UNIVERSIDAD DE ORIENTE NCLEO DE SUCRE ESCUELA DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE BIOANLISIS RELACIN ENTRE NIVELES DE PLOMO Y PARMETROS HEMATOLGICOS, HEPTICOS Y RENALES EN LOS EXPENDEDORES DE GASOLINA DELA CIUDAD DE CUMAN, ESTADO SUCRE (Modalidad: Investigacin) J ESS ALEXANDER RODRGUEZ RAMREZ TRABAJ O DE GRADO PRESENTADO COMO REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR AL TITULO DE LICENCIADO EN BIOANLISIS CUMAN, 2009 RELACIN ENTRE NIVELES DE PLOMO Y PARMETROS HEMATOLGICOS, HEPTICOS Y RENALES EN LOS EXPENDEDORES DE GASOLINA DELA CIUDAD DE CUMAN, ESTADO SUCRE APROBADO POR: __________________________ Prof. William Velsquez ASESOR ________________________ J URADO ________________________ J URADO NDICE DEDICATORIA ............................................................................................................ i AGRADECIMIENTOS ................................................................................................ ii LISTA DE TABLAS ................................................................................................... iv LISTA DE FIGURAS .................................................................................................. vi LISTA DE FIGURAS .................................................................................................. vi RESUMEN ................................................................................................................... ix INTRODUCCIN ........................................................................................................ 1 METODOLOGIA ......................................................................................................... 7 Muestras ........................................................................................................................ 7 Procesamientos de las Muestras .................................................................................... 7 Tcnicas Utilizadas ....................................................................................................... 8 Determinacin de la Concentracin de Plomo .......................................................... 8 Determinacin de la Concentracin de Creatinina .................................................... 9 Determinacin de la Concentracin deUrea ........................................................... 9 Determinacin de la Concentracin de Hemoglobina ............................................ 10 Valoracin del Hematocrito .................................................................................... 10 Morfologa sangunea ............................................................................................. 10 Contaje Leucocitario ............................................................................................... 11 Determinacin de la Concentracin de la Bilirrubina Total, Directa e Indirecta .... 11 Determinacin de la Actividad de la EnzimaAspartato Aminotranferasa (TGO) 12 Determinacin de la Actividad Enzimtica Alanina Aminotransferasa (TGP) ...... 12 Anlisis estadstico ...................................................................................................... 12 RESULTADOS Y DISCUSIN ................................................................................ 13 CONCLUSIONES ...................................................................................................... 25 BIBLIOGRAFA ........................................................................................................ 26 ANEXOS .................................................................................................................... 29 APNDICE ................................................................................................................. 40 HOJ A DE METADATOS .......................................................................................... 45 DEDICATORIA A: Mis padres, por ser siempre ejemplo de vida y fuente de inspiracin. Mis hermanos, por estar siempre a mi lado. Mi novia, por ayudarme en los momentos difciles. Cristian Maneiro, por demostrarme el poder de la amistad. Todos los que de una forma u otra fueron parte importante en la culminacin de este trabajo. Muchas gracias a todos!!!!! i AGRADECIMIENTOS A: Dios, por estar presente en cada momento de mi vida. Mi madre, simplemente por ser la mejor del mundo. Mi padre, por ser fuente de inspiracion y motivacion para ser mejor cada dia. Mis hermanos, quienes han sido apoyo y soporte a lo largo de mi vida. Mi novia Karol Bottaro, que con su amor y compresion permite mantenerme enfocado en todas mis metas. Mi amigo Cristian Maneiro, con quien he compartido ms de la mitad de mi vida,mostrndome el valor de la amistad. Mis amigos y compaeros de clases: Carmen Carpio, Rita Loero, Saray Ortiz, AntonietaHernndez,CandyPatio,DaireneMoreno,MarielysGonzlez,Daniel Gimnez, Angel Alvarez, Antonio Garantn, Eliomar Rodrguez quienes hicieron que la etapa universitaria fuera la mejor de mi vida. Mi asesor,prof. William Velsquez, por su dedicacin y por confiar en mi en tiempos dificiles. El profesor Miguel Campo, quien colabor en la realizacin de este trabajo. LaslicenciadasTerangelHiguereyyEdulisCedeo,quienesdemanera desinteresada colaboraron en la realizacin de este trabajo. El Lcdo. Alexander Barrios, quien sin ms motivacin que la que posee por la investigacin fue parte importante en la realizacin de este estudio. ElLcdo.PedroCrdova, quien fue factor motivador para la culminacin de ii esta investigacin. El profesor Jos Betancourt, por ser ejemplo a seguir. iii LISTA DE TABLAS Tabla4. Valores del factor de correlacin (R) de la prueba estadstica regresin linealsimplerelacionandolasconcentracionesdeplomoconlosparmetrosde hemoglobina, hematocrito, leucocitos, creatinina, urea, bilirrubina y transaminasas aplicada en expendedores de gasolinita expuestos y no expuestos a la combustible plumbadoyungrupodeindividuoscontrolesdelaciudaddeCuman,estado Sucre. ....................................................................................................................... 30 Tabla5.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentraciones de plomo (Pb ug/l) en expendedores de gasolina que laboran antes de la eliminacin del metal del combustible, expendedores de gasolina no expuesto alcombustibleplumbadoyungrupocontroldelaciudaddeCuman,Estado Sucre. ....................................................................................................................... 31 Tabla6.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentracionesdeHemoglobina(Hbg/l)enexpendedoresdegasolinaque laboranantesdelaeliminacindelmetaldelcombustible,expendedoresde gasolina no expuesto al combustible plumbado y un grupo control de la ciudad de Cuman, Estado Sucre. ........................................................................................... 32 Tabla7.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentraciones de Hematocrito (Hto%) en expendedores de gasolina que laboran antes de la eliminacin del metal del combustible, expendedores de gasolina no expuesto al combustible plumbado y un grupo control de la ciudad de Cuman, Estado Sucre. ........................................................................................................... 33 Tabla8.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentraciones de leucocitos (Leu) en expendedores de gasolina que laboran antes de la eliminacin del metal del combustible, expendedores de gasolina no expuesto alcombustibleplumbadoyungrupocontroldelaciudaddeCuman,Estado Sucre. ....................................................................................................................... 34 iv Tabla9.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentracionesdeCreatinina(mg/dl)enexpendedoresdegasolinaquelaboran antes de la eliminacin del metal del combustible, expendedores de gasolina no expuesto al combustible plumbado y un grupo control de la ciudad de Cuman, Estado Sucre. ........................................................................................................... 35 Tabla10.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentraciones de Urea (U mg/dl) en expendedores de gasolina que laboran antes de la eliminacin del metal del combustible, expendedores de gasolina no expuesto alcombustibleplumbadoyungrupocontroldelaciudaddeCuman,Estado Sucre. ....................................................................................................................... 36 Tabla11.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentracin Bilirrubina (mg/dl) en expendedores de gasolina que laboran antes de la eliminacin del metal del combustible, expendedores de gasolina no expuesto alcombustibleplumbadoyungrupocontroldelaciudaddeCuman,Estado Sucre. ....................................................................................................................... 37 Tabla12. Resumen de la prueba estadstica Anova simple aplicada a la actividad delaenzimaAlaninoaminotranferasa(U/l)enexpendedoresdegasolinaque laboranantesdelaeliminacindelmetaldelcombustible,expendedoresde gasolina no expuesto al combustible plumbado y un grupo control de la ciudad de Cuman, Estado Sucre. ........................................................................................... 