DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE GLUCOSA EN ALMIDN

Alfaro Molina Willy Javier1, Choque Alegre Devora Lizeth1, Paredes Aari Melanie Shirley1, Uztegui Ibez Mara del Rosario1.1Programa Profesional: Farmacia y Bioqumica, Facultad de Ciencias Farmacuticas, Bioqumicas y Biotecnolgicas, Campus U.C.S.M., Arequipa Per.

1. RESUMENEste proyecto consisti en la produccin de glucosa a partir de almidn, utilizando la hidrlisis enzimtica. Para ello se probaron muchas variables como enzimas obtenidas de Aspergillus niger, Bacillus subtilis y Aspergillus oryzae, a diferentes temperaturas, pH y concentraciones de sustrato, y se estandarizo condiciones de proceso, permitiendo que sirvan como parmetro, para el diseo tanto del proceso como de los equipos necesarios para industrializar la produccin de la glucosa, utilizando como sustrato el almidn de yuca producido en el Cauca. Esta hidrlisis de almidn de yuca (Manihot sculenta Crantz) producido en el Departamento del Cauca por la Cooperativa de Rallanderos (COPRACAUCA), con enzimas comerciales alfa-amilasa BAN 480 de Bacillus amyloliquefaciens y amiloglucosidasa AMG 300 L de Aspergillus nger. Despus de realizada la hidrlisis completa del almidn el jarabe se filtr para ser sometido a tratamiento trmico de 85 C por 5 minutos, se concentr y cristalizo obteniendo un producto con un valor Dextrosa Equivalente (DE) de cercano a 90%.

PALABRAS CLAVES: Almidn, amilosa, amilopectina, hidrlisis enzimtica, alfa amilasa, glucoamilasa y Glucosa.

2. ABSTRACTThis project was going to production the glucose from starch, using the enzymatic hydrolysis. For it many variables like enzymes obtained from Aspergillus niger, Bacillus subtilis y Aspergillus oryzae, to different temperatures, pH and concentrations of substrate and giving to conditions standar for the process, allowing that serve like parameter, for the design the process as of the equipment necessary to industrialize the production of the glucose, using like substrate the starch of yucca produced in the Departamento del Cauca. This starch hydrolysis of yucca (Manihot sculenta Crantz) produced in the Department of the Cauca by the Cooperative of Rallanderos (COPRACAUCA), with commercial enzymes alpha-amylase BAN 480 of Bacillus amyloliquefaciens and amiloglucosidasa AMG 300 Ls of Aspergillus Niger. After made complete hydrolysis of the starch the syrup filter to have been put under heat treatment of 85 C by 5 minutes, The concentrate was crystallized obtaining a product with an equivalent dextrose (DE) near to 90%.

KEY WORD: Starch, amylose, amilopectine, enzymatic hydrolysis, alpha-amylase, gluco-amylase, glucose.

3. INTRODUCCINLa yuca (Manihot sculenta) es una planta originaria de la Amrica tropical. Los principales pases productores son Brasil, Zaire, Nigeria e Indonesia (1).La yuca, uno de los productos tradicionales de la agricultura nacional, se convirti en fuente bsica del desarrollo econmico y social en el norte del Cauca generando un perfil industrial que beneficia directamente a casi 28 mil e indirectamente a miles de personas ms. Es as como en el norte del Cauca se encuentran 170 rallanderas con capacidad de procesamiento de 1.000 - 2.500 Kg. de yuca fresca/da. De 100 Kg. de yuca fresca, se producen 20 Kg. de almidn, 6.5 Kg. de afrecho (subproducto de mediana finura constituido por fibra y porciones de races) y 1.5 Kg. de mancha. Estos volmenes de produccin de almidn benefician al sector agrcola al dar un valor agregado a la yuca, pero al mismo se le puede dar un mayor valor si se lo somete a un proceso de transformacin nivel 2, como el de la hidrlisis enzimtica para la produccin de glucosa. (2)La hidrlisis del almidn se puede hacer por dos vas: cida o enzimtica. La hidrlisis cida del almidn a glucosa es una tcnica que tiene muchas desventajas: formacin de productos no deseables y flexibilidad muy pobre (el producto final slo se puede modificar cambiando el grado de hidrlisis), por ltimo es necesaria que el equipo resista el cido y las temperaturas requeridas durante el este proceso. La hidrlisis enzimtica en los ltimos 30 aos ha desplazado la hidrlisis cida, debido a que se dispone de nuevas enzimas. Hoy en da la mayor parte de la hidrlisis de almidn se realiza usando enzimas, ya que esta tcnica presenta ventajas como: control de la formacin de productos no deseables y mayor flexibilidad del producto.La alfa-amilasa (Alfa 1,4-D- Glucan Glucano-hidrolasa) hidroliza los enlaces glucosdicos alfa-1,4 de los polisacridos que poseen 3 o ms unidades de D-glu cosa en unin alfa-1,4. El ataque se hace en forma no selectiva (tipo endoenzima) sobre varios puntos de la cadena simultneamente, aunque los primeros productos de la hidrlisis son siempre oligosacridos de 5-7 unida-des de glucosa, o un nmero mltiplo. La amiloglucosidasa (Alfa-1,4- D-Glucan glucohidrolasa) es una exohidrolasa tambin conocida como glucoamilasa, que hidroliza los enlaces glucosdicos alfa-1,4 y alfa-1,6 de la amilosa y la amilopectina separando unidades de glucosa a partir del extremo no reductor de la cadena (3).

GELIFICACIN: Los grnulos de almidn son insolubles en agua fra, pero pueden contener agua al aumentar la temperatura, es decir los grnulos de almidn sufren el proceso denominado gelatinizacin o gelificacin. Durante la gelatinizacin se produce la lixiviacin de la amilosa, la gelatinizacin total se produce normalmente dentro de un intervalo ms o menos amplio de temperatura, siendo los grnulos ms grandes los que primero gelatinizan.Los diversos estados de gelatinizacin pueden ser determinados. Estos estados son: la temperatura de iniciacin (primera observacin de la prdida de birrefrigencia), la temperatura media, la temperatura final de la prdida de birrefringencia (TFPB, es la temperatura a la cual el ltimo grnulo en el campo de observacin pierde su birrefringencia), y el intervalo de temperatura de gelatinizacin.Al final de este fenmeno se genera una pasta en la que existen cadenas de amilosa de bajo peso molecular altamente hidratadas que rodean a los agregados, tambin hidratados, de los restos de los grnulos.

Tipo de almidn

MazTrigo

Amilosa27%24%

Forma del grnuloAngular poligonal, esfricoEsfrico o lenticular

Tamao5-25 micras11-45 micras

Temperatura de gelatinizacin88-90C58-64C

Caractersticas del gelTiene una viscosidad media, es opaco y tiene una tendencia muy alta a gelificar.Viscosidad baja, es opaco y tiene una alta tendencia a gelificar.

Anlisis de la Raz

La raz de la yuca (Foto 2) se compone de tres tejidos: el periderma (cascarilla), el parnquima cortical (corteza) y el parnquima interior (Figura 1).

Periderma o cascarilla

Parnquima cortical

Parnquima interior

Figura 1. Corte transversal de la raz de yuca.

El 80% del peso fresco de la raz, aproximadamente, corresponde al parnquima o pulpa, que es el tejido en que la planta almacena el almidn.

El contenido de materia seca de la raz de yuca flucta entre el 30% y el 40%.

La materia seca del parnquima est constituida, en su mayor parte (90% a 95%), por la fraccin no nitrogenada, es decir, por carbohidratos (almidn y azcares).

El resto de esta materia seca corresponde a fibra (1% a 2%), grasas (0.5% a 1.0%), cenizas o minerales (1.5% a 2.5%) y protena (2.0%).

El almidn representa, adems, la mayor parte de los carbohidratos (96%) y es, por tanto, el principal componente de la materia seca de la raz.

Las variedades cultivadas para uso industrial deben tener un alto contenido de almidn (Wheatley, 1991).

Foto 2. Races de yuca ya cosechadas. Ntese la corteza externa parcialmente desprendida.

OBJETIVOS

Incrementar la produccin de glucosa en el almidn de yuca. Poder sacar el rendimiento de proceso de la obtencin de glucosa a partir del almidn de yuca (Manihot Sculenta). Mejorar las tcnicas de produccin de los derivados del almidn de yuca.

