DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO

¿Para qué sirve el diagnóstico virológico?

Define una intervención terapéutica

Orienta un pronóstico

Monitorea la respuesta a la terapéutica

Vigilancia epidemiológica

Diagnóstico de Certeza:Estudio Virológico

Clínica:Signos y síntomas

Epidemiología:TiempoLugar

Persona

Métodos directos vs. indirectos

Métodos Procedimiento/Técnica Detección de:

Directos 1) Aislamiento en: Huevos embrionados, animales o cultivos celulares

Lesiones y/o muerteAcción citopática directa (ACP)

2) Identificación del virus (aislado o no) mediante:Inmunomarcación (IF, IP, ELISA), neutralización, FC, IHA, etc.Microscopía electrónicaHibridación, PCR, PCR en tiempo real, RFLP, secuenciación nucleotídica

Antígenos virales

Partículas viralesGenomas virales

Indirectos NeutralizaciónELISA, IFI, FC, IHA, etc.ELISA, IFI

Anticuerpos específicos:- Conversión serológica en

dos muestras pareadas- IgM específica: en muestra

única de período agudo o convalescencia temprana

Métodos de diagnóstico virológico

Obtención de las muestras

• Es necesario conocer la patogenia de cadainfección viral, las características del virus y elestadio de la enfermedad.

• Tener en cuenta normas de bioseguridad:guantes, barbijo, antiparras, camisolín, usarrecipiente estéril con tapa hermética.

Tipos de muestras

• Hisopados Nasales, faríngeos, aspirados nasofaríngeos, lavados bronquialveolares, etc.

• Hisopados de la base de las vesículas o fluido de las vesículas (lesiones de piel y mucosas).

• Sangre y suero• Orina• Materia fecal e hisopados rectales• Hisopado o biopsias de cérvix• Hisopado conjuntival o corneal• LCR• Biopsias de tejidos

Conservación y transporte• Siempre bajo normas de bioseguridad!!

• Muestras para aislamiento viral: Enviadasinmediatamente a 4°C. Las muestras de secrecionescutáneo-mucosas se deben colocar en medio detransporte Hanks.

• Muestras para diagnóstico rápido: Es recomendablela conservación y transporte a 4°C aunque no esestricto.

• Muestras para estudios serológicos: A 4°C por 1-2días y luego a -20 o -70°C.

• Muestras para estudios de biología molecular:Especial cuidado para virus con genoma de ARN ypara evitar falsos positivos o negativos.

Métodos indirectos

El fundamento del método consiste en demostrar en el suerodel paciente, la presencia de anticuerpos específicosantivirales inducidos por la infección.

• Infección pasada:

Diagnóstico del estado inmune

• Infección reciente:

Conversión serológica

IgM específica

Métodos indirectos

CONVERSIÓN SEROLÓGICA

Se define como la aparición de anticuerpos específicos contra un virus, o el aumentode su título en cuatro o más veces en dos muestras pareadas de suero, la primeraobtenida durante el período agudo (suero de fase aguda) y la segunda en laconvalecencia a los 14-21 días de la primera.

Técnicas de diagnóstico serológico

AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS

NEUTRALIZACIÓN

FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO

RIBA

WESTERN BLOTPRUEBAS

CONFIRMATORIAS

Métodos directos

Se denominan métodos directos de diagnóstico virológico a aquellos que detectan la presencia de un virus ( o alguno de sus componentes) en muestras clínicas.

Acción Citopática (ACP)

HISTOPATOLOGÍA

RABIACORPÚSCULO DE NEGRI

HPVCOILOCITOS

CMVOJO DE BUHO

SARAMPIÓNSINCICIO

HISTOPATOLOGÍA

DEL HSV

Aislamiento viral + Identificación

Aislamiento viral + Identificación

Para la identificación se puede utilizar:

1) hemadsorción,

2) hemaglutinación,

3) neutralización o

4) interferencia

Hemadsorción

• Para mixovirus y paramixovirus.

Interferencia

• Para Rubéola

Hemaglutinación

Neutralización

Detección de antígenos virales

INMUNOFLUORESCENCIA

ELISA Y RIA

Inmunoperoxidasa

Partículas virales

Genomas virales

Detección de ácidos nucleicos

Con hibridación

Con amplificación

Southern blot

Northern blot

NASBA, b-DNA

FISH

Microarray

PCR

LCR

Caracterización de los ácidos

nucleicos

Secuenciación

RFLP

EMSA

Footprinting

Fingerprinting

SSCP

PCR PARA DETECCIÓN DEL GENOMA VIRAL

RFLP PARA GENOTIPIFICACIÓN DE HBV

FILOGENIA PARA GENOTIPIFICACION

DE HCV

REAL TIME PARA DETERMINAR CARGA VIRAL

DIAGNÓSTICO DE HIV

DIAGNÓSTICO DE HIV

Diagnóstico de HIV

Diagnostico de HIV en el recién nacido

DIAGNÓSTICO DE HBV

DIAGNÓSTICO DE HCV

DIAGNÓSTICO DE EBV