica se realiza colocando el aa no natural en el medio de crecimiento de una determinada celula. La cual es reconocida por un aminoacil- tRNA sintetasa ortogonal junto con una tRNA ortogonal (a manera de “engaño”), al aminoácido no natural es decodificado en el ribosoma durante la traducción y posteriormente liberado formando parte de una cadena polipeptidica. Xie J. & Schultz P.G. A chemical toolkit for proteins – an expanded genetic code. Nature Rev. Mol Cell Biol 7, 775- 782 (2006) Xie, J. M. & Schultz, P. G. An expanding genetic code. Methods 36, 227-238 (2005)
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Resumen narrativo Resultados finales Medios de verificación
ProblemaPoco conocimiento de métodos para la incorporación de aminoácidos no naturales en proteínas para la expansión del código genético.
20 aminoácidos canónicos
Objetivo GeneralExpandir el código genético mediante la incorporación química y la incorporación selectiva por presión.
Objetivos específicos Insertar un aminoácido no natural mediante un aminoacetil
ortogonal tRNA sintetasa y un tRNA.
La incorporación de un aminoácido no natural en una cadena polipeptidica se realiza colocando el aa no natural en el medio de crecimiento de una determinada celula. La cual es reconocida por un aminoacil- tRNA sintetasa ortogonal junto con una tRNA ortogonal (a manera de “engaño”), al aminoácido no natural es decodificado en el ribosoma durante la traducción y posteriormente liberado formando parte de una cadena polipeptidica.
Xie J. & Schultz P.G. A chemical toolkit for proteins – an expanded genetic code. Nature Rev. Mol Cell Biol 7, 775- 782 (2006)Xie, J. M. & Schultz, P. G. An expanding genetic code. Methods 36, 227-238 (2005)
Identificar la función de CYPA tras la modificacion post- traduccional por acetilación
La ciclofilina esta encargada del control de la inmunosupresión y la infección viral. CYPA es objetivo del inmunosupresor ciclosporina. El complejo CYPA-ciclosporina promueve la supresión del sistema inmune.
Mediante la acetilación de la CYPA a las Lisina 125. De esta manera la afinidad por ciclosporina decrece. Por lo tanto no hay inmunosupresión
Choudhary, C. et al. Lysine acetylation targets protein complexes and co-regulates major cellular functions. Science 325, 834–840 (2009).
Lammers, M., Neumann, H., Chin, J. W. & James, L. C. Acetylation regulates cyclophilin A catalysis, immunosuppression and HIV isomerization. Nature Chem. Biol. 6, 331–337 (2010).Reports site-specific acetylation of cyclophilin A and structural insights into the interactions between cyclophilin A and cyclosporine, and cyclophilin A and HIV capsid, using X-ray
crystallography.
MATRIZ PARA LOS SEMINARIOS DE BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR.2015-II
Título del Seminario: Diseño de proteínas: aplicaciones para la expansión del código genético en la biología celular.
Fecha:25/09/15