4. MATERIALES Y REACTIVOS

Micropipeta de 10 -100 ml Bureta graduada Erlenmeyers de 50, 100, 250 y 500 ml Papel filtro Pipetas volumtricas de 5, 10, 25 ml Soportes Balones volumtricos Vasos de precipitado Cpsulas de porcelana Campana de desecacin Mortero y piln, Tips para micropipeta otros Solucin de yodo diluida (1:5) NaOH al 1% y 40% HCl al 1% Solucin de Fehling A, reactivo de Fehling B, Indicador de azul de metileno al 1% H2SO4 0.25N NaOH 0.25N Soluciones buffer de 4 y 7 Papel indicador universal Almidn soluble Tampn acetato 0.1M pH: 3 Buffer CaCl2 NaCl NaH2PO4 NaHPO4

EQUIPOS:

Agitador magntico Balanza analtica Bao termosttico Rotaevaporador Estufa Mufla Extractor Soxhlet Refractmetro Equipo Kjeldahl Nevera Espectrofotmetro.

METODOS DE ANALISIS:

Determinacin de humedad Determinacin de ceniza Determinacin de grasa Determinacin de protena (Mtodo Kjedhal) Determinacin de la fibra bruta (Mtodo segn AOAC 9.008) Determinacin de carbohidratos (Mtodo de Diferencia) Relacin amilosa/amilopectina (segn el CIAT)

5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Caracterizacin de las enzimasPara realizar la hidrlisis del almidn, la industria Novo Nordisk, productor de enzimas, suministro dos tipos de enzimas diferentes con las que se realizaron las pruebas de laboratorio. Cada enzima tiene rangos de funcionamiento ptimos.En la caracterizacin de las enzimas utilizadas en la hidrlisis de almidn de yuca (BAN, AMG), se estudi el comportamiento de la actividad de las mismas con relacin al pH y a la temperatura, siendo la actividad de cada enzima la variable respuesta al ensayo.De esta manera se encontraron las condiciones ptimas de las enzimas. (Articulo "CARACTERIZACION ENZIMATICA DE ALFA-AMILASA Y GLUCOAMILASA FUNGICA EN LA HIDR-LISIS DE ALMIDON DE YUCA (Manihot sculenta). Grupo de Investigacin Asubagroin, Universidad del Cauca. 2003.)