38 Tabla13. Resumen de la prueba estadstica Anova simple aplicada a la actividad deenzimadeAspartatoaminotranferasa(U/l)enexpendedoresdegasolinaque laboranantesdelaeliminacindelmetaldelcombustible,expendedoresde gasolina no expuesto al combustible plumbado y un grupo control de la ciudad de Cuman, Estado Sucre. ........................................................................................... 39 v LISTA DE FIGURAS Figura 1. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de hemoglobina en los individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. ........................................................................... 13 Figura2. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de hematocrito en los individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. ........................................................................... 14 Figura 3. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de leucocitos enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. .................................................................................. 14 Figura 4. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de creatinina enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. .................................................................................. 15 Figura5. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de urea enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. .................................................................................. 15 Figura 6. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de bilirrubina enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. .................................................................................. 16 Figura 7. Relacin entre los niveles de plomo y las actividades de la enzima alanino aminotransferasaenlosindividuosexpendedoresdegasolinaexpuestosyno expuestos al combustible con plomo de ciudad de Cuman. ...................................... 17 Figura 8. Relacin entre los niveles de plomo y las actividades de la enzima aspartato aminotransferasaenlosindividuosexpendedoresdegasolinaexpuestosyno expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. .................................. 17 Figura9. Concentracionesde plomo en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. .. 18 vi Figura10.Concentracionesdehemoglobinaenexpendedoresdegasolinaque estuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresdecombustibleno expuestosalcombustibleconplomodelaciudaddeCuman,estadoSucreyun grupo control. .............................................................................................................. 19 Figura11.Concentracionesdehematocritoenexpendedoresdegasolinaque estuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresdecombustibleno expuestosalcombustibleconplomodelaciudaddeCuman,estadoSucreyun grupo control. .............................................................................................................. 19 Figura12.Concentracionesdeleucocitosenexpendedoresdegasolinaque estuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresdecombustibleno expuestosalcombustibleconplomodelaciudaddeCuman,estadoSucreyun grupo control. .............................................................................................................. 20 Figura13.Concentracionesdecreatininasricaenexpendedoresdegasolinaque estuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresdecombustibleno expuestosalcombustibleconplomodelaciudaddeCuman,estadoSucreyun grupo control. .............................................................................................................. 22 Figura14.Concentracionesdeureasricaenexpendedoresdegasolinaque estuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresdecombustibleno expuestosalcombustibleconplomodelaciudaddeCuman,estadoSucreyun grupo control. .............................................................................................................. 22 Figura15.Concentracionesdebilirrubinaenexpendedoresdegasolinaque estuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresdecombustibleno expuestosalcombustibleconplomodelaciudaddeCuman,estadoSucreyun grupo control. .............................................................................................................. 23 Figura16. Actividad de la enzima alanino aminotranferasa (ALT) en expendedores degasolinaqueestuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresde combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. ............................................................................................ 24 vii Figura 17. Actividad de la enzima aspartato aminotranferasa (AST) en expendedores degasolinaqueestuvieronexpuestosalcombustibleplumbado,expendedoresde combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. ............................................................................................ 24 viii RESUMEN El objetivo del presente estudio fue relacionar los niveles de plomo y los parmetros hematolgicos, hepticos y renales en los expendedores de gasolina de la ciudad de Cuman,estadoSucre.Paralograrestefinseanalizaronmuestrassanguneas provenientesde56individuostodosdelsexomasculinoconedadescomprendida entre 18 y 56 aos, los cualesfueron divididos en dos grupos: un grupo experimental conformado por 36 individuos expendedores de gasolina, este fue dividido a su vez endossubgrupos,losexpendedoresdegasolinaqueestntrabajandoantesdela eliminacindelplomodelcombustible(20individuos)ylosexpendedoresde gasolina que estn trabajando despus de la eliminacin del metal de combustible (16 individuos)yungrupocontrolconformadopor20individuosestudiantesdel departamento de Bioanlisis de la Universidad de Oriente, Ncleo de Sucre. A cada uno de ellos se le tomaron 10 ml de sangre y se dividieron en dos porciones: una de 5 ml en tubos de ensayos con anticoagulante para realizar la determinacin de plomo y losparmetroshematolgicosyotrade5mlentubossecosparaobtenerlos respectivos suerospara las determinaciones de los parmetros hepticos y renales. Los resultados obtenidos al aplicar la prueba estadsticaregresin lineal mostraron relacin significativa entre los niveles de plomo y los parmetros bioqumicos urea y creatinina, la prueba estadstica Anova simple mostr diferencias significativas en las concentraciones de plomo y los parmetros bioqumicos urea, creatinina y bilirrubina evaluadosenindividuoscontroles,expendedoresdecombustibleexpuestosala gasolinaconplomoyexpendedoresnoexpuestosalcombustibleplumbado.Los parmetroshematolgicos(hemoglobina,hematocrito,leucocitosycontajedepunteadosbasfilos)yhepticos(bilirrubina,transaminasas),nomostraron diferenciassignificativasentrelosgruposanalizados.Todosestosresultados permiten concluir que existe una relacin directa entre la exposicin a la gasolina con plomoylapatologarenalexpresadaporlarelacinlinealpositivaentrelas concentracionesdeplomoylosnivelesdeureaycreatininaencontradosenlos individuos estudiados. Palabrasy/oFrasesClaves:Gasolina,Plomo,Creatinina,TGO,TGP,Parmetros Hematolgicos, Urea ix INTRODUCCIN Elplomo(Pb)esunmetalblando,decolorgrisazuladoopaco,maleabley dctil, conbaja resistencia a la traccin y mal conductor de la electricidad, presenta punto de fusin de 328C y punto de ebullicin de 1 740C, su densidad relativa es de 11,34g/dlysumasaatmicaesde207,20g/mol.Estemetalseencuentra ampliamentedistribuidoportodoelplanetaenformadegalena,comosulfurode plomo y ocupa el lugar 36 en abundancia entre los elementos de la corteza terrestre (Ariet, 2002). Por sus caractersticas de maleabilidad y ductibilidad, el plomo ha sido utilizado porelhombredesdelamsremotaantigedad;lasprimerasdescripcionesdesu toxicidadlasrealizHipcratesenelsigloV(AC)ydescribeelclicosaturnino como sntoma de la toxicidad del plomo. Actualmente, la contaminacin por plomo no solo se extiende a los ambientes laborales en que se utiliza este metal, sino quetambinesunelementoimportanteenlacontaminacinambiental,debido principalmente al empleo del tetraetilo y tetrametilo de plomo como antidetonante en los carburantes de los automviles (Sann y cols., 1998). Elplomocuandoingresaenelcuerpohumano,produceelenvenenamiento denominadosaturnismoyesllamadoasdebidoaque,enlaantigedad,los alquimistas llamaban "saturno" a dicho elemento qumico, mientras que se reserva la denominacin desaturnismo hdrico al que se produce a travs del agua ingerida. Cabe resaltar que el plomo como mineral inoxidable, no confiere sabor al agua ni a los alimentos (Ariet, 2002). Las personas expuestas al plomo se clasifican de acuerdo a razones laborales y causasambientales.Unlmitedeexposicinlaboralde100g/m3deairecomo 1 exposicinpromedioparaunajornadade8horas,esdecir,40horadetrabajo semanales, ha sido recomendado en Estados Unidos por el NIOSH (Nacional Institute forOcupationalSafetyandHealth).Elmximonivelsanguneopermisiblepara plomoenoperarioshasidoestablecidoen600g/l,nivelenelcualseobservan efectos sobre la salud. El intervalo tpico para adultos sanos no expuestos es de 100 a 200 ug/l (Kaplan y Pesce, 2001).

