Impacte de la Fragmentació de DNA es · de DNA de doble cadena. La falta de reparació dels...
1
Impacte de la Fragmentació del DNA Espermàtic en el món de la Reproducció Assistida. Cristina Macias Claraco. Grau en Biologia. Facultat de Biociències. Universitat Autònoma de Barcelona. Introducció: • Un 15% de les parelles pateixen actualment problemes de fertilitat, on el factor masculí està implicat entre 27-47% dels casos. • El factor masculí és el gran desconegut i és actualment quan s'estan invertint grans esforços en conèixer les seves implicacions en la reproducció i on la Fragmentació del DNA Espermàtic està esdevenint el gran protagonista. • Actualment els tests de Fragmentació del DNA espermàtic està introduït dins de la rutina clínica. Tècniques per mesurar la Fragmentació del DNA Espermàtic: • En aquest sentit, un estudi recent ha realitzat una comparativa entre les diferents tècniques que s’utilitzen als laboratoris, el qual conclou que l’assaig de COMETA alcalí seria el que tindria millor predicció de l’esterilitat masculina seguit per la tècnica de TUNEL, SCSA i SCD. • La tècnica de COMETA alcalí permet diferenciar els trencaments de cadena senzilla i de cadena doble del DNA, donant una informació molt valuosa. L’inconvenient és que és una tècnica molt costosa i que petites variacions als laboratoris poden donar resultats diferents. • Aquests avenços podrien ajudar en les estratègies de selecció espermàtica per realitzar TRA. Processament de les mostres seminals i selecció espermàtica: • Un recent estudi demostra que la primera fase de l’ejaculat té millor qualitat que la segona fase, amb una concentració més alta d’espermatozoides, millor mobilitat i menys fragmentació. • Un altre estudi va comparar les dues tècniques de Swim Up i Gradients de densitat, on els resultats van demostrar que amb els Gradients de densitat es recuperen espermatozoides amb menys fragmentació, amb una motilitat i morfologia superior que amb la tècnica de Swim Up. •També s’ha observat que reduint l’abstinència sexual també es redueix la fragmentació i és equivalent a la reducció obtinguda mitjançant els Gradients de densitat i les Columnes d’Annexines, això potser es degut a que els espermatozoides estan menys temps exposats als ROS. Impacte de Fragmentació de DNA Espermàtic en les Tècniques de Reproducció Assistida: Sabem que una fragmentació alta del DNA espermàtic en mostres de semen poden donar lloc a una disminució de la fertilització o implantació després de tractaments de IAH, FIV/ICSI i poden donar lloc a mala qualitat embrionària, bloqueig embrionari i avortament. El dany en el DNA de cadena senzilla permet predir el potencial de fertilització i suggereixen que el dany de DNA de doble cadena està relacionat amb el risc de patir un avortament involuntari amb el factor masculí associat. Es pensa que els avortaments de repetició estan associats a individus amb un alt índex de trencaments de DNA de doble cadena. La falta de reparació dels trencaments de DNA de doble cadena de l’espermatozoide per l’ovòcit, podria ser la causa d’aquests avortaments, per això, seria fonamental comptar amb ovòcits de bona qualitat en parelles en què el mascle mostra un perfil amb un alt índex de trencaments de doble cadena. La capacitat de reparació del oòcit és molt important i sabem que quan augmenta l’edat materna aquesta capacitat disminueix. Si s’aconsegueix establir uns protocols est{ndards en les tècniques i els resultats entre laboratoris, i es segueix avançant en les investigacions, la Fragmentació del DNA Espermàtic serà un paràmetre molt útil per valorar si existeix una infertilitat d’origen masculí. Discussió: • Actualment no existeix un gran consens entre els diferents estudis sobre la Fragmentació del DNA Espermàtic i si és un bon valor predictiu per poder assessorar a parelles amb problemes de fertilitat. • Una de les principals causes d’aquest problema és que cada laboratori utilitza diferents tècniques per mesurar Fragmentació DNA Espermàtic, obtenint discrepàncies en els resultats i llindars de normalitat . •Tampoc hi ha un consens sobre quin moment s’ha de valorar l’ejaculat: en fresc o la mostra processada i quina es la tècnica de processat o capacitació més òptima. • En la fecundació i l'èxit de l’embar{s intervenen molts factors, la Fragmentació del DNA Esperm{tic és un d’ells. Cal esmentar que tot just s’est{ començant a estudiar amb profunditat i encara hi han moltes incògnites. Referències: 1.Ribas-Maynou. J, García-Peiró A, C. Abad, M.J. Amengual, J. Navarro, and J. Benet. “Alkaline and neutral Comet assay profiles of sperm DNA damage in clinical groups”. Human Reproduction 2012. 