Presentacin de PowerPoint

CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN(PERMEACIN O FILTRACIN SOBRE GELES).1CLASIFICACIN DE LOS MTODOS CROMATOGRFICOS

2C. Reparto: separa los solutos basndose en la solubilidad relativa en dos lquidos distintos.

C. Adsorcin: se basa en la adsorcin superficial sobre la fase estacionaria.

C. Intercambio inico: separa solutos segn la carga inica.

C. Exclusin: separa solutos segn el peso molecular (no existen interacciones fsicas o qumicas entre el analito y la fase estacionaria).3CROMATOGRAFIA DE LQUIDOS (LC) (FASE MVIL: LQUIDA)CROMATOGRAFA DE EXCLUSINEs una tcnica de purificacin muy extendida y apreciada debido a su sencillez y eficacia en la resolucin de mezclas complejas de macromolculas, de manera que, permite separar molculas en funcin de su tamao molecular mediante un gel con gran variedad de tamaos de poros.4

Por lo general, se aplica a las grandes molculas o complejos macromoleculares, tales como protenas y polmeros industriales.5 De acuerdo con el objeto de separar el compuesto, o una materia soluble en disolvente orgnico o soluble en agua, puede ser dividido en:

Cromatografa de filtracin en gel (GFC): se utiliza generalmente para separar las macromolculas solubles en agua, tales como compuestos de polisacridos.

Cromatografa de permeacin en gel (GPC): se utiliza principalmente para el polmero soluble en disolvente orgnico (poliestireno, cloruro de vinilo, polietileno, polimetacrilato de metilo, etc)

CROMATOGRAFA DE EXCLUSINCROMATOGRAFA DE EXCLUSINEsquema de una columna de cromatografa de exclusin6

CROMATOGRAFA DE EXCLUSINEn el interior de una columna de cromatografa pueden distinguirse varios volmenes: 7

8a) Construccin de una curva de calibracin en cromatografa de exclusin.

b) Cromatograma mostrando el pico A que contiene todos los compuestos con pesos moleculares mayores que el lmite de exclusin,

los picos B y C corresponden a los compuestos dentro de la regin de permeabilidad selectiva,

el pico D contiene todos los compuestos de peso inferior al lmite de penetracin.9

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Un sistema de SEC es esencialmente un cromatgrafo lquido de alta performance con columnas conteniendo un relleno poroso cuyo tamao de poro se encuentra en el orden del volumen hidrodinmico de las molculas de polmero analizadas. 11

Deltacrom SCS 20012

CROMATOGRAFA DE EXCLUSINEmpaquetamientos De Columna

Tipos de empacamientos columna (aprox. 5- 10 m):

SEMIRGIDOS: polmeros entrecruzados.Los materiales semirrgidos se hinchan ligeramente se debe tener cierto cuidado en su uso ya que se limitan a una presin de 300psi

RGIDOS: slices de tamao de poro controlado.Estos empacamientos resisten presiones de hasta 3000psi y pueden ser usados con sistemas acuosos y una amplia gama de disolventes orgnicos polares.13FASE ESTACIONARIAFASE ESTACIONARIALos geles se caracterizan de acuerdo con su capacidad de hinchamiento debida a su ganancia de agua (causando la abertura de su estructura).14FASE ESTACIONARIAClasificacin de los geles

Segn su naturaleza: inorgnicos y orgnicos

Segn la flexibilidad de su estructura: hinchables y rgidos

Segn su origen: naturales, sintticos y combinados

Segn su microestructura: aerogeles, xerogeles y geles mixtos

15FASE ESTACIONARIA16

Micro estructuras de geles SephadexEs una marca registrada de gel DEXTRANO (carbohidrato polimrico) que se usa en laboratorio para la tcnica de filtracin en gel y cromatografa.

Las molculas de dextrano estn unidas entre s con enlaces cruzados.

Variando estos enlaces, se ven alteradas las propiedades del gel.

17FASE ESTACIONARIA

Bio-Gel Es una serie de geles para tamiz molecular con mayor inercia qumica formados por poliacrilaminas.

Son insolubles en agua y en disolventes orgnicos comunes, y se pueden usar en un intervalo de pH de 2 a 11. 18FASE ESTACIONARIA

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FASE ESTACIONARIAStyragel

Es un gel de poliestireno adecuado para separaciones puramente no acuosas en cloruro de metileno, tolueno, triclorobenceno, tetrahidrofurano, dimetilsulfxido, cresol,, etc.

No se puede usar con agua o alcoholes.

Sus geles se pueden preparar con lmites de exclusin para pesos moleculares de 1 600 a 40 millones.20FASE ESTACIONARIASu principal aplicacin es la separacin de las molculas en funcin de su tamao con la finalidad de estudiar el peso molecular.

Con esta tcnica se puede obtener la distribucin de pesos moleculares de los polmeros, y se pueden separar protenas, enzimas, pptidos, cidos nucleicos, hormonas, polisacridos, etc.21APLICACIONES22APLICACIONES

a) Separacin de cidos grasosb) Anlisis de resina comercial23

APLICACIONESVENTAJASBuena separacin de molculas grandes de las pequeas con un volumen mnimo de eluato.

Bandas estrechas, que conducen una buena sensibilidad.

Tiempos de separacin cortos y bien definidos y bandas estrechas, que conducen a una buena sensibilidad.

No hay prdida de muestra debido a solutos no interactan con la fase estacionaria.

No se desactiva la columna debido a la ausencia de interaccin entre el soluto y el relleno.24DESVENTAJASSolo un nmero limitado de bandas pueden ser acomodados en el cromatograma debido a que la escala de tiempo del cromatograma es corto.

No es aplicable a muestras de tamaos semejantes, como la mezcla de ismeros.En general, tiene que haber una diferencia del 10% en la masa molecular para tener una buena resolucin.25Skoog A. Douglas. Principios de anlisis instrumental. Editorial Prentice Hall. Espaa 2001. pp 819-824.

Universidad Nacional autnoma de Mxico. Facultad de Qumica, Qumica analtica II: Tcnicas cromatogrficas. Diciembre 2007.

Lehninger, Albert. L. Principios de Bioqumica. Segunda edicin. Ediciones omega. Barcelona, 1995, pp 137.

Kenneth A. Rubinson, Judith F. Robinson, Anlisis Instrumental, Editorial Prentice Hall. Espaa 2004. pp 730-739.

26REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS