La cuantificación de ácidos grasos Omega-3 y Omega-6 ácidos en los alimentos por HPLC y detección Aerosol

Cargado

ABSTRACTOLos ácidos grasos omega son un grupo de compuestos que incluyen ácidos grasos esenciales n-3 (por ejemplo, omega-3, ácido [ALA]), n-6 (omega-6, linoleico y acidos araquidónico), y no esenciales n-9, (omega-9, por ejemplo, oleico y erucico) en analitos. Los ácidos grasos omega-3, que incluyen también el ácido eicosapentanoico (EPA) y ácido docosahexanoico (DHA), son necesarios para el normal crecimiento.

Tradicionalmente, los ácidos grasos omega se median usando la cromatografía de gases (GC).

Este enfoque es tedioso, consume tiempo, y a altas temperaturas pueden afectar a la estabilidad de ácidos grasos poliinsaturados. El Thermo Scientiic Dionex Corona detector de aerosol cargado proporciona un enfoque universal basado en la masa que es sensible, con un amplio rango dinámico, y tiene una ventaja principal en que todos los analitos no volátiles dan respuesta similar independiente de la estructura química. No se requiere derivación, y a diferencia de la detección UV, el analito no necesita contener un cromóforo

INTRODUCCION

Aquí se muestra un método de HPLC en fase-reversa para la determinación de ácidos grasos omega en muestras de aceite / alimentos utilizando un método de doble gradiente y detección aerosol cargado. Esta combinación permite la determinación de muchos ácidos grasos en un solo análisis, y sin la derivacion de la muestra que se requiere para el análisis de GC. Se analizaron diferentes ácidos grasos, incluyendo seis ácidos grasos omega-3 ácidos grasos (ácido estearidónico [SDA], eicosapentanoico [EPA], ácido [ALA], ácido docosahexaenoico [DHA], ácido docosapentanoico [DPA], ácido eicosatrienoico [ETA]), cinco ácidos grasos omega-6 ácidos grasos (γ-linolénico [GLA], ácido araquidónico [Arach.], ácido linoleico [LLA], ácido adrénico, y el ácido eicosadienico [EDA]), y dos ácidos grasos omega-9 (ácidos oleico y erúcico). Un ácido graso omega-7, ácido linoleico conjugado 14Z-9E (CLA), también fue incluido por su importancia citado como un nutriente. Detección de aerosol cargado ha sido utilizada con éxito para caracterizar los lípidos de su clasificacion, incluyendo los fosfolípidos (fase reversa 5 y fase normal 6,7), acilglicéridos, fitoesteroles, ácidos grasos libres de alcoholes. Este método complementa el método de los ácidos grasos libres, con mayor especificad para estos analitos y Thermo Scientiic Acclaim C30 columna de fase inversa.

PROCESO

1.Liquido fluyente que entra en el sistema de HPLC 2.Nebulización neumática que se produce 3.Las gotas pequeñas entran en el tubo de secado 4.Gotas grandes de salida para drenar 5.Partículas secas entran en la cámara de mezcla 6.Corriente de gas pasa por aguja de la corona 7.Choca gas cargado con partículas y cobran transferencia 8.Se eliminan las especies de alta movilidad 9.El resto de las partículas cargadas medidas con un electrómetro muy sensible 10.La señal se transfiere al software de datos cromatográfico  

CODICIONES EXPERIMENTALES

Sistema de HPLC:

Thermo Scientiic Dionex  

 UltiMate 3000 RSLC Dual Gradient

Fase móvil A:

 Agua / ácido fórmico / fase móvil B

  (900:3.6:100)  

Fase móvil B:

 Acetona / acetonitrilo / tetrahidrofurano /

  ácido fórmico (675:225:100:4)

Columna:Acclaim ™ C30, 250 x 3 mm, 3 m

 Temperatura de la columna: 30 ° C     Caudal, Eluyente    Bomba de Gradiente:

1 ml /min    

Caudal, Inverso    Bomba de Gradiente:

1 ml /min    

Bomba de gradiente de eluyente

Bomba de Gradiente inverso

Tiempo (min) % B Tiempo (min) % B

0.00 0.0 0.00 100,0

1.0060.

0 1.10 100,0

13.0070.

0 2.10 40.0

22.0095.

0 14.10 30.0

24.0095.

0 23.10 5.0

24.00 0.0 25.10 5.0

29.00 0.0 25.10 100,0

    30.10 100,0

Volumen de inyección:        2,00 l

 Detector:               Corona ultra RS

cargada detector de aerosol

 Corona Filtro:                Alto

 Corona nebulizador Temp: 15 ° C

 Tiempo de Ejecución Total:        30.1 min

 

RESULTADO Y DISCUSION

Fig.2 Cromatograma HPLC de 14 ácidos grasos omega-libres.

VALORES PARA LOS ACIDOS GRASOS OMEGAS LIBRES POR HPLC

SDA : ácido estearidònico EPA: ácido

eicosapentanoico ALA: ácido alfa linoleico DHA: ácido

docosahexanoico LlA: ácido linoleico DPA: ácido

docosapentanoico ETA: ácido ecosatrieoico

Los aceites no hidrolizan bien en esta solución.

Se utilizo un intercambio de isopropanol para el etanol que proporciono un mayor rendimiento de los ácidos grasos libres para la hidrolización de las muestras.

CROMATOGRAMA HPLC DE ACEITE DE MOSTAZA HIDROLIZADA CON UN C30 150 * 4.5 MM

51 % ácido Eurico 11% ácido oleico 21% ácido linoleico 13% ácido alfa

linoleico

CROMATOGRAMA HPLC DE 20 MICRO LITROS DE ACEITE CON ADICION DE 200 MICROLITROS DE ISOPROPANOL PARA AYUDAR EN LA SOLUBILIDAD

Se detectaron un total de 38 picos .

Doce muestras adicionales fueron hidrolizadas de manera similar. fig. 2

CUANTIFICACION DE ACIDOS GRASOS OMEGA 3 Y 6 PRESENTES EN LOS ALIMENTOS:

se presentaron sobre la base de la proporción de ácidos grasos omega 3 y omega 6 (mas alto a la mas baja).

El aceite del pescado tiene la proporción mas alta, lo que explica su uso como un suplemento de aceite omega 3.

Ganado alimentado con pasto fue determinado que tiene una relación de 1 (cerca de los valore 0.3-0.7)

El pollo se determino con una relación de 0.62 diferente de los ácidos grasos comercial 0.05.

CROMATOGRAMA HPLC DE ACEITE DE RICINO El aceite de ricino se

puso a prueba para evaluar el desempeño del método con otros aceites.

Se encontró un único acido graso, aceite de ricino.

Presenta un 83% de área, similar al valor referencial de 90%.

CONCLUSIONES El uso de este método es posible obtener los

análisis cuantitativos de los diferentes ácidos grasos (omega 3-6 y 9)

Las muestras fueron hidrolizadas para separar los ácidos grasos de su esqueleto de glicerol y se analizaron glicerol y se analizaron directamente usando HPLC con detección de aerosol cargada.

Se analizó una amplia variedad de muestras, incluyendo los aceites de origen animal y de origen vegetal, en el mostrador suplementos, y grasas de carne.

La fase móvil utilizada aquí es compatible con espectrometría de masas, lo que permite la posibilidad de la identificación de ácidos grasos libres desconocidos que pueden existir en una muestra.