El plomo puede ser absorbido por las vas respiratorias, que constituye la va de entrada ms importante, penetrando por inhalacin de vapores, humos y partculas de polvo. Una vez absorbido, un 50% se deposita en los pulmones, desde donde pasa a la sangre circulante despus de aproximadamente 50 horas, pasando un porcentaje a los tejidos y otra pequea parte es eliminada. El grado de absorcin del plomo por esta va depende de laconcentracin ambiental en el puesto de trabajo, del tiempo de exposicin,delaformafsica(vapores,humosytamaodelaspartculas),de factorespersonales(edadyestadofisiolgico),ydecondicionesdetrabajo,por ejemplo temperatura, humedad y ventilacin (Sann y cols., 1998). Solamente una proporcin del plomo circulante puede ser excretado, siendo la principalvadeexcrecinlaurinaria,mientrasqueunaproporcinmspequea puededesecharseporlosfluidosdesecrecingastrointestinal,demaneraquela mayor parte del plomo que se encuentra en las heces es plomo no absorbido por la va digestiva. Tambin, es posible eliminar una pequea cantidad de este metal por las clulasquesedescamandelapiel,pelosyuas,yexistenalgunascondiciones fisiolgicas que permiten que el plomo pueda ser excretado por otros fluidos, como la lechematerna.Ancuandoexistendiferentesvasdeexcrecin,larelacin absorcin/excrecin siempre es mayor a la unidad; esto se traduce en acumulacin de plomo en el organismo (Rivas y Vicua, 1999). Elplomotienegranafinidadporlosgruposimidazol,sulfhdrico,amino, 2 carboxilo y fosfato, y como consecuencia presenta una fuerte unin a las membranas biolgicas,protenasycompuestosintermediosenlasvasmetablicas,comola fosforilacin oxidativa y la sntesis de la hemoglobina(J imnez y Zapata, 2003). El efecto del plomo en la hemoglobinognesis se traduce en la inhibicin de por lo menos dos enzimas involucradas en la biosntesis del grupo hem, una mitocondrial y otra citoplasmtica: la deshidrogenasa del cido delta-aminolevulnico (-ALA), la segundaenzimadelavametablica;ylaferroquelatasa(FQ)ohemosintetasa, ltima enzima de la va metablica que incorpora, en condiciones normales, el hierro enelcentrodelaestructuradelaprotoporfirina9parasintetizarelgrupohem (Snchez-Anzaldo, 1995). La anemia constituye una de las caractersticas principales de la intoxicacin por plomo, lo que resulta de la inadecuada formacin de la hemoglobina, as como de la hemlisis temprana de los glbulos rojos. Como consecuencia de esto se producen valoreselevadosdelcidodelta-aminolevulnico,representandounasealdela intoxicacincrnicaporplomo.Laacumulacindeprotoporfirina9ehierrono hmicoenloseritrocitosocasionanunprecipitadoenloshemates,denominado punteado basfilo, siendo otra de las caractersticas ms resaltantes del saturnismo (J imnez y Zapata, 2003). Sann y cols. (1998) concluyeron que distintos grados de exposicin al plomo pueden reducir de modo significativo el coeficiente intelectual (CI) de los nios en edad escolar. Algunos clculos indican una reduccin de 1 a 5 puntos en el CI de los nios y nias expuestos, por cada 10 miligramos por decilitro de incremento en los niveles de plomo en la sangre. Tambin, sehaasociado a la exposicin de este metal comportamientos agresivos, delincuencia y desrdenes de la atencin en estas edades. Aunado a lo anterior, tambin se afecta el peso de los nios al nacer y su desarrollo neuroconductual, lo que puede ser severo y prolongarse mas all de la infancia. 3 Losefectosanivelrenalproducidosporelsaturnismovaransegnla exposicinalplomo.Enunaprimerafaseseobservalapresenciadeinclusiones intranuclearesdelcomplejoplomo-protenaenlasclulastubularesyexcrecin elevada de plomo. En una segunda fase, producida tras algunos aos de exposicin, lasclulastubularespierdenlacapacidaddeformarinclusionesintracelulares,los riones excretan menos plomo, y presentan un cierto grado de fibrosis intersticial, y la funcin renal comienza a alterarse. La tercera fase produce nefritis crnica, y las lesiones ocurren principalmente a nivel tubular(J imnez y Zapata, 2003). La creatinina es un anhdrido de la creatina que se forma por accin espontnea e irreversible. La creatinina libre no se reutiliza en el metabolismo del cuerpo y, por tanto,funcionanicamentecomounproductodeexcrecindelacreatina.La constancia en la formacin de sta la convierte en un ndice til de la funcin renal, principalmente de la filtracin glomerular (Bernard y cols., 2002). Cakeycols.(2000)midieronplomoenhueso(trabecularycortical)en49 trabajadores de una fabrica de bateras para automviles y lo relacionaron con las concentracionesdeplomoobtenidasenelsueroysangrecompletadeestos trabajadores. Esto permiticoncluir que el plomo en hueso tiene una relacin ms directa con los niveles de sangre completa que con los niveles sricos. Normalmente, la concentracin de plomo en sangre oscila en un intervalo de 100a200g/l,ycercadel90al95%seunealasmembranascelularesolas fraccionesdelasprotenas(hemoglobinayprotenasdealtamasamolar).La medicin de la concentracin de plomo en sangrees extensamente utilizada para el monitoreo biolgico de poblaciones expuestas a dicho metal (Yen y cols., 1997). El estudio de las concentraciones de plomo en sangre para prevenir o detectar situacionespatolgicasrequieredemtodosseguros.Laespectrofotometrade 4 absorcin atmica con horno de grafito representa la tcnica mas ampliamente usada para la determinacin de plomo en sangre. Este mtodo favorece la determinacin del metalanivelestraza,debidoasualtasensibilidad,excelenteselectividady requerimientos mnimos en la manipulacin y en el tratamiento de la muestra, lo cual disminuye los riesgos de contaminacin. Por otra parte, en este tipo de anlisis se utilizan pequeas cantidades de muestras y el horno de grafito puede alcanzar altas y controladastemperaturas(hasta2800C),loquepermitelaeliminacindelos contaminantes, sin prdida significativa del analito (Bermdez, 1995). La contaminacin por plomo en la sangre constituye un factor de riesgo a nivel mundial,principalmenteenlospasessub-desarrollados,dondesehanvenido elaborando importantes trabajos de investigacin, como el realizado en Per, cuyo objetivo fue conocer las concentraciones de plomo sanguneo de los habitantes de ciudades de diferente densidad poblacional y grado de desarrollo industrial, durante 1994 y 1995. Las ciudades consideradas fueron Lima, Huancayo, La Oroya y Yaupi. Enestetrabajoseconcluyquelasconcentracionesdeplomosanguneodelos habitantes de estas ciudades guardan relacin con el grado de industrializacin y la