Elucin de Biobricks de la carpeta de 2008

Materiales:

TE (10:1), pH 8.0.

Tubos de PCR de 1.5 ml.

Tubos epp de 2 ml.

Clulas competentes cepa TOP10

Bao a 42C.

Incubadora a 37C.

SOC.

Cajas petri con antibitios.

Instrucciones:

Calentar alicuotas de 5 l de buffer TE a 50C en los tubos de PCR.Preparar un bao de agua a 42C

Perforar con el sacabocados incluido en le paquete en el punto donde se encuentra el biobrick que ese va a usar.

Soltar la perforacin realizada, presionando la parte superior del sacabocados, dentro del tubo de 5 l con TE ya calentado.

(Opcional) Centrifugar los tubos con la perforacin por 3 minutos a 15,000 G.

Dejar las perforaciones dentro del TE durante 20 min. Empezar a descongelar las clulas competentes colocndolas en hielo mojado.

Enfriar tubos epp de 2 ml en hieo mojado. Aadir 2 l de DNA en TE y 50 l de clulas competentes TOP10 descongeladas. El DNA sobrante puede ser almacenado durante varias semanas congelado.

Mantener el DNA y las clulas competentes en hielo durante 30 min.

Sumergir las clulas en un bao precalentado a 42C durante 60 segundos.

Incubar las clulas en hielo por 2 min.

Aadir 200 l de medio SOC (revisar que no est contaminado, no debe contener antibiticos).

Incubar las clulas a 37C con agitacin durante 2 horas.

Platear 250 l del cultivo en una caja petri con agar LB y antibitico(s).

Incubar a 37C entre 12 y 14 hr.