Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran...

34
Técnicas utilizadas en Microbiología

Transcript of Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran...

Page 1: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Técnicas utilizadas en Microbiología

Page 2: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Técnicas de cultivo

Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos puros.

Un cultivo puro consiste de una población de células que provienen de una sola célula Técnica de estría en placa Transferencia aséptica de un cultivo

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 3: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Técnica de estría en placa

Un cultivo mixto es depositado en un área de una caja petri con agar, con un asa de siembra estéril se estría el agar varias veces. El asa de siembra puede ser esterilizada antes de estriar nuevamente el agar.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 4: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Cuando la técnica de estría en placa ha sido llevada acabo adecuadamente, las células bacterianas se multiplicarán y crecerán en distintas poblaciones o colonias.

Las colonias formadas por diferentes bacterias tienen diversas formas, tamaño y pigmentación.

Esas diferencias pueden ayudar en la obtención de cultivos puros

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 5: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 6: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 7: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Transferencia aséptica de un cultivo

Este término es utilizado para describir el procedimiento de transferencia de m.o. de un medio de cultivo a otro, de tal forma que se elimine la contaminación por m.o. indeseables.

Es importante trabajar rápido y mantener los tubos en un ángulo que impida la entrada de contaminantes con el aire

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 8: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 9: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Pueden ser utilizadaspara la obtención de cultivos puros

Vertido Superficie

Page 10: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Microscopio

Luz (utiliza luz como única fuente de iluminación)

Campo luminoso Campo oscuro Fluorescencia Contraste de fases

Electrones (utiliza un haz de electrones en lugar de luz para producir imágenes)

Transmisión (TEMs) Escaneo (SEMs)

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 11: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Microscopio compuesto

Se conoce como compuesto porque contiene dos o más juegos de lentes.

Se distinguen las siguientes partes condensadores (lentes que enfocan la luz al espécimen)

objetivos (lentes más cercanos al espécimen)

oculares (lentes cercanos al ojo y que magnifican la imagen)

Los rayos de luz pasan através del espécimen, debido a que los objetos son vistos con un fondo luminoso, la tinción ayuda al contraste, observándose más oscuros

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 12: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Objetivos con diferente poder de magnitud

El aumento total de la imagen será calculado considerando la magnitud de los lentes de ocular y objetivo, por ejemplo

40x, 10x equivale a 400x

El enfoque con los objetivos de be estar libre de aberraciones

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 13: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 14: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Esférica Los haces de luz pasan através del objeto sin coincidir

en el punto focal (de mayor claridad), en consecuencia la imagen es borrosa y distorsionada.

Cromática Ocurre cuando la luz blanca pasa através del lente y

se descompone en diferentes colores del espectro (violeta a roja), la imagen no es clara y es rodeada de espejismos de colores

Tipos de aberraciones

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 15: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 16: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Resolución o Poder de resoluciónEs la habilidad del microscopio de distinguir dos objetos cercanos

y separarlos como entidades distintas. El microscopio compuesto puede distinguir entre especímenes

que se encuentran a menos de 0.2 m.

Se determina por tres factores:1) Longitud de onda de la luz (), 2) apertura numérica del condensador y

3) apertura numérica del objetivo

Poder de Resolución= (0.61)/ NA objetivos+NA condensadores

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 17: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

NA= n sin Donde: n es el índice de refracción del medio entre los objetivos y el

espécimen, y es mitad del ángulo de luz que entra a los objetivos El índice de refracción varía con el medio utilizado entre los

lentes y el espécimen, el aire es generalmente usado como un medio estándar con un n=1.00.

Para aumentar NA se requiere un medio con n>1.0, i.e. Agua n=1.33, aceite de inmersión n=1.52.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 18: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 19: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Microscopio de campo oscuro

Permite la observación de estructuras muy pequeñas como flagelos

La luz es enfocada al espécimen en ángulo oblicuo

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 20: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Microscopio de contraste de fases

Es posible observar m.o. no teñidos, debido a que el microscopio detecta pequeñas diferencias en los índices de refracción

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 21: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Tinción

Simple Consiste en el uso de un solo colorante que

aumenta el contraste del espécimen contra un fondo.

Diferencial Utilización de dos colorantes

(el colorante primario tiñe la estructura y el secundario ayuda al contraste).

Especial Los colorantes tienen afinidad específica por

estructuras celularesKeiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 22: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Reactivos Tiempo Reacciones FrotisCristal Violeta 1 minuto Colorante básico que se une a

enjuagar los grupos cargados negativamentecon agua de la pared celular, membrana, citoplasma.

Yodo-Yoduro 1 minuto Yodo fija el cristal violeta a los grupos enjuagar negativos

Alcohol-Acetona 10 a 15 Decolorar el cristal violeta y yodo de segundos las células. El color difunde de los enjuagar m.o. gram positivos más lentamente quecon agua negativos, por la composición química

y grosor de la pared celular de gram positivos

Safranina 1 minuto Colorante básico que se liga a los gruposenjuagar negativos en ambos tipos de células.