densidad poblacional de cada localidad (Ramrez y cols.,1997). Entre las investigaciones que se han realizado en Venezuela para medir el grado deintoxicacinplmbica,seencuentraunestudiomdicoocupacionalde trabajadorespertenecientesaunidadesproductivasdedicadasalaboresde telecomunicaciones,mecnicaderadiadoresdeautomvilesyreparacinde acumuladoreselctricos,realizadoenlaciudaddeMaracaibo,estadoZulia.Los resultados mostraron valores promedio de plumbemia en la poblacin expuesta, por encimadelnivelumbralespecificadoenlanormaCOVENIN2277-85(30g/dl) (CorzoyNaveda,1998).Enotrotrabajohechoenelmismoestado,serealizla medicin de niveles de plomo en muestra de sangre y semen de individuos frtiles e infrtiles.Enstesehallarondiferenciasestadsticamentesignificativas,entrelos 5 individuos frtiles e infrtiles, demostrando la participacin del plomo como un factor importanteenlainfertilidadmasculinaenlaciudaddeMaracaibo(Rodrguezde Godoy y cols., 2001). EnVenezuela,yparticularmenteenlaciudaddeCuman,estadoSucre,no existeningncontrolenelusodelplomoysusderivados.Noobstante,estudios relevantes como el realizado por (Rondn, 1988), han sealado las alteraciones de los ambientes acuticos y terrestres causados por este metala travs de la incorporacin a la cadena alimentaria de los organismos vivos que logran asimilar el plomo. Esto puede provocar daos ecolgicos y biolgicos, no slo a este sistema natural, sino tambinalosresidentesdeestalocalidad.Enestamismaciudad,serealizun trabajo de investigacin para conocer los niveles de plomo en los habitantes de la parroquiaAltagracia,conelfindeaplicarmedidascorrectivasymecanismosde seguridad y prevencin por parte de las autoridades locales. Los resultados obtenidos arrojarondiferenciassignificativasentrelosvaloresdeplomodelapoblacin expuesta y la no expuesta a este metal (Cabrera, 2002). Como se puede observar, en el estado Sucre son pocos los estudios que se han realizado en la poblacin sobre las consecuencias de la contaminacin por plomo, razn por la cual, se considera importante haber realizado esta investigacin, ya que, permiticonocerlarelacinentrelosnivelesdeplomoyelfuncionalismo hematopoytico,hepticoyrenal,enexpendedoresdegasolina,delaciudadde Cuman, estado Sucre. 6 METODOLOGIA Muestras Para la realizacin de este estudio se escogieron 56 individuos masculinos, con edades comprendidas entre 18 y 56 aos, que fueron distribuidos en dos grupos de trabajo.Ungrupode36individuosexpendedoresdegasolinadelaciudadde Cuman, que a su vez se separaron en dos subgrupos: los que estuvieron expuestos por razones profesionales a contaminacin por plomo al estar trabajando antes de la eliminacindeestemetaldelagasolinaylosqueexpendengasolinaluegodela eliminacindeestemetaldelcombustibleyungrupocontrolintegradopor20 individuos no expuestos laboralmente al metal. Esteestudioseefectubajoestrictasnormasdelaticamdica,segnla declaracindeHelsinkidelasNormasInternacionalesparalasinvestigaciones BiomdicasenlasPoblacionesHumanas,promulgadasporelConsejode Organizaciones Internacionales de Ciencias Mdicas (CIOMS, 2002), que incluye el consentimiento vlido de los pacientes en estudio (Anexo 1). Procesamientos de las Muestras A cada individuo se le extrajo 10 ml de sangre completa por puncin venosa y luego se separaron en dos porciones. La primera alcuota se deposit en un tubo de ensayo con anticoagulante (heparina) y se emple para realizar las determinaciones hematolgicas y la cuantificacin del plomo. La segunda alcuota se deposit en un tubo de ensayo estril seco, el cual se centrifugopara obtener el suero que sirvi para realizarlasdeterminacionesdelosparmetrosbioqumicosurea,creatinina, bilirrubina y transaminasas. 7 Elmaterialdestinadoalatomademuestraparaladeterminacindeplomo requiride una buena limpieza, debido a que la tcnica utilizada detecta cantidades traza (g/l), adems que el plomo es un metal presente en el salitre urbano. Los tubos para la recoleccin de esta muestra fueron de polietileno, los cuales se colocaron en remojodurante8horasenunasolucindeundetergenteespecial(Radiac). Posteriormente, se enjuagaron con agua bidestilada y desionizada, y se secaron en unaestufaaproximadamentea60C.Laspuntasdispensadorasparalapipeta automtica, con la capacidad para 200 l, recibieron el mismo tratamiento, luego las puntas como los tubos fueron guardados en bolsas plsticas transparentes con cierres, para evitar cualquier contacto con el polvo hasta la toma de muestra. Tcnicas Utilizadas Determinacin de la Concentracin de Plomo La concentracin de plomo en sangre se determin en un espectrofotmetro de absorcin atmica, marca Perkin-Elmer, modelo 2380, USA, acoplado a un horno de grafito marca Perkin-Elmer, modelo AS-40, para la inyeccin de las muestras. Las absorbanciasintegradasseimprimieronenunimpresorsecuencialPerkin-Elmer, modeloPRS-10ysegraficaronenunregistradorlineal,tambinPerkin-Elmer, modeloR-100A.ElanlisisserealizenellaboratorioclnicoJ ulioCesar GonzlezenlaciudaddeValencia,deacuerdoalprocedimientodescritopor Granadillo y Romero (1986). Elmtododeanlisiscuantitativoparaplomo,empleandolatcnicade absorcinatmicasebasaenhacerpasarunhazdeluzmonocromticadeuna frecuencia tal que puede ser absorbido por el analito que se encuentra presente en forma de vapor atmico. La medida de la intensidad luminosa antes y despus de su 8 paso por el vapor atmico permite determinar la absorbancia por parte del analito. La concentracindelamuestraseconocerelacionandolosvaloresdeabsorbancia obtenidosconlosvaloresdeabsorbanciaprovenientesdelaspreparacionesde referencia de concentracin conocidas. LarelacinentreabsorbanciayconcentracineslinealysiguelaLeyde Lambert yBeer (Skoog, 2000). Valores de referencia: 0-350 g/l. (Centro para el control y prevencin de enfermedades, USA. 1985). Determinacin de la Concentracin de Creatinina Lacreatinina fuedeterminadapormtodocalorimtrico,en el cual lacreatinina reacciona con cido pcrico, en un medio alcalino, para formar el complejo picratodecreatinina.Laformacindeestecomplejocausaunaumentoenla absorbancia a 510 nm, que es directamente proporcional a la cantidad de creatinina en la muestra (J aff, 1986). Valores de referencia: adultos: 0,7-1,4 mg/dl. Determinacin de la Concentracin deUrea La determinacin de la urea se realiz por el mtodo enzimtico de la ureasa, el cual se basa en que la enzima ureasa cataliza la hidrlisis de la urea presente en la muestraparaformaramonioydixidodecarbono.Elamonioasproducidose combina con alfa-cetoglutarato, en presencia de nicotinamina adenina dinucletido reducida (NADH), durante la reaccin catalizada de glutarato dehidrogenasa (GLDH) para producir glutamato. Una cantidad equimolar de NADH sufre oxidacin durante la reaccin y, esta es directamente proporcional a la concentracin de nitrgeno de urea en la sangre de la muestra. Esta medicin se realiz a 340 nm. Valores de referencia: adulto: 15 a 39 mg/dl (Fischbach y Hunter, 1997). 