EVALUACIÓN DEL EFECTO ANSIOLÍTICO MEDIADO POR LA

SINERGIA DE DOS ESPECIES DEL GÉNERO Passiflora EN

RATONES DE LABORATORIO

SILVIA GONZÁLEZ NIEVES

Grupo de Ecofisiología del Comportamiento y Herpetología, Universidad de los Andes

RESUMEN: Las fitomedicinas representan una alternativa de tratamiento para la ansiedad y dentro de las

más usadas están las plantas del género Passiflora. El presente estudio pretende evaluar si existe una

sinergia entre extractos de Passiflora vitifolia y Passiflora smithii que produzca un efecto ansiolítico en

un ratones de laboratorio. Para medir si existe ansiolisis se utilizó la prueba estandarizada del laberinto

elevado en cruz. Los resultados fueron sometidos a un análisis discriminante lineal y se observó una

diferencia entre la actividad del extracto de P. smithii y el extracto combinado de P. vitifolia y P. smithii.

Palabras clave: Passiflora smithii, Passiflora vitifolia, ansiedad, laberinto elevado en cruz, fitomedicina.

Desde hace siglos, los desórdenes de

ansiedad han sido tratados con medicinas

herbales o fitomedicinas en la mayoría de

las poblaciones humanas. Actualmente, un

gran número de personas que padecen éstos

trastornos recurren al uso de las medicinas

alternativas como tratamiento (Sarris et al.,

2011). La investigación en este campo ha

venido creciendo en la última década

(García-García et al., 2008) generando

evidencia de la eficacia de algunas de estas

plantas.

Dentro de las fitomedicinas más usadas se

encuentran algunas especies del género

Passiflora (K. Dhawan, Dhawan, &

Sharma, 2004). Los efectos ansiolíticos de

estas plantas han sido usados desde antaño

por la medicina popular alrededor del

mundo debido a sus propiedades

ansiolíticas, sedativas, somníferas, anti-

convulsivas y anti-inflamatorias (Miyasaka,

Atallah, & Soares, 2007; Dhawan et

al.,2004).

La especie más estudiada de éste género es

P. incarnata. La acción ansiolítica y

sedativa de ésta planta está bien soportada

en modelos animales (Appel et al., 2011; K.

Dhawan et al., 2004). Adicionalmente, se

conoce su contenido químico que consta de

flavonoides y alcaloides; estos compuestos

actúan sobre el sistema nervioso central,

específicamente en receptores del ácido

gamma-aminobutírico (GABA), generando

como resultado ansiolisis (Elsas et al.,

2010; Lolli et al., 2007; Nassiri-Asl,

Shariati-Rad, & Zamansoltani, 2007).

La segunda especie más estudiada es

Passiflora edulis y ha sido establecida

como una fuerte depresora del sistema

nervioso central (Deng, Zhou, Bai, Li, & Li,

2010). Además, su actividad ansiolítica ha

sido demostrada en pruebas de laberinto

elevado en cruz en ratas (Petry et al, 2001;

Coleta et al., 2001). Otras especies con

ansiolisis comprobada son Passiflora

quadrangularis (de Castro et al., 2007), P.

coerulea (Medina et al., 1990), P. actinia

(Lolli et al., 2007) y P. alata (Petry et al.,

2001).

Asimismo, se ha comprobado la acción

sinérgica de extractos de Passiflora

incarnata con otras plantas. Capasso &

Sorentino (2005) demostraron la actividad

sinérgica de P. incarnata y Kava kava al

producir una disminución en la retoma

sináptica de serotonina en ratones de

laboratorio. También se reportó el efecto

sedativo mediado por la sinergia entre

Passiflora incarnata y Hypericum

perforatum en ratas (B. L. Fiebich, Knörle,

Appel, Kammler, & Weiss, 2011). Sin

embargo, hasta el momento los estudios

sobre de la acción sinérgica de compuestos

provenientes de diferentes plantas son muy

escasos (Sarris et al., 2011).

Este estudio pretende evaluar en un modelo

animal el efecto ansiolítico de la sinergia

entre extractos de Passiflora vitifolia y

Passiflora smithii, dos especies que hasta el

momento no han sido estudiadas en el

campo de la fitofarmacología.

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIAL VEGETAL

Las hojas de Passiflora smithii y P. vitifolia

fueron colectadas del municipio de La Vega

(Cundinamarca), donde son mantenidas en

cautiverio como alimento para mariposas.

Originalmente, P. smithii proviene de

Bucaramanga (Santander) y P. vitifolia de

Mocoa (Putumayo). Las concentraciones de

los metabolitos secundarios de plantas en

cautiverio pueden variar considerablemente

con respecto a aquellas mantenidas en

estado silvestre (Arthur, Guthrie & Newell,

1930).

