Microscopia)* - cursosdrarodriguez.weebly.comcursosdrarodriguez.weebly.com/.../microscopio.pdf ·...
Transcript of Microscopia)* - cursosdrarodriguez.weebly.comcursosdrarodriguez.weebly.com/.../microscopio.pdf ·...
Microscopia
Resolución: capacidad de distinguir 2 objetos adyacentes como unidades distintas y separadas Magnificación: capacidad de aumentar el tamaño de una imagen en relación al tamaño real del objeto
Contraste: diferencia en color entre el espécimen y el campo de visión
Conceptos importantes:
I. Microscopia de luz
resolución: 0.2 µm
Microscopio compuesto de luz
Algunos tipos de Microscopio
• Microscopio de Campo Claro • Microscopio de Campo Obscuro • Microscopio de Contraste de Fase • Microscopio de Fluorescencia • Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM) • Microscopio Electrónico de Rastreo (SEM)
Microscopio de Luz • Secciones ultrafinas de la muestra • Magnificación máxima- 1,000X • Resolución- menor distancia discernible entre dos
puntos 0.2 µm • Fuente de iluminación–lámpara • Tinción diferencial • Micrografías a colores
Microscopio de Campo Claro (compuesto de Luz)
Microscopio de contraste de fase (microscopio de luz modificado)
microscopio compuesto de luz microscopio de contraste de fase
Se amplifica el efecto de desplazamiento de fase de aquellos rayos de luz que se refractan al pasar sobre partes densas del espécimen. De esta forma sepermite mayor contrate entre el objeto de interés y su alrededor en el campo óptico.
Microscopia de contraste de fase
células de levadura
luz contraste de fase
Contraste de Fase:
Microscopio de campo obscuro (microscopio de luz modificado)
Método por el cuál la muestra es observada sobre un fondo obscuro, al dirigir la luz por los lados de la muestra
Microscopio de Campo Obscuro
Microscopio de campo obscuro
células de levadura luz campo oscuro
Microscopio de fluorescencia Resolución similar a la del microscopio de luz, es otra técnica para lograr contraste usando tintes fluorescentes
Microscopio de fluorescencia (se utiliza un pigmento que genera luz al absorber luz de un largo de onda específico)
ventaja: permite visualizar células en un medio complejo, suelo, agua, muestras ambientales
Ejemplo: autofluorescencia, clorofila de cianobacterias
absorve luz verde (λ 546nm) emite luz roja (λ 700nm)
cianobacterias
Fluorescencia:
Microscopía Electrónica • Fuente de iluminación- haz de
electrones (por filamento de tungsteno) • Magnificación máxima 200,000X • Colores artificiales con computador
Microscopía en tres dimensiones de alta resolución Microscopia electrónica de rastreo (MER)
Se utiliza para obtener imágenes de alta resolución de partes externas de la célula o superficies de objetos
v Para observar la muestra se cubre con una capa fina de metal, y se rastrea con un rayo de electrones en presencia de un vació. v El patrón de movimiento de los electrones sobre la muestra produce la imagen
M.E. de Rastreo o Scanning (SEM):
Microscopio electrónico de transmisión (MET)
v Este tipo de microscopia se usa para visualizar estructuras internas de una célula. v Para trabajar la muestra se requiere el corte de las muestras en secciones delgadas
M.E. de Transmisión (TEM):
microscopio de luz
microscopio electrónico de rastreo
Microscopio de luz Versus Microcopio Electrónico
region nucleoide
microscopio electrónico de transmisión (resolución máxima 0.2nm)
luz → electrónico rastreo → electrónico transmisión
poder de resolución aumenta