9 Determinacin de la Concentracin de Hemoglobina La hemoglobina fue determinada por el mtodo de cianometahemoglobina, el cual consiste en aspirar con una pipetas de Sahl 0,02 ml de sangre, mezclndolos con 5mldesolucindeDrabkin,resultandounasolucindecolorrojiza,cuya absorbanciasedeterminmedianteunespectrofotmetromodeloSpectronic20,a una longitud de onda de 540 nm. Al mezclar la sangre con el reactivo de Drakin, se transformalahemoglobinaencianometahemoglobina.ElreactivoDrakincontiene cianuropotsicoyferricianuropotsico;elferricianurohacepasarelhierrodela hemoglobina del estado ferroso (Fe+2) al frrico (Fe+3) para formar metahemoglobina, lacualsecombinaconcianuropotsicoydaunpigmentoestable,la cianometahemoglobina.Los limites de referencia son de 14 a 18 g/dl en hombres y de 12 a 16 g/dl en mujeres (Wintrobe, 1979). Valoracin del Hematocrito Se aplic el mtodo del microhematocrito descrito por Wintrobe (1979), para lo cualsellenarontuboscapilaresdevidriohastadosterciosconsangrecompleta, sellando uno de los extremos con plastilina. Luego se centrifugaron a 15 000 rpm durante5minysedeterminlaalturadelpaqueteglobularenunatabla semilogartmica.Valoresdereferencia:hombres:42a52%;mujeres:37a48% (Balcells, 1993). Morfologa sangunea Se determin mediante la realizacin de extendidos sanguneos sobre lminas portaobjetos,teidasconcolorantedeGiemsayluegodevariosminutosse observaronalmicroscopioconobjetivode100Xparaestablecerlapresenciadel punteadobasfilo.Alencontrarde50a100clulaspunteadas,porcada10000 eritrocitos, es sugerente de saturnismo (Lynch y cols., 1977). 10 Contaje Leucocitario Se determin aplicando el mtodo visual directo, el cual consiste en diluir la sangreenunasolucinacidulada(solucinacuosaal3%decidoactico), permitiendo la hemlisis de los eritrocitos. Se cont el nmero de glbulos blancos observadosenunvolumenfijodeestadilucinysecalculposteriormentesu nmero por unidad de volumen de sangre (Balcells, 1993). Valores de referencia: adultos: 4,5 a 11,0 x 109 glbulos blancos/l. Determinacin de la Concentracin de la Bilirrubina Total, Directa e Indirecta Bilirrubinadirecta:seutilizaron0,2mldelamuestra,previamentediluida (1/10), la cual reaccion con 2,5 ml de solucin salina y 0,5 ml de diazoreactivo para formar azobilirrubina, un compuesto de color rosado cuya intensidad se determin fotocolorimtricamente a 540 nm a los 30 min. Valores de referencia0,10 a 0,15 mg/dl (Kaplan y Pesce, 2001). Bilirrubina total: Se emplearon 0,1 ml de la muestra, la cual se hizo reaccionar con2,5mldemetanoly0,5mldediazoreactivo.Estemtodoaplicelmismo principio de la determinacin de bilirrubina directa. Valores de referencia oscilan 0,3 -1,0 mg/dl (Kaplan y Pesce, 2001). Clculo de la bilirrubina indirectaEsta se obtuvo por la siguiente relacin: Bilirrubina indirecta: bilirrubina total bilirrubina directa 11 Determinacin de la Actividad de la EnzimaAspartato Aminotranferasa (TGO) Estapruebaenzimticasefundamentaenquelaaspartatoaminotransferasa catalizalatransferenciadelgrupoaminodelL-aspartatoa-cetoglutarato, produciendooxalacetatoyL-glutamato.Eloxalacetatosereduceamalatoenuna reaccincatalizadapormalatodeshidrogenasa.Enestamismareaccinun equivalente de NADH se oxida a NAD; la disminucin en la absorbancia a 505 nm es directamente proporcional a la actividad de la aspartato aminotransferasa. Valores de referencias: 5-40 U/ml (Henrry, 1983). Determinacin de la Actividad Enzimtica Alanina Aminotransferasa (TGP) Esta prueba est fundamentada en la capacidad de la TGP de catalizar la L-alaninaacetoglutarato,resultandoenlaformacin de piruvato y L-glutamato. La enzimalactatodeshidrogenasacatalizalareduccindepiruvatoylaoxidacin simultneadeNADHaNAD.Ladisminucindelaabsorbanciaa340nmes directamenteproporcionalalaactividaddelaTGP.Valoresdereferencias:5-30 U/ml (Henrry, 1983). Anlisis estadstico Los resultados obtenidos del presente estudio fueron sometidos al anlisis de regresin lineal, con el fin de obtener las relaciones entre los nivelesde plomo y los parmetroshematolgicos,hepticosyrenalesenexpendedoresdegasolinadela ciudaddeCuman.Adems,seapliclapruebaestadsticaAnovasimplepara determinar las posibles diferencias en las determinaciones de plomo y los diferentes parmetros estudiados en individuos expendedoresde gasolina y controles (Sokal y Rohlf, 1980). 12 RESULTADOS Y DISCUSIN Las figuras 1 y 2 muestran la ausencia de relacin significativa entre los niveles deplomoylasconcentracionesdehemoglobinayhematocritoenlosindividuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible plumbado (Anexo 4).Laausenciadeestarelacinpuedeexplicarse,argumentandoquelas concentracionesdeplomoencontradasenlasangredelosexpendedoresde combustible no son capaces de afectar los niveles de hierro, cido flico y vitamina B12porende,losnivelesdehemoglobinayhematocritoencontradosenestos trabajadores se mantienen inalterados. Estos resultados coinciden con lo sealado por Cabrera(2002),dichoautornoencontralteracioneshematolgicasen concentraciones de plomo por debajo del nivel txico en personas expuestas a este metal. Figura 1. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de hemoglobina en los individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. Enlafigura3semuestralaausenciaderelacinsignificativaentrelas concentracionesdeplomoylosnivelesdeleucocitosencontradosenlos expendedoresdecombustibleexpuestosynoexpuestosalagasolinaconplomo (Anexo 4). Este hecho puede explicarse, argumentando que las concentraciones de plomoencontradasenlasangredelosindividuosestudiadosnosoncapacesde afectar la secrecin de interleuquina 6, ni los factores de crecimiento y diferenciacin 0 5 10 15 20 100200300400 Hb (mg/dl) Pb (g/l) 13 degranulocitosyagranulocitos,quellevanconsigolaestimulacinlasclulas pluripotentesparadiferenciarlahacialaformacindeleucocitos(GuytonyHall, 1997). Figura 2. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de hematocrito en los individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. Figura 3. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de leucocitos enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. Lasfiguras4y5muestranlarelacinlinealpositivaencontradaentrelos nivelesdeplomoylasconcentracionesdecreatininayureasricaenlos expendedores expuestos y no expuestos al combustible con plomo (Anexo 4). Estos resultadosponendemanifiestoquelosindividuosexpendedoresdegasolina expuestosalplomopuedendesarrollardaosanivelrenal,especficamenteenla 0 10 20 30 40 50 100200300400 Pb (g/l) Hto (%) 0 5x109 10x109 15x109 100200300400 Leucocitos (gb/l) Pb (g/l) 14 membrana de filtracin o en los procesos reabsortivos de urea y creatinina a nivel tubular que explican los aumentos de estos metabolitos en los individuos estudiados. TalesresultadosfueronsimilaresalossealadosporBermdez(1995),talautor concluyquelaexposicinconstantealplomotieneefectossobrelosparmetros renales. Figura 4. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de creatinina enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. Figura 5. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de urea enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. La figura 6 muestra la relacin lineal positiva encontrada entre los niveles de plomoylasconcentracionesdebilirrubinaenlosexpendedoresdecombustible expuestos y no expuestos a la gasolina con plomo (Anexo 4). Estos resultados pueden justificarse sealando que la gasolina con y sin plomo probablemente puede producir 0 0,5 1 1,5 2 2,5 100200300400 Pb (g/l) Creatinina (mg/dl) 0 20 40 60 80 100200300400 Pb (g/l) Urea (mg/dl) 15 alteraciones funcionales a nivel heptico principalmente en el proceso de conjugacin de la bilirrubina, este hecho debe ser interpretado de esta forma, ya que los aumentos delasconcentracionesdebilirrubinatotalenestosindividuosestadadaporel incrementodelabilirrubinadirecta,esdecirlaqueseconjugaenelhgadocon sulfato que es la forma soluble en el plasma (Anderson y Cockayne, 1995). Figura 6. Relacin entre los niveles de plomo y las concentraciones de bilirrubina enlos individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. Las figuras 7 y 8 muestran que no existe relacin entre las concentraciones de plomoylasactividadesdelasenzimasalaninoaminotranferasayaspartato aminotranferasa(Anexo4).Estosresultadospuedenexplicarsesealandoquelas concentraciones de plomo encontradas en la sangre de los individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al plomo, no son capaces de alterar la secrecin de las hormonas glucocorticoides, las cuales son las responsables de la produccin de los aminocidos (alanina y aspartato) necesarios para la formacinde las enzimas transaminasas. Resultados que coinciden con los presentados por Rodrguez (2002), tal autor no encontr relacin entre las concentraciones de plomo y los parmetros hepticos en individuos expuestos laboralmente al metal.

Pb (g/l) Bilirrubina (mg/dl) 0 1 2 3 4 5 100200300400 16 Figura 7. Relacin entre los niveles de plomo y las actividades de la enzima alanino aminotransferasa en los individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de ciudad de Cuman. Figura 8. Relacin entre los niveles de plomo y las actividades de la enzima aspartato aminotransferasa en los individuos expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman. Lafigura9muestralosvalorespromediosdelasconcentracionesdeplomo determinados en individuos expendedores de gasolina expuestos (X=228 g/l) y no expuestos al plomo (X=136 g/l) e individuos controles (X=116 g/l). Se observa mayorconcentracindeplomoenlosexpendedoresquehanestadoexpuestosal metal, en comparacin con los expendedores que no estuvieron expuestos al metal y losindividuosdelgrupocontrol.Estasconcentracionesarrojarondiferencias estadsticamentesignificativas(Anexo5).Laexplicacinaestosresultadosest relacionado con el hecho de que los expendedores de combustible que han estado expuestos al plomo pueden acumular este metal a nivel seo por aproximadamente 25 aos, pudiendo regresar a sangre perifrica en proporciones sustanciales (Ramrez y cols., 1997). 0 20 40 60 80 100200300400 Pb (g/l) AST (U/l) 0 20 40 60 80 100200300400 Pb (g/l) ALT (U/l) 17 Losgruposdeexpendedoresnoexpuestosyelgrupocontrolpresentaron niveles de plomo que evidencian una exposicin real al metal que puede ser causada por factores ambientales o alimenticios (Sann y cols., 1998). Lasfiguras10y11muestranlosvaloresmediosdelosparmetrosde hemoglobina y hematocrito determinados en expendedores de gasolina que estuvieron expuestosalplomo,noexpuestosalmetalyungrupodeindividuoscontrol.Los resultados obtenidos no muestran diferencias estadsticamente significativas entre los gruposestudiados(Anexo6,7),Indicandoquelasconcentracionesdeplomo encontradasenestosindividuosnoalteralosnivelesdehemoglobinanide hematocrito, ya que los mismos no son capaces de modificar las concentraciones de hierro,vitaminaB12ycidoflico,parmetrosrelacionadosdirectamenteconla concentracindehemoglobina.Tambinpuedesealarsequenoseafectala secrecin de eritropoyetina a nivel renal (Guyton y Hall, 1997). Figura 9. Concentracionesde plomo en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Control No expuestos a plomoExpuestos a plomo 0 100 200 300 400 Pb g/l) 18 Expuestos a plomoControlNo expuestos a plomo 31 35 39 43 47 Hto (%) Figura 10. Concentracionesde hemoglobina en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Figura 11.Concentracionesde hematocrito en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. La figura 12 muestra los valores medios del contaje de leucocitos determinados en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al plomo, lo expendedores no expuestosalmetalyungrupocontrol.Losresultadosobtenidosnomuestran diferenciasestadsticamentesignificativasentrelosgruposestudiados(Anexo8). Expuestos a plomoControl No expuestos a plomo 10 11 12 13 14 15 16 Hb (mg/dl) 19 Este hecho puedeexplicarse, sealando que los niveles de plomo en estos individuos expendedores de gasolina no son capaces de aumentar o disminuir la secrecin del factordecrecimientoydiferenciacindegranulocitosymonocitosnilosde interleuquina6,compuestosencargadosdeestimularlaproduccinleucocitos (Cabrera, 2002). Figura 12. Concentraciones de leucocitos en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Losresultadosobtenidosenelpresenteestudioenrelacinalospunteados basfilos en el interior de los eritrocitos en los expendedores de gasolina expuestos y no expuestos al plomo y en los individuos controles, no arrojaron