PREPARACIÓN DE LOS EXTRACTOS

VEGETALES

Para la preparación de los extractos se

secaron las hojas en un horno a 55°C por

36 h. El polvo obtenido fue sometido a la

extracción en etanol 96% a 45 °C por 24

horas, usando una proporción de 10 g de

polvo por 400 mL de etanol, posteriormente

se filtró la mezcla (tamaño de poro del

papel filtro: 20-25 µm). La solución filtrada

fue secada nuevamente por 72 h a 55 ºC.

Finalmente el residuo fue diluido en

solución salina de cloruro de sodio 0.9%.

ANIMALES

Se utilizaron ratones blanco suizo obtenidos

del Bioterio del Departamento de Ciencias

Biológicas de la Universidad de los Andes.

Los ejemplares eran machos adultos.

Fueron mantenidos en cajas metálicas bajo

condiciones controladas, recibiendo agua y

comida ad libitum.

TRATAMIENTOS Y DOSIS

Se evaluaron cinco tratamientos: solución

salina 0.9% (control negativo), Passiflorina

® Funat (0.52 mg/kg) disuelta en solución

salina (control positivo) y los extractos de

Passiflora vitifolia (4.33 mg/kg), Passiflora

smithii (7.67 mg/kg) y Passiflora vitifolia

con P. smithii (V.S) ( P.smithii 3.83 mg/Kg

y P. vitifolia 2.15 mg/kg para una

concentración total de 5.98 mg/kg). Estas

concentraciones fueron las cantidades

obtenidas en la preparación de cada

extracto. Las sustancias fueron inyectadas

en la zona intraperitoneal 30 minutos antes

de las pruebas a un volumen de 1 mL/kg

LABERINTO ELEVADO EN CRUZ

Los ratones fueron transferidos al laberinto

30 minutos después de la administración de

cada tratamiento. Las dimensiones de la

arena fueron las estandarizadas para ésta

prueba (Walf & Frye, 2007). El laberinto

consiste de dos brazos abiertos (5 cm de

ancho X 30 cm de largo) y dos brazos

cerrados (5 X 30 X 15 cm de alto),

dispuestos perpendicularmente y unidos por

un cuadrado central (5 X 5 cm). El laberinto

está elevado 40 cm del suelo. Los animales

fueron localizados en el cuadrado central

del laberinto y se grabó en video toda su

actividad durante 5 minutos. Se midieron

distintas variables: tiempo gastado en

brazos abiertos y cerrados, en la zona

centro, el número de entradas tanto para los

brazos abiertos como para los cerrados y la

movilidad total. Cada ratón fue usado una

sola vez. Todas las pruebas fueron

realizadas en las horas de la mañana de 8:00

a.m. a 12:00 p.m. Para analizar los videos

se utilizó el software Ethovision ®

Figura 1. Análisis discriminante lineal para la prueba del laberinto elevado en cruz en

ratones de laboratorio para medir el efecto ansiolítico de extractos de dos especies de

Passiflora, la combinación de éstas y los respectivos controles. Variables: A. Movimiento

total, B. Entradas a brazos cerrados, C. Tiempo en zona centro, D. Tiempo en brazos

abiertos, E. Entradas a brazos abiertos. Sobre cada eje: gráficas de densidad de Kernel de

cada eje para cada tratamiento.

ANÁLISIS ESTADÍSTICOS

Las variables comportamentales medidas

fueron sometidas a una prueba de

correlación múltiple, la cual mostró

equivalencia entre las variables de brazos

abiertos y cerrados. Posteriormente,

descartando la variable de brazos cerrados

se realizó un análisis discriminante lineal.

Adicionalmente, se llevó a cabo el test de

Levene y se encontró que no existe

homogeneidad de varianzas entre

tratamientos para ninguna variable

(p>0.05).

RESULTADOS

El análisis discriminante lineal mostró

diferencias significativas en el

comportamiento de los ratones solo para

aquellos que fueron inyectados con extracto

de Passiflora smithii con respecto a los

inyectados con el extracto combinado de P.

smithii y P. vitifolia (V.S) (Figura1). En

este caso, las variables comportamentales

del extracto V.S presentaron mayores

valores en el eje canónico 1.

En cuanto al comportamiento de los

roedores con el extracto Passiflora smithii,

se observaron valores más bajos en ambos

ejes canónicos con respecto a los demás

tratamientos.

Significativamente no existió

homogeneidad de varianza entre

tratamientos para ninguna de las variables

(p>0.05). La varianza del control negativo

fue muy grande y V.S tuvo menor varianza

en todas las variables con respecto a los

demás tratamientos (Figura 1 y 2).

