HPLC
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Breve descripción de cromatografía
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HPLC
HPLC
La cromatografa lquida de alta resolucin, es en definitiva una cromatografa en fase lquida en columna a la cual se aplica una sobrepresin que permite acelerar el proceso de separacin. Su gran ventaja es la disminucin del tiempo de anlisis, aun incluso en mezclas muy complejas (productos biolgicos). Adems, permiten el anlisis de sustancias termolbiles que no podran ser manejadas por vaporizacin en un cromatgrafo de gases (se descomponen al vaporizarse). En esencia, la fase mvil lquida (constituida por un disolvente adecuado que vehicula a la muestra) se bombea a travs de un sistema de separacin compuesto por un prefiltro y una columna, esta ltima conteniendo la fase estacionaria, a una elevada presin. Por su distinta interaccin entre las dos fases, la muestra es retenida con variable intensidad, eluyendo separada de la columna.ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN MOLECULAR
Esta tcnica permite cuantificar parmetros en disolucin, en base a la absorcin que los mismos realizan a una determinada longitud de onda del espectro ultravioleta-visble (entre 100-800 nm, mas o menos). Dicha cuantificacin se rige por la ley fundamental de Lambert-Beer, en la cual se basan todos los clculos que suceden a la deteccin de la radiacin. Las distintas variaciones de los clculos empleados, se originan a consecuencia de las modificaciones del esquema bsico del proceso, constituido por: una fuente emisora policromtica, un selector de radiaciones (monocromador), un receptculo de dimensiones y material adecuado que contenga la solucin y un detector de radiacin. A su vez la solucin, contiene la muestra a analizar y un reactivo que provoca (enzimtica o qumicamente) un producto que absorba a la longitud de onda adecuada, todo en condiciones de temperatura y pH controladas. Las modificaciones antes mencionadas intentan, en cualquier caso, mantener al mnimo las interferencias que se puedan producir en el proceso. Por ello, se emplean fuentes de energa estables, reactivos que generen productos lo ms especfico posible, mediciones bicromticas o policromticas.