2. Ribas-Maynou. J, A. García-Peiró, Fernandez-Encinas.A , J. Amengual, E. Prada, P. Cortés, J. Navarro, J. Benet. “Double Stranded Sperm DNA Breaks, Measured by Comet Assay, Are Associated with Unexplained Recurrent Miscarriage in Couples without a Female, 3. Esbert Algam, Margarida “Estudio de la fragmentación en el ADN Espermático en pacientes sometidos a técnicas de Reproduccíon asistida”. Tesis Doctoral a la Universitat Autònoma de Barcelona, Enero 2015. 4. Hebles M, Dorado M, Gallardo M, González-Martínez M, Sánchez-Martín P . “Seminal quality in the first fraction of ejaculate”. Syst Biol Reprod Med. 2015 Apr. 5. Morales R, Lledó B, Ortiz José A, Rodríguez-Arnedo Dori, Fabregat A, Bernabeu R. “Fragmentación del ADN espermático y su implicación en la fertilidad”. Revista Iberoamericana de fertilidad. Vol.Septiembre-Octubre 2007. Conclusions: Processat de mostres • Quina fracció de l’ejaculat has d’escollir. • Quina és la tècnica de processament més adequada el Swim Up o Gradients de Densitat. Tècnica de mesura • Quina és la tècnica més adequada per mesurar fragmentació del DNA espermàtic i quina informació ens dóna. • Establir valors consens dels paràmetres de normalitat o alteració en la fragmentació. Resultats Clínics • El fet que cada laboratori utilitzi diferents tècniques provoca que els estudis obtinguin diferents resultats i no hi hagi un consens en els resultats clínics, creant molta controvèrsia. Principals controvèrsies:
Transcript of Impacte de la Fragmentació de DNA es · de DNA de doble cadena. La falta de reparació dels...
Impacte de la Fragmentacioacute del DNA Espermagravetic en el moacuten de la Reproduccioacute Assistida
Cristina Macias Claraco Grau en Biologia Facultat de Biociegravencies Universitat Autogravenoma de Barcelona
Introduccioacute
bull Un 15 de les parelles pateixen actualment problemes de fertilitat on el factor masculiacute estagrave implicat entre 27-47 dels casos
bull El factor masculiacute eacutes el gran desconegut i eacutes actualment quan sestan invertint grans esforccedilos en conegraveixer les seves implicacions en la reproduccioacute i on la Fragmentacioacute del DNA Espermagravetic estagrave esdevenint el gran protagonista
bull Actualment els tests de Fragmentacioacute del DNA espermagravetic estagrave introduiumlt dins de la rutina cliacutenica
Tegravecniques per mesurar la Fragmentacioacute del DNA Espermagravetic
bull En aquest sentit un estudi recent ha realitzat una comparativa entre les diferents tegravecniques que srsquoutilitzen als laboratoris el qual conclou que lrsquoassaig de COMETA alcaliacute seria el que tindria millor prediccioacute de lrsquoesterilitat masculina seguit per la tegravecnica de TUNEL SCSA i SCD
bull La tegravecnica de COMETA alcaliacute permet diferenciar els trencaments de cadena senzilla i de cadena doble del DNA donant una informacioacute molt valuosa Lrsquoinconvenient eacutes que eacutes una tegravecnica molt costosa i que petites variacions als laboratoris poden donar resultats diferents
bull Aquests avenccedilos podrien ajudar en les estrategravegies de seleccioacute espermagravetica per realitzar TRA
Processament de les mostres seminals i seleccioacute espermagravetica
bull Un recent estudi demostra que la primera fase de lrsquoejaculat teacute millor qualitat que la segona fase amb una concentracioacute meacutes alta drsquoespermatozoides millor mobilitat i menys fragmentacioacute
bull Un altre estudi va comparar les dues tegravecniques de Swim Up i Gradients de densitat on els resultats van demostrar que amb els Gradients de densitat es recuperen espermatozoides amb menys fragmentacioacute amb una motilitat i morfologia superior que amb la tegravecnica de Swim Up
bull Tambeacute srsquoha observat que reduint lrsquoabstinegravencia sexual tambeacute es redueix la fragmentacioacute i eacutes equivalent a la reduccioacute obtinguda mitjanccedilant els Gradients de densitat i les Columnes drsquoAnnexines aixograve potser es degut a que els espermatozoides estan menys temps exposats als ROS