Cintica de las reaccionesDespus de obtener las condiciones de pH y temperatura adecuadas de cada enzima, se determin la cintica de la reaccin de cada enzima para establecer los tiempos ptimos de cada reaccin.Cintica de la reaccin con alfa-amilasa BAN 480 de Bacillus amyloliquefaciensSe prepar una solucin al 30% en peso de almidn de yuca, se agreg buffer fosfato 0.1 M hasta para ajustar el pH en un valor de 6.0; seguidamente, se agreg la cantidad de la enzima -amilasa requerida para la relacin enzima/sustrato fuera del 0.1% en peso. Se ajust la temperatura a 70 C y se dej reaccionar durante 150 min. Conservando estables las variables anteriormente mencionadas. Se tomaron muestras en intervalos de 15 minutos y se determin la concentracin del almidn presente en la solucin.Cintica de la reaccin con amiloglucosidasa AMG 300 L de Aspergillus ngerA la solucin de almidn se le agreg, CaCl2 y buffer fosfato 0.1 M hasta ajustar el pH e un valor de 6.0; seguidamente, se agreg la cantidad de la enzima -amilasa requerida para la relacin enzima/sustrato fuera del 0.1% en peso. Se ajust la temperatura a 70 C y se dej reaccionar durante 120 min conservando estables las variables anteriormente mencionadas.Posteriormente, se ajust de nuevo el pH a 4.8 y manteniendo siempre la temperatura constante (65 C), se agreg enzima glucoamilasa en una proporcin enzima/sustrato de 0.25%. Se dej reaccionar la mezcla durante 43 horas continuas tomando muestra durante intervalos determinados para establecer la produccin de glucosa.Desarrollo de la hidrlisis enzimticaSe prepar una muestra de almidn al 30 % en peso, se le agreg acetato de sodio buffer 0.1 M para ajustar el pH y la cantidad de enzima a-amilasa requerida para que la relacin enzima/sustrato fuera la adecuada; se ajust la temperatura y se dej reaccionar durante el tiempo apropiado, conservando estables la variables anteriormente mencionadas.Terminado el tiempo de reaccin se inactiv la enzima con cido clorhdrico 0.1 N llevando el pH hasta 3, garantizando tambin la precipitacin de la protena presente en la solucin.Posteriormente, se ajust de nuevo el pH y la temperatura de acuerdo con los resultados obtenidos en la caracterizacin de la glucoamilasa, se agreg esta enzima en la dosis ptima y se dej reaccionar durante el tiempo necesario para una adecuada interaccin entre enzima/ sustrato. Se inactivo la enzima a 80 C por 5 minutos.Refinacin cristalizacin y purificacinLuego de finalizada la reaccin de hidrlisis completa del almidn con - amilasa y glucoamilasa, el jarabe obtenido se filtr en tres etapas manteniendo la temperatura a 50 C; la primera se efectu a vaco con filtro de dimetro de malla de 20 , la segunda a vaco con un filtro de 5 y tierra de diatomceas y la tercera a vaco con un filtro de 5 y carbn activado.El jarabe se someti a tratamiento trmico cuyas condiciones fueron: 85 C durante 10 minutos. Este procedimiento se realiz garantizando una agitacin continua para evitar que el jarabe se quemara en la pared interior del recipiente de esterilizacin.Inmediatamente terminado el tratamiento trmico, el jarabe se concentr en un rotaevaporador hasta lograr el 78% en peso de slidos con vaco (92 mm Hg.) para alcanzar la ebullicin del agua a 50C, la cual es inferior a la temperatura mxima recomendada, 65 C, para evitar las reacciones de pardeamiento del tipo Maillad.El jarabe a 50 C se coloc en un rotaevaporador, en un bao mara a 15 C. De esta forma la temperatura se baj de 50 C hasta 20 C, sta se mantuvo durante 52 ho-ras, en las cuales se mantuvo el jarabe en agitacin, a 20 rpm. Seguidamente se baj la temperatura del jarabe hasta 10 C, por imersin en un bao mara a 8 C, con agitacin a 20 rmp.Finalizando este tiempo, parte de los slidos presentes en la solucin cristalizaron como dextrosa.La cristalizacin se realiz lentamente con el fin de garantizar la formacin de cristales de gran tamao, los cuales son fciles de separar de la solucin residual. En el proceso industrial, la cantidad restante de solucin se reprocesa y es fuente adicional de glucosa.Para separar los cristales de la solucin se utiliz el mtodo de filtracin. La purificacin de los cristales se efectu lavndolos con el 10% de agua destilada y desionizada respecto al peso de los slidos cristaliza-dos. Se realiz un secado posterior de los cristales hasta una humedad del 8.5% en peso que est por debajo de la humedad de equilibrio para este producto que es del 9.1%, aproximadamente (4).Anlisis del Producto FinalPara el anlisis y caracterizacin del producto se utiliz Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC), por ser sta una tcnica que permite determinacin directa y rpida de azcares, incluyendo oligosacridos, con una mnima preparacin de muestra y brindando una precisin igual a la de otras tcnicas cromatogrficas (cromatografas de: gas, papel, capa delgada, particin lquida, intercambio inico y permeacin con gel). El anlisis fue hecho bajo las siguientes especificaciones: Columns:Shodex AFpak AGO-494 Eluent:Acetonitrile - water (80/20) Flow rate:0.2mL/min.(Eluent) 0.4mL/min.(Reagent) Detector:Shodex CL Column temp.:37deg-C

6. RESULTADOS Y DISCUSIN

Composicin del almidn de yucaSegn el anlisis proximal el almidn de yuca (Cuadro 1.) utilizado como materia prima en la hidrlisis enzimtica para produccin de glucosa, posee una humedad por encima de la reportada como parmetro por el ICONTEC para almidones. Una humedad del 16.42%, aunque no afecta directamente el rendimiento del pro-ceso planteado en este trabajo, es un riesgo en el almacenamiento del almidn, ya que se genera una actividad de agua (Aw) propicia para el ataque de microorganismos, que no slo afecta la calidad de este, sino tambin la calidad del producto final por la acumulacin de pirgenos (5).Los contenidos de protena, cenizas y fibra, tambin, se encuentran por encima de los parmetros establecidos por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas, sealando una falta de refinamiento del producto o fallas en el proceso de extraccin. El contenido de amilosa en el almidn fue del 18 % valor superior a los normalmente sealados para la yuca por otros autores, quienes dan un rango entre 15 y 17% (6).