ninguna muestra con presencia de estas inclusiones. Estos hallazgos demuestran que la aparicin de los punteados basfilos ocurre cuando la concentracin de plomo en sangre es superior a 500g/dl.EstosresultadosconcuerdanconlosreportadosporBermdez(1995), dicho autor encontr niveles de plomo por debajo del nivel txico y la determinacin del punteado basfilo result negativa para todos los individuos estudiados. Lafigura13muestralosvalorespromediosdelparmetrosricocreatinina, determinado en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible con plomo, expendedores de gasolina no expuestos al metal y un grupo control. El Expuestos a plomoControl No expuestos a plomo4400 6400 8400 10400 12400 14400 Leucocitos (gb/mm3) 20 grupodeexpendedoresqueestuvoexpuestoalmetalpresentunaconcentracin promedio de creatinina superior a la del grupo no expuesto y a la del grupo control, mostrandodiferenciasestadsticamentesignificativasentrelosgruposestudiados (Anexo9).Esteresultadosepuedeexplicar,indicandoquelosexpendedoresde gasolinaexpuestosalplomoalcanzaronconcentracionesdeestemetalque probablementealterenlamembranadefiltracinglomerularyporendela eliminacin de creatinina, lo cual trae como consecuencia la presencia delos altos nivelesdeestecompuestoenestosindividuos,superioresalosencontradosenel grupo control y en los expendedores no expuestos al plomo (Levey, 1998; Guyton y Hall, 1997). La figura 14 muestra los valores promedio del parmetro urea medidos en los expendedoresdegasolinaqueestuvieronexpuestosalcombustibleconplomo, expendedores no expuestos al combustible con plomo y un grupo de individuos que sirvieroncomocontrol.Seobservaqueelgrupodeexpendedoresdegasolina expuestos al plomo presenta las concentraciones de urea mas elevadas. Esto puede ser consecuencia de que estos individuoshan mantenido niveles significativos de plomo en sangre durante varios aos, provocando alteraciones renales que semanifiestan conalteracionesenlamembranadefiltracinyenlostbulosrenales,locual disminuyelaeliminacindeureay,enconsecuencia,aumentasuconcentracin srica (Chilson, 1971; Guyton y Hall, 1997). 21 Figura 13. Concentraciones de creatinina srica en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Figura 14. Concentraciones de urea srica en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Lafigura15muestralosvalorespromediosdelasconcentracionesde bilirrubinamedidasenindividuosexpendedoresdegasolinaexpuestosaplomo, expendedores de gasolina no expuestos a plomo e individuos controles. Se observan valoresaumentadosenlosgruposexperimentales,encomparacinconelgrupo control. Estos resultados ponen de manifiesto que el combustible con o sin plomo es capazdeproducirsignificativosepisodiosdelisisdehemates,loquetraecomo Expuestos a plomo ControlNo expuestos a plomo 21 31 41 51 61 71 Urea (mg/dl) Expuestos a plomoControl No expuestos a plomo 0 0,4 0,8 1,2 1,6 2,0 2,4 Creatinina (mg/dl) 22 consecuencialiberacindehemoglobinaallquidoextracelular,exponindolaala accin de los macrfagos del sistema retculo endotelial que favorece la formacin de bilirrubina por reacciones de xido reduccin y por accin enzimtica sobre el grupo hemo,causandoaslaformacindebilirrubinayprovocandoincrementoanivel sanguneocomo se observa en los expendedores de gasolina estudiados (Guyton y Hall, 1997). Figura 15. Concentraciones de bilirrubina en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Lasfiguras16y17sealanlosvalorespromediosdelasactividadesdelas enzimasalaninoaminotransferasayaspartatoaminotranferasamedidasen expendedoresdegasolinaexpuestoaplomo,noexpuestosalplomoeindividuos controles.Noseobtuvodiferenciasestadsticamentesignificativasal evaluarestos parmetros.Noobstante,losvaloresdelaactividaddelaenzimaalanino aminotranferasaenlosexpendedoresdegasolinaexpuestosalplomomuestran valores medios por encima de los encontrados en los expendedores de gasolina no expuestos a plomo y en los individuos del grupo control. Estos resultados pueden interpretarse como el principio de una alteracin a nivel heptico en estos individuos. Sin embargo, se debe sealar que estudios como el realizado por Rodrguez (2002), Expuestos a plomoControlNo expuestos a plomo 0 1 2 3 4 5 Bilirrubina (mg/dl) 23 Expuestos a plomoControlNo expuestos a plomo 0 20 40 60 80 ALT (U/l) manifiestan que aunque este metal tiene afinidad por el hgado, la gran capacidadde reestructuracindeesterganonopermitequeseevidenciealgndao, principalmente cuando la exposicin al metal ha sido crnica. Figura 16. Actividad de la enzima alanino aminotranferasa (ALT) en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Figura 17. Actividad de la enzima aspartato aminotranferasa (AST) en expendedores de gasolina que estuvieron expuestos al combustible plumbado, expendedores de combustible no expuestos al combustible con plomo de la ciudad de Cuman, estado Sucre y un grupo control. Expuestos a plomoControlNo expuestos a plomo 0 20 40 60 80 AST (U/l) 24 CONCLUSIONES Losindividuosexpendedoresdegasolinaexpuestosalplomomostraronlas mayores concentraciones de plomo a nivel sanguneo en comparacin con aquellos no expuestos al plomo y el grupo control. Noexisterelacinentrelasconcentracionesdeplomoylosparmetros hematolgicos estudiados. Losexpendedoresdegasolinaqueestuvieronexpuestosalcombustiblecon plomo presentaron concentraciones de urea y creatininaelevadascon respecto a los otros dos grupos. Se encontr relacin entre las concentraciones de plomo y las concentrciones de urea y creatinina en los individuos estudiados. Losdosgruposdeexpendedoresdegasolinamostraronconcentracionesde bilirrubina superiores a las del grupo control, pero estos valores no muestra relacin con las concentraciones de plomo. Las actividades de las enzimas transaminasas indicaron valores promedios muy similares en los tres grupos estudiados, sin mostrar diferencias estadsticas entre ellos. Noseencontrrelacinentrelasconcentracionesdeplomoensangreylos parmetros hepticos estudiados. 25 BIBLIOGRAFA Ariet, F. 2002. Manual de qumica fisiolgica. Editorial El Manual Moderno. Buenos Aires. Anderson, Jy Cockayne, M. 1995. Qumica clnica. Editorial MacGraw-Hill. Ciudad de Mxico. Balcells, A. 1993. La clnica y el laboratorio. Ediciones cientficas y tcnicas, S.A. Barcelona. Bermdez,M.1995.Relacindelaconcentracindeplomoyparmetros hematolgicosentrabajadoresdelaciudaddeCuman,estadoSucre.Trabajode grado.EscueladeCiencias,DepartamentodeBioanlisis.UniversidaddeOriente, Cuman, Venezuela.