Unos cuantos grupos negativos están libres del cristal violeta en gram +, mientras que la mayoría de los grupos - están libres en bacterias gram -. En consecuencia gram+ permaneces violetas mientras que gram -, rojos o rosas

Células incoloras difíciles de ver

Gram+ y -se tiñen azules

Gram+ y - se mantienen azules

Gram + permanecen azules, gram - se decoloran y son difíciles de ver

Gram + las células permanecen violetas, mientrás gram - son teñidas a rosa o rojo.

Page 23: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Microscopio Magnitud Apariencia delespécimen

Aplicaciones

Campo luminoso 1,000 a 2,000 Teñido o no teñido,generalmente teñidospara aumentar contraste

Para examinar en forma grosabacterias, hongos, levaduras,algas y protozoarios

Campo oscuro 1,000 a 2,000 Generalmente sin teñir,aparecen brillantes oiluminadas contra unfondo oscuro

Para situaciones de altacontraste, i.e. estructurasmicrobianas

Fluorescencia 1,000 a 2,000 Fluorescente Técnicas de diagnóstico,donde el colorantefluorescente se fija al m.o.

Contraste defases

1,000 a 2,000 Contrastando grados deoscuridad ( contrastepositivo) o deluminosidad (contrastenegativo)

Examinar estructurascelulares muy pequeñas enseres vivos

Electron 100,000 y másaltas

Vista en la pantalla Examina estructurascelulares y atómicas, virusque no son observados conotros microscopios.

Page 24: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

A. Campo luminoso, B. Campo oscuro, C y D. Contraste de fases.

Page 25: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Streptococcus pyogenes, división incompleta (X 40000)Fuente:Lim, 1998. Microbiology. Ed. McGraw-Hill

Page 26: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 27: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

A. Microscopio de Transmisión B. Microscopio de escaneo

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 28: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

A. Pseudomonas aeruginosa, teñidacon ácido fosfotungstico (x6,450)B. Clostridium tetani, mostrando flagelos sombreado metálico (x4,400)C. Vaccinia virus,sombreado metálico(x60,000) D. Neiseria gonorrhoeae,freeze-etched(x12,300)E. Physarum polycephalum escaneo electrónico (x30)

A B C

D E

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 29: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.
Page 30: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 31: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 32: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

La iluminación se controla mediante la concentración de la luz a la muestra, existen dos tipos de iluminación Crítica Köhler

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 33: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Page 34: Técnicas utilizadas en Microbiología. Técnicas de cultivo Los m.o. generalmente se encuentran como poblaciones mixtas y deben ser aisladas como cultivos.

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa

Keiko Shirai:

UAM-Iztapalapa


HABILIDADES MIXTAS

HABILIDADES MIXTAS

ESTRUCTURAS MIXTAS

ESTRUCTURAS MIXTAS

Aislamiento de M.O. de Suelo y Agua

Aislamiento de M.O. de Suelo y Agua

Clase de Etiologi de Las m.o 2013

Clase de Etiologi de Las m.o 2013

5 respiración m.o. presentación

5 respiración m.o. presentación

TÉCNICAS MIXTAS DE CONSTRUCCIÓN CON TIERRA

TÉCNICAS MIXTAS DE CONSTRUCCIÓN CON TIERRA

J. M.O. - AIDA-ITEA

J. M.O. - AIDA-ITEA

Lab. de medicion de M.O Y CIC

Lab. de medicion de M.O Y CIC

M.O. Soto J,Cárdenas_C

M.O. Soto J,Cárdenas_C

1.-Valorizacion m.o

1.-Valorizacion m.o

M.O. TX. Por Artrópodos UPN

M.O. TX. Por Artrópodos UPN

Medios de Cultivo de Acuerdo Al m.o.

Medios de Cultivo de Acuerdo Al m.o.

Losas Mixtas

Losas Mixtas

Estrategias Mixtas

Estrategias Mixtas

BiologíA Presentacion De M.O

BiologíA Presentacion De M.O

series mixtas

series mixtas

CONSTRUCCIONES MIXTAS

CONSTRUCCIONES MIXTAS

PRESENTACIÓN CURSO MEDIOS 2 - 2021 - baja · Estudio de diferentes técnicas de representación: Herramientas manuales, informáticas y mixtas. TÉCNICAS DE REPRESENTACIÓN y PRESENTACIÓN:

PRESENTACIÓN CURSO MEDIOS 2 - 2021 - baja · Estudio de diferentes técnicas de representación: Herramientas manuales, informáticas y mixtas. TÉCNICAS DE REPRESENTACIÓN y PRESENTACIÓN:

Dislipidemias Mixtas

Dislipidemias Mixtas

TEMA 2 m.o. en Alimentos Ok

TEMA 2 m.o. en Alimentos Ok