Figura 2. Variables medidas en la prueba del laberinto elevado en cruz en ratones de

laboratorio para medir el efecto ansiolítico de extractos herbales de dos especies de

Passiflora, la combinación de éstas y los respectivos controles: movimiento total,

proporción de tiempo gastado en brazos abiertos y proporción de tiempo gastado en

brazos cerrados, entradas a brazos abiertos y entradas a brazos cerrados.

En la Figura 2 se observa que el control

Passiflorina ® y P. smithii tuvieron

diferencias en el movimiento total, siendo

el último extracto el tratamiento que

registró los valores más inferiores en esta

variable. Finalmente, las demás variables

por si solas no mostraron diferencias

significativas entre tratamientos (Figura 2).

DISCUSIÓN

Este estudio es el primero en evaluar la

actividad ansiolítica de extractos de

Passiflora smithii y Passiflora vitifolia y

por lo tanto el primero en evaluar un efecto

sinérgico entre estas dos especies. Los

resultados obtenidos mostraron diferencias

entre el extracto de P. smithii y el extracto

combinado de las dos especies, siendo éste

último el de mayor actividad ansiolítica. Lo

anterior ocurrió aun cuando P. vitifolia por

sí sola no mostró diferencias con otros

tratamientos, incluido el control negativo.

Algunos estudios han reportado resultados

semejantes entre Passiflora incarnata y

especies de otros géneros. Capasso &

Sorentino (2005) encontraron que al

combinar extracto de P. incarnata con

extracto de Kava kava se potencializaba el

efecto anti-depresivo de Kava, a pesar que

P. incarnata por sí sola no tuvo efectos

significativos. Fiebich et. al (2011)

encontraron resultados similares al mezclar

extractos de Hypericum perforatum con P.

incarnata; en este estudio se encontró que

la actividad sedativa de Hypericum

mejoraba al estar en presencia de

Passiflora.

Otro resultado que cabe destacar fue la

reducción de la varianza en el extracto

combinado V.S en comparación a los otros

extractos y al control. Lo anterior implica

que este extracto produjo una

homogeneización del comportamiento de

los ratones.

Como ya se ha mencionado, P. smithii

mostró una reducción en el movimiento

total, esto puede estar indicando la

existencia de propiedades sedativas de este

extracto. Según Rolland et. Al (1991) una

sustancia ansiolítica presenta actividad

sedativa en altas concentraciones y a bajas

concentraciones se presenta la actividad de

ansiolisis esperada. En base a lo anterior, el

extracto de P. smithii representa un fuerte

ansiolítico; por lo tanto, se podría

hipotetizar que a muy bajas dosis se

presentaría un efecto ansiolítico.

Teniendo en cuenta lo anterior, surge otra

posible explicación a la mayor actividad

ansiolítica del extracto V.S. Puede ser que

sólo P. smithii esté actuando en este

extracto y se obtuvo un mejor resultado

porque en el extracto combinado la

concentración de esta planta disminuyó. En

consecuencia, serían necesarios nuevos

estudios en los cuales se aborde la curva de

acción dependiendo de la concentración de

esta especie.

En el análisis discriminante las variables

con mayor peso fueron el movimiento total

y el número de entradas a brazos abiertos.

Un incremento en la actividad locomotora

total es considerado un indicador de

ansiolisis (Dalvi & Rogers, 1999), así como

el aumento las entradas a brazos abiertos

(Pellow et. al, 1985). Lo anterior permite

decir que este análisis muestra el efecto

ansiolítico global de los extractos. Además,

los análisis monovariados no permitieron

observar las diferencias que el análisis

multivariado arrojó. Lo anterior permite

proponer un análisis multivariado como una

mejor aproximación a la medición de

actividad ansiolítica de una sustancia.

En conclusión, se obtuvo una mayor

actividad ansiolítica del extracto de P.

smithii cuando a éste se le agregó extracto

de P. Vitifolia; esto se puede deber a una

sinergia entre las dos especies o a una

disminución de la concentración en el

extracto de P. smithii. Finalmente, ésta

última especie puede ser un fuerte

ansiolítico a muy bajas concentraciones y

en dosis mayores producir un efecto

sedativo.

LITERATURA CITADA

Appel, K., Rose, T., Fiebich, B., Kammler,

T., Hoffmann, C., & Weiss, G. (2011).

Modulation of the γ‐aminobutyric acid

(GABA) system by Passiflora incarnata .

Phytotherapy Research, 25(6), 838-843.

Arthur, J.M., Guthrie, J.D., & Newell J.M.

(1930). Some effects of artificial climates

on the growth and chemical composition of

plants. American Journal of Botany, 17 (5),

416-482

de Castro, P. C. F., Hoshino, A., Silva, J.

C. da, & Mendes, F. R. (2007). Possible

anxiolytic effect of two extracts of

Passiflora quadrangularis in experimental

models. Phytotherapy Research, 21(5),

481-484.