Bernard,J .;Washinton,J .;Melendon,W.;Statland,B.;yTomas,R.2002. Diagnsticoytratamientoclnicoporellaboratorio.TomoI.SalvatEditores. Barcelona, Espaa. Cabrera, D. 2002. Niveles hematolgicos y niveles de plomo en habitantes de la parroquiaAltagraciadeCuman,estadoSucre.Trabajodegrado.Escuelade Ciencias, Departamento de Bioanlisis. Universidad de Oriente, Cuman, Venezuela. Cake,D.;Borges,A.yGonzlez,J .2000.Determinacindeplomosrico. Revista Panamericana Salud Pblica, 1(8):4-6. Centro para el control y prevencin de enfermedades.1985. El resumen 1984-1987: concentraciones de plomo permitido en individuos expuestos laboralmente al metal. MMWR, 37 (3667): 3-7. CIOMS.2002.InternacionalEthicalGuidelinesforBiomedicalResearch involvingHumanSubjects.CouncilforInternationalOrganizationsofMedical Sciences(CIOMS)incollaborationwiththeWorldHealthOrganization(WHO). (18/05/09). Corzo,A.yNaveda,D.1998.Contaminacinplmbicaentrabajadoresde acumuladoreselctricosenlaciudaddeMaracaibo,estadoZulia.Revista. Panamericana Salud Pblica, 1 (8): 3-8. Chilsom, J . 1971.Lead poisoning. SC. Amer. 224 (2): 15-23. 26 Fischbach, D. y Hunter, P. 1997. Mtodos bioqumicos para la determinacin en el laboratorio clnico. Editorial El Manual Moderno. Buenos Aires. Granadillo,V.yRomero,J .1986.Determinaranalticamentelas concentraciones de plomo existente en sangre y orina en trabajadores que laboran en las estaciones de servicios de la ciudad de Trujillo, Venezuela. Revista de la Sociedad Venezolana de Qumica, 15 1: 3-10. Guyton, A. y Hall, J . 1997. Tratado de fisiologa mdica. Editorial McGraw-Hill. Ciudad de Mxico. Henrry, J . 1983. Diagnstico clnico para el laboratorio. Editorial Cientfica y Tcnica. Ciudad de Mxico. J aff, L. 1986. Qumica Clnica, Tcnica de laboratorio, Fisiologa, Mtodos de anlisis. Editorial Mdica Panamericana, S.A. Mxico. J imnez, A. y Zapata, P.2003. Efectos del saturnismo. Salud Pblica Mxico, 29(4): 113-210. Kaplan, L. y Pesce, A. 2001.Qumica clnica. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires. Levey, A. 1998. Serium creatinine and renal function. Ann. Rev. Med. 39: 465-490 pp. Ramrez, A.; Paucar, J . y Medina, J . 1997. Determinacin de plomo sanguneo enhabitantesdecuatrosciudadesperuanas.RevistaPanamericanaSaludPblica, 1(5): 4-6. Rivas,F.yVicua,N.1999.Exposicinurbananoocupacionalalplomoy niveles sanguneos en embarazadas y recin nacidos. Archivo Venezuela Puericultura Peditrica, 62(4): 3 - 6. Rodrguez de Godoy, M.; Hernndez, M. y Granadillo,V. 2001. Determinacin delosnivelesdeplomoenmuestrasdesangrecompletaysemendeindividuos frtileseinfrtiles,evaluadoporespectrometradeabsorcinelectrotrmica. Congreso Venezolano de Bioanlisis (XII jornada). Maracaibo.Venezuela.172p. Rodrguez,M.2002.Efectosfisiolgicosdelacontaminacinporplomoy mercurioenminerosdelmunicipioelCallao,estadoBolvar.Trabajodegrado. EscueladeCienciasdelasalud,DepartamentodeBioanlisis.Universidadde Oriente, Bolvar, Venezuela. 27 Rondn, R. 1988. Contaminacin de algunos suelos y plantas comestibles del estado Sucre por plomo y zinc. Trabajo de grado. Escuela de Ciencias, Departamento de Qumica. Universidad de Oriente, Cuman, Venezuela. Tresguerres, J . 2005. Fisiologa Humana. Editorial McGraw-Hill. Madrid. Snchez-Anzaldo,F.1995.Saturnismo.Enciclopediaiberoamericanade hematolgica. Universidad de Salamanca. Espaa. Sann,L.;Gonzlez-Cossio,T.;Romieu,I.yHernndez-vila,M.1998. Acumulacin de plomo en huesos y sus efectos en la salud. Salud Pblica Mxico, 40: 359 368. Skoog, D. 2000. Qumica Analtica. Editorial McGraw-Hill. Ciudad de Mxico. Sokal, R. y Rohlf, J . 1980. Principios y mtodos estadsticos en la investigacin biolgica. San Francisco, Estados Unidos. Wintrobe, M. 1979. Hematologa clnica. Editorial Intermdica. Buenos Aires. Yen,C.;Cheng,W.;Hu,C.;Wei,B.;Chung,C.yKuo,S.1997.Lead determinationinwhole bloodbygraphitefurnaceatomicabsorptionspectrometry. Atlant Spectrosc, 18(2): 64-69.

28 ANEXOS 29 ANEXO 4 Tabla 4. Valores del factor de correlacin (R) de la prueba estadstica regresin lineal simplerelacionandolasconcentracionesdeplomoconlosparmetrosde hemoglobina,hematocrito,leucocitos,creatinina,urea,bilirrubinaytransaminasas aplicada en expendedores de gasolinita expuestos y no expuestos a la combustible plumbado y un grupo de individuos controles de la ciudad de Cuman, estado Sucre. RELACINNR Plomo vs hemoglobina570,0017 Plomo vs hematocrito570,0010 Plomo vs leucocitos570,0011 Plomo vs creatinina570,505 Plomo vs urea570,364 Plomo vs bilirrubina570,166 Plomovsalaninoamino tranferasa 570,0147 Plomovsaspartatoamino tranferasa 570,0388 30 ANEXO 5 Tabla5.ResumendelapruebaestadsticaAnovasimpleaplicadaalas concentraciones de plomo (Pb ug/l) en expendedores de gasolina que laboran antes de la eliminacin del metal del combustible, expendedores de gasolina no expuesto al combustible plumbado y un grupo control de la ciudad de Cuman, Estado Sucre. FuenteSCGlCMRP Entre grupos315418,2157709,40,550,0000*** Intra grupos206150,533889,62 Total (Corr.)521568,55 SC: Suma de Cuadrado; Gl: ; CM: Cuadrado Medio; R: Razn; P: valor experimental de la prueba Anova;p