Impacte de Fragmentacioacute de DNA Espermagravetic en les Tegravecniques de Reproduccioacute Assistida
Sabem que una fragmentacioacute alta del DNA espermagravetic en mostres de semen poden donar lloc a una disminucioacute de la fertilitzacioacute o implantacioacute despreacutes de tractaments de IAH FIVICSI i poden donar lloc a mala qualitat embrionagraveria bloqueig embrionari i avortament
El dany en el DNA de cadena senzilla permet predir el potencial de fertilitzacioacute i suggereixen que el dany de DNA de doble cadena estagrave relacionat amb el risc de patir un avortament involuntari amb el factor masculiacute associat
Es pensa que els avortaments de repeticioacute estan associats a individus amb un alt iacutendex de trencaments de DNA de doble cadena La falta de reparacioacute dels trencaments de DNA de doble cadena de lrsquoespermatozoide per lrsquoovogravecit podria ser la causa drsquoaquests avortaments per aixograve seria fonamental comptar amb ovogravecits de bona qualitat en parelles en quegrave el mascle mostra un perfil amb un alt iacutendex de trencaments de doble cadena La capacitat de reparacioacute del oogravecit eacutes molt important i sabem que quan augmenta lrsquoedat materna aquesta capacitat disminueix
Si srsquoaconsegueix establir uns protocols estndards en les tegravecniques i els resultats entre laboratoris i es segueix avanccedilant en les investigacions la Fragmentacioacute del DNA Espermagravetic seragrave un paragravemetre molt uacutetil per valorar si existeix una infertilitat drsquoorigen masculiacute
Discussioacute
bull Actualment no existeix un gran consens entre els diferents estudis sobre la Fragmentacioacute del DNA Espermagravetic i si eacutes un bon valor predictiu per poder assessorar a parelles amb problemes de fertilitat
bull Una de les principals causes drsquoaquest problema eacutes que cada laboratori utilitza diferents tegravecniques per mesurar Fragmentacioacute DNA Espermagravetic obtenint discrepagravencies en els resultats i llindars de normalitat
bull Tampoc hi ha un consens sobre quin moment srsquoha de valorar lrsquoejaculat en fresc o la mostra processada i quina es la tegravecnica de processat o capacitacioacute meacutes ograveptima
bull En la fecundacioacute i legravexit de lrsquoembars intervenen molts factors la Fragmentacioacute del DNA Espermtic eacutes un drsquoells Cal esmentar que tot just srsquoest comenccedilant a estudiar amb profunditat i encara hi han moltes incogravegnites
Referegravencies 1Ribas-Maynou J Garciacutea-Peiroacute A C Abad MJ Amengual J Navarro and J Benet ldquoAlkaline and neutral Comet assay profiles of sperm DNA damage in clinical groupsrdquo Human Reproduction 20122 Ribas-Maynou J A Garciacutea-Peiroacute Fernandez-EncinasA J Amengual E Prada P Corteacutes J Navarro J Benet ldquoDouble Stranded Sperm DNA Breaks Measured by Comet Assay Are Associated with Unexplained Recurrent Miscarriage in Couples without a Female 3 Esbert Algam Margarida ldquoEstudio de la fragmentacioacuten en el ADN Espermaacutetico en pacientes sometidos a teacutecnicas de Reproducciacuteon asistidardquo Tesis Doctoral a la Universitat Autogravenoma de Barcelona Enero 20154 Hebles M Dorado M Gallardo M Gonzaacutelez-Martiacutenez M Saacutenchez-Martiacuten P ldquoSeminal quality in the first fraction of ejaculaterdquo Syst Biol Reprod Med 2015 Apr5 Morales R Lledoacute B Ortiz Joseacute A Rodriacuteguez-Arnedo Dori Fabregat A Bernabeu R ldquoFragmentacioacuten del ADN espermaacutetico y su implicacioacuten en la fertilidadrdquo Revista Iberoamericana de fertilidad VolSeptiembre-Octubre 2007
Conclusions
Processat de
mostres
bull Quina fraccioacute de lrsquoejaculat has drsquoescollirbull Quina eacutes la tegravecnica de processament meacutes
adequada el Swim Up o Gradients de Densitat
Tegravecnica de mesura
bull Quina eacutes la tegravecnica meacutes adequada per mesurar fragmentacioacute del DNA espermagravetic i quina informacioacute ens doacutena
bull Establir valors consens dels paragravemetres de normalitat o alteracioacute en la fragmentacioacute
Resultats Cliacutenics
bull El fet que cada laboratori utilitzi diferents tegravecniques provoca que els estudis obtinguin diferents resultats i no hi hagi un consens en els resultats cliacutenics creant molta controvegraversia
Principals controvegraversies
