7/25/2019 Prctica 4 Precipitacin Separacin y Punto Isoelctrico de Protenas

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Instituto Politcnico Nacional

Prctica 4: Precipitacin, separacin y punto

isoelctrico de protenas.

Introduccin

La multiplicidad de grupos cidos y bsicos de una

protena hace que su solubilidad dependa de las

concentraciones de las sales disueltas, la constantedielctrica del disolvente, pH y temperatura. lgunas

protenas precipitan en condiciones en que otras a!n

estn bastante solubles. "ste e#ecto debe usarse como

base para la puri#icaci$n proteica.

"#ecto de la solubilidad de una protena.

La solubilidad de una protena en soluci$n acuosa es

sensible a las concentraciones de sales disueltas. La

concentraci$n salina se puede e%presar en trminos de

#uer&a i$nica, esta ultima se de#ine como'

I=

( Conentracionmolardeunaespecie i nica)(cargai nica)2

La solubilidad de una protena a una determinada #uer&a

i$nica vara con las clases de iones en soluci$n. "l

orden de e#icacia de los distintos iones en cuanto a su

in#luencia sobre la solubilidad proteica es bastante

similar para las di#erentes protenas y parece deberse en

primer trmino al tama(o y la hidrataci$n del i$n.

La solubilidad de una protena a ba)a #uer&a i$nica se

incrementa por lo general con la concentraci$n salina.

La e%plicaci$n del #en$meno salting in *incremento de

la solubilidad por sales+, es que a medida que se

incrementa la concentraci$n salina de la soluci$n

proteica, los contraiones adicionales recubren con

mayor e#icacia las numerosas cargas i$nicas de la

molcula de protena. on lo que se incrementa la

solubilidad de la protena. #uer&as i$nicas elevadas se

reduce la solubilidad de las protenas, como la mayora

de las sustancias. "ste e#ecto conocido como Salting

out *reducci$n de solubilidad por sales+ "s por la

competencia por las molculas que interact!an entre los

iones salinos agregados y los otros solutos disueltos.

concentraciones salinas elevadas el solvente se torna

insu#iciente para disolver tantos solutos por lo que se

reduce la actividad del solvente. Las interacciones entre

solutos se vuelve mas #uertes que los que hay entre el

soluto y el solvente. Lo que propicia la precipitaci$n de

este.

"#ectos de los solvente orgnicos

Los solventes miscibles con el agua, como la acetona y

el etanol, suelen ser buenos precipitantes de protenas

porque sus ba)as constantes dielctricas reducen e

poder de solvataci$n de sus soluciones acuosas hacia

los iones disueltos, como las protenas. La reducci$n de

la constante dielctrica por los solventes orgnicos

tambin aumenta las di#erencias entre las protenas

respecto a su comportamiento en el salting out.

Objetivos

nali&ar el e#ecto que produce la modi#icaci$n de

#actores #isicoqumicos sobre la solubilidad de las

protenas.

-eterminar el punto isoelctrico de la insulina

basndose en sus propiedades de solubilidad a

di#erentes valores de pH.

Resultados

lculos

Para el punto isoelctrico de la insulina

A

pH=pka+log

pH=4.74+log[0.20]

[0.05]

pH=5.34

Para cuando !nicamente hay concentraci$n de sal'

pH=7+1

24.74+

1

2log [0.25]

pH=9.06

-eterminaci$n del punto isoelctrico de la insulina

ubo c.

ctico

/.0 1

*ml+

cetato

de

sodio

/.0 1

*ml+

Insulina

2/34ml

pH 5bservacione

s

6 /.07 /./0 /./8ml 7.89 No precipito

0 /.6: /.6/ /./8ml 2.:8 Precipito

7 /./: /.0/ /./8ml :.72 Precipito

2 /./6 /.02 /./8ml :.20 No precipito

: /.// ./0: /./8ml ;./8 No precipito

Precipitaci$n por metales pesados

ubo lara de

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huevo

6 6ml loruro

merc!rico :=

*/.0:ml+

Precipito

0 6ml Nitrato de

plata 0=

*/.0:ml+

Precipito

7 6ml cetato de

plomo 0=

*/.0:ml+

Precipito

2 6ml loruro de

bario :=

*/.0:ml+

Precipito en

menor cantidad

: 6ml loruro de

sodio :=

*/.0:ml+

Na5H /.6 ml 6ml

?egulador de

acetatos /.61

*2.9ml+

> > 6ml

5bservaciones Precipitaci$n

media

Precipitaci$n

menor

Precipitaci$n

mayor

"tanol 7ml 7ml 7ml

5bservaciones Precipitaci$n

media

Precipitaci$n

menor

Precipitaci$n

mayor

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