CUADRO 1. Anlisis proximal almidn de yuca.

-amilasaglucoamilasa

pH6.05.5

Temperatura70C60C

Concentracin0.1%0.25%0

Enzima( g enz./g sust.)(g enz./g sust.)

3.3 Cintica de las reacciones CUADRO 2. Cintica de la a-amilasa

GRFICO 1: Concentracin sustrato vs. Velocidad

Caracterizacin de las enzimasSegn el artculo "CARACTERIZACION ENZIMATICA DE ALFA-AMILASA Y GLUCOAMILASA FUNGICA EN LA HIDRLISIS DE ALMIDON DE YUCA (Manihot sculenta). Grupo de Investigacin Asubagroin, Universidad del Cauca 2003." Las condiciones ptimas de operacin de las enzimas en la hidrlisis son:Cintica de la reaccin con alfa-amilasa BAN 480 de Bacillus amyloliquefaciensA continuacin se presentan los datos obtenidos (Cuadro 2) y el comportamiento del sustrato durante la reaccin (Grfico 1). Teniendo en cuenta el sustrato disponible en todo momento para la hidrlisis, se efectu el anlisis de la reaccin de la hidrlisis siguiendo la teora de Michaelis-Menten.Para aplicar la teora cintica de Michaelis- Menten es necesario presuponer que nada del producto se revierte al sustrato inicial.

Teniendo en cuenta que la velocidad cataltica es igual al producto de la concentracin del complejo ES y k3; la velocidad de formacin de ES es igual al producto de E, S y k1; la velocidad de descomposicin de ES es igual al producto ES por la suma de k2 y k3.Bajo condiciones de estado estacionario, se igualan las expresiones y se obtiene:

La velocidad mxima se obtiene cuando los centros de la enzima se encuentran saturados de sustrato.

En este momento la expresin {[S] / ([S] + [Km] ) } se aproxima a 1. Del cuadro 2, se tiene que la velocidad mxima es aproximadamente:

Se determin entonces, que la reaccin es de primer orden, donde la velocidad es exactamente proporcional a la concentracin de un reaccionante. De acuerdo con esto, se estableci que tiempo de reaccin adecuado es de dos horas para obtener una concentracin de almidn remanente del 9.1% del almidn inicial.Cintica de la reaccin con amiloglucosidasa AMG 300 L de Aspergillus ngerTeniendo en cuenta que el sustrato disponible en todo momento para la hidrlisis, es la diferencia de los slidos totales en la solucin y la fraccin de glucosa existente en un tiempo dado de reaccin, se efectu el anlisis de la reaccin de la hidrlisis siguiendo la teora de Michaelis-Menten (Cuadro 3).Para aplicar la teora cintica de Michaelis- Menten es necesario presuponer que nada del producto se revierte al sustrato inicial.

velocidad de formacin de ES es igual al producto de E, S y k1; la velocidad de descomposicin de ES es igual al producto ES por la suma de k2 y k3.Bajo condiciones de estado estacionario, se igualan las expresiones y se obtiene:

La velocidad mxima se obtiene cuando los centros de la enzima se encuentran saturados de sustrato.

En este momento la expresin { [S] / ([S] + [Km ] ) } se aproxima a 1. Del cuadro 3, se tiene que la velocidad mxima es aproximadamente:

