Proteinas chaperonas asociadas a MICA en placenta humana

T.M. Antonio Serrano G.Doctorado en Bioquímica

Fac. Cs Qcas. y FarmacéuticasU. de Chile

NK

NK enlaza Inmunidad Innata y adaptativa

NKG2D

Ligandos de NKG2D

Ligandos de NKG2D

MICA

MICA y Stress

Groh PNAS 1996

• Proteína de membrana que se presenta en células sometidas

• Stréss térmico• Infecciones por virus•Transformación maligna.

•Gen activado por HSPs

MICA en Melanoma

Inmunogenética, UBA, Manuscrito

MICA en placenta

Mincheva-Nilsson, J Immunol 2006

MICA en placenta

Multicomplejo de Chaperonasen stress

Entