Práctica 4 Precipitación Separación y Punto Isoeléctrico de Proteínas
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7/25/2019 Prctica 4 Precipitacin Separacin y Punto Isoelctrico de Protenas
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Instituto Politcnico Nacional
Prctica 4: Precipitacin, separacin y punto
isoelctrico de protenas.
Introduccin
La multiplicidad de grupos cidos y bsicos de una
protena hace que su solubilidad dependa de las
concentraciones de las sales disueltas, la constantedielctrica del disolvente, pH y temperatura. lgunas
protenas precipitan en condiciones en que otras a!n
estn bastante solubles. "ste e#ecto debe usarse como
base para la puri#icaci$n proteica.
"#ecto de la solubilidad de una protena.
La solubilidad de una protena en soluci$n acuosa es
sensible a las concentraciones de sales disueltas. La
concentraci$n salina se puede e%presar en trminos de
#uer&a i$nica, esta ultima se de#ine como'
I=
( Conentracionmolardeunaespecie i nica)(cargai nica)2
La solubilidad de una protena a una determinada #uer&a
i$nica vara con las clases de iones en soluci$n. "l
orden de e#icacia de los distintos iones en cuanto a su
in#luencia sobre la solubilidad proteica es bastante
similar para las di#erentes protenas y parece deberse en
primer trmino al tama(o y la hidrataci$n del i$n.
La solubilidad de una protena a ba)a #uer&a i$nica se
incrementa por lo general con la concentraci$n salina.
La e%plicaci$n del #en$meno salting in *incremento de
la solubilidad por sales+, es que a medida que se
incrementa la concentraci$n salina de la soluci$n
proteica, los contraiones adicionales recubren con
mayor e#icacia las numerosas cargas i$nicas de la
molcula de protena. on lo que se incrementa la
solubilidad de la protena. #uer&as i$nicas elevadas se
reduce la solubilidad de las protenas, como la mayora
de las sustancias. "ste e#ecto conocido como Salting
out *reducci$n de solubilidad por sales+ "s por la
competencia por las molculas que interact!an entre los
iones salinos agregados y los otros solutos disueltos.
concentraciones salinas elevadas el solvente se torna
insu#iciente para disolver tantos solutos por lo que se
reduce la actividad del solvente. Las interacciones entre
solutos se vuelve mas #uertes que los que hay entre el
soluto y el solvente. Lo que propicia la precipitaci$n de
este.
"#ectos de los solvente orgnicos
Los solventes miscibles con el agua, como la acetona y
el etanol, suelen ser buenos precipitantes de protenas
porque sus ba)as constantes dielctricas reducen e
poder de solvataci$n de sus soluciones acuosas hacia
los iones disueltos, como las protenas. La reducci$n de
la constante dielctrica por los solventes orgnicos
tambin aumenta las di#erencias entre las protenas
respecto a su comportamiento en el salting out.
Objetivos
nali&ar el e#ecto que produce la modi#icaci$n de
#actores #isicoqumicos sobre la solubilidad de las
protenas.
-eterminar el punto isoelctrico de la insulina
basndose en sus propiedades de solubilidad a
di#erentes valores de pH.
Resultados
lculos
Para el punto isoelctrico de la insulina
A
pH=pka+log
pH=4.74+log[0.20]
[0.05]
pH=5.34
Para cuando !nicamente hay concentraci$n de sal'
pH=7+1
24.74+
1
2log [0.25]
pH=9.06
-eterminaci$n del punto isoelctrico de la insulina
ubo c.
ctico
/.0 1
*ml+
cetato
de
sodio
/.0 1
*ml+
Insulina
2/34ml
pH 5bservacione
s
6 /.07 /./0 /./8ml 7.89 No precipito
0 /.6: /.6/ /./8ml 2.:8 Precipito
7 /./: /.0/ /./8ml :.72 Precipito
2 /./6 /.02 /./8ml :.20 No precipito
: /.// ./0: /./8ml ;./8 No precipito
Precipitaci$n por metales pesados
ubo lara de
-
7/25/2019 Prctica 4 Precipitacin Separacin y Punto Isoelctrico de Protenas
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huevo
6 6ml loruro
merc!rico :=
*/.0:ml+
Precipito
0 6ml Nitrato de
plata 0=
*/.0:ml+
Precipito
7 6ml cetato de
plomo 0=
*/.0:ml+
Precipito
2 6ml loruro de
bario :=
*/.0:ml+
Precipito en
menor cantidad
: 6ml loruro de
sodio :=
*/.0:ml+
Na5H /.6 ml 6ml
?egulador de
acetatos /.61
*2.9ml+
> > 6ml
5bservaciones Precipitaci$n
media
Precipitaci$n
menor
Precipitaci$n
mayor
"tanol 7ml 7ml 7ml
5bservaciones Precipitaci$n
media
Precipitaci$n
menor
Precipitaci$n
mayor
-
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