Coleta M., Campos MG., Cotrim MD.,

&Cunha AP. (2001). Comparative

evaluation of Melissa officinalis , Tilia

europaea, Passiflora edulis Sims and

Hypericum prforatum in the elevated plus

maze anxiety test. Pharmacopsychiatry, 34,

S20-S21.

Dalvi, A., & Rodgers, R.J.,(1999).

Behavioral effects of diazepam in the

murine plus-maze: flumazenil antagonism

of enhanced head dipping but not the

desinhibition of open-arm avoidance.

Pharmacology Biochemistry and Behavior,

62, 727-734.

Deng, J., Zhou, Y., Bai, M., Li, H., & Li, L.

(2010). Anxiolytic and sedative activities of

Passiflora edulis f. flavicarpa. Journal of

Ethnopharmacology, 128(1), 148-153.

Dhawan, K., Dhawan, S., & Sharma, A.

(2004). Passiflora: a review update.

Journal of Ethnopharmacology, 94(1), 1-

23.

Elsas, S.-M., Rossi, D. J., Raber, J., White,

G., Seeley, C.-A., Gregory, W. L., Mohr,

C., et al. (2010). Passiflora incarnata

(Passionflower) extracts elicit GABA

currents in hippocampal neurons in vitro,

and show anxiogenic and anticonvulsant

effects in vivo, varying with extraction

method. Phytomedicine, 17(12), 940-949.

Fiebich, B. L., Knörle, R., Appel, K.,

Kammler, T., & Weiss, G. (2011).

Pharmacological studies in an herbal drug

combination of St. John’s Wort (Hypericum

perforatum) and passion flower (Passiflora

incarnata): In vitro and in vivo evidence of

synergy between Hypericum and Passiflora

in antidepressant pharmacological models.

Fitoterapia, 82(3), 474-480.

García-García, P., López-Muñoz, F., Rubio,

G., Martín-Agueda,&B., Alamo, C.(2008).

Phytotherapy and psychiatry: Bibliometric

study of the scientific literature from the

last 20 years. Phytomedicine, 15, 566-576.

Lolli, L. F., Sato, C. M., Romanini, C. V.,

Villas-Boas, L. D. B., Santos, C. A. M., &

Oliveira, R. M. W. de. (2007). Possible

involvement of GABAA-benzodiazepine

receptor in the anxiolytic-like effect

induced by Passiflora actinia extracts in

mice. Journal of Ethnopharmacology,

111(2), 308-314.

Medina, J. H., Paladini, A. C., Wolfman,

C., de Stein, M. L., Calvo, D., Diaz, L. E.,

& Peña, C. (1990). Chrysin (5,7-di-OH-

flavone), a naturally-occurring ligand for

benzodiazepine receptors, with

anticonvulsant properties. Biochemical

Pharmacology, 40(10), 2227-2231.

Miyasaka, L. S., Atallah, A. N., & Soares,

B. G. O. (2007). Passiflora for anxiety

disorder. Cochrane Database of Systematic

Reviews (Online), (1), CD004518.

Nassiri-Asl, M., Shariati-Rad, S., &

Zamansoltani, F. (2007). Anticonvulsant

effects of aerial parts of Passiflora

incarnata extract in mice: involvement of

benzodiazepine and opioid receptors. BMC

Complementary and Alternative Medicine,

7, 26.

Pellow, S., & File, S.E.,(1986). Anxiolytic

and anxiogenic drug effects on exploratory

activity in an elevated plus-maze: a novel

test of anxiety in the rat. Pharmacology

Biochemistry and Behavior, 24, 525-529.

Petry RD., Reginatto F., de-Paris F. et

al.(2001).Comparative pharmacology study

of hydroethanol exracts of Passiflora alata

and Passiflora edulis leaves. Phytotherapy

15, 162-164.

Rolland, A., Fleurentin, J.,Lanhers, M.C.,

Younos, C., Misslin, R., Montier, F.,& Pelt,

J.M.,(1991). Behavioural effects of

American traditional plant Eschscholzia

californica: sedative and anxiolytic

properties. Planta Medica 2, 212-216. doi:

Sarris, J., Panossian, A., Schweitzer, I.,

Stough, C., & Scholey, A. (2011). Herbal

medicine for depression, anxiety and

insomnia: A review of

psychopharmacology and clinical evidence.

European Neuropsychopharmacology: The

Journal of the European College of

Neuropsychopharmacology.

Shin, L. M., & Liberzon, I. (2009).

TheNeurocircuitry of Fear, Stress, and

Anxiety Disorders.

Neuropsychopharmacology, 35(1), 169-

191.Walf, A. A., & Frye, C. A. (2007). The

use of the elevated plus maze as an assay of

anxiety-related behavior in rodents. Nat.

Protocols, 2(2), 322-328.