CUADRO 3. Cintica de la glucoamilasa

GRFICO 2. Concentracin sustrato vs. Velocidad reaccin con glucoamilasa

Segn la cintica realizada la reaccin es de primer orden y el tiempo de reaccin adecuado es de 40 horas para obtener una concentracin de glucosa del 90.6% de los slidos presentes en la solucin. A partir de este momento el incremento en la produccin de glucosa es muy bajo (menor del 2%) a costo de un gran periodo de tiempo de reaccin adicional y bajo el riesgo de aparicin de los indeseables productos de reversin.Desarrollo de la Hidrlisis EnzimticaAl observar los resultados obtenidos en las caracterizaciones de cada una de las enzimas, se decidi realizar la dextrinizacin (reaccin con la -amilasa) y la hidrlisis (reaccin con glucoamilasa) bajo las siguientes condiciones:Reaccin con la -amilasa: pH: 6.0 Temperatura: 70 C Concentracin de enzima: 0.1% (g enz./g sust.) Tiempo de reaccin: 120 min. Reaccin con Glucoamilasa: pH: 5.8 Temperatura: 65 C Concentracin de enzima: 0.25% (g enz./g sust.) Tiempo de reaccin: 36 h.La dextrinizacin y la hidrlisis del almidn se realiza-ron en un solo proceso.A la solucin de almidn al 30% en peso se le agreg, CaCl2 y buffer fosfato 0.1 M hasta ajustar el pH en un valor de 6.0; seguidamente, se agreg la cantidad de la enzima -amilasa requerida para la relacin enzima/ sustrato fuera del 0.1% en peso. Se ajust la temperatura a 70 C y se dej reaccionar durante 120 min conservando estables las variables anteriormente mencionadas. Terminado el tiempo de reaccin se inactiv la enzima con cido clorhdrico 0.1 N llevando el pH hasta 3, garantizando tambin la precipitacin de la protena presente en la solucin.Posteriormente, se ajust de nuevo el pH a 4.8 y para mantenerlo se adicion acetato de sodio buffer 0.1M y manteniendo siempre la temperatura constante, 65 C, se agreg enzima glucoamilosa en una proporcin enzima/sustrato de 0.25%.Refinacin cristalizacin y purificacin del jarabeLuego de finalizada la reaccin de hidrlisis completa del almidn con - amilasa y glucoamilasa, el jarabe obtenido se filtr en tres etapas manteniendo la temperatura a 50 C; la primera se efectu a vaco con filtro de dimetro de malla de 20 , la segunda a vaco con un filtro de 5 y tierra de diatomceas y la tercera a vaco con un filtro de 5 y carbn activado. La cantidad de tierra de diatomceas y carbn activado, utilizado correspondi al 10% de la solucin a filtrar, para cada una de ellas.El jarabe se someti a un proceso tratamiento trmico bajo las condiciones descritas anteriormente. Inmediatamente terminado el tratamiento trmico, el jarabe se concentr hasta lograr el 78% en peso de slidos, segn la metodologa planteada.El jarabe concentrado se someti a enfriamiento para obtener la glucosa cristalizada. Finalizando el tiempo de cristalizacin, parte de los slidos presentes en la solucin cristalizaron como dextrosa (52.4 % en peso).Por lo tanto, la cantidad cristalizada de glucosa es:Dext. crist. = 500 g soluc. X (23.2 g almidn/100 g soluc.) x 0.524 = 60.78 g glucosaLa cristalizacin se realiz lentamente con el fin de ga-rantizar la formacin de cristales de gran tamao, los cuales son fciles de separar de la solucin residual.Para separar los cristales de la solucin se utiliz el m-todo de filtracin. La purificacin de los cristales se efectu lavndolos con el 10% de agua destilada y desionizada respecto al peso de los slidos cristaliza-dos, se realiz un secado posterior de los cristales hasta una humedad del 8.5% en peso que est por debajo de la humedad de equilibrio para este producto que es del 9.1%, aproximadamente.La eficiencia del proceso es:Cant. Mx. glucosa = 500 g soluc. X (23.2 g gluc./100 g soluc.) = 116 gCant. Crist. Dextrosa = 60.78 g glucosaEficiencia del Proceso = (glucosa crist) x 100 / (gluco-sa mx. crist.) = 52.4%

ANLISIS DEL PRODUCTO FINALPara el anlisis y caracterizacin del producto se utiliz la Cromatografa Lquida de Alta Presin (HPLC), por ser sta una tcnica que permite una determinacin di-recta y rpida de azucares, con una mnima preparacin de muestra y brindando una precisin igual a la de otras tcnicas. El anlisis fue hecho en un laboratorio externo, bajo las siguientes especificaciones:

Columna: Shodex AFpak AGO-494

Efluente: Acetonitrilo - agua (80/20)

Flujo: 0.2mL/min.

Detector: Shodex CL

Temperatura: 37deg-C

La glucosa que se utiliz como patrn de comparacin tena especificaciones:Dextrosa equivalente100.0%

Humedad0.05%

Acidez (ml. NaOH 0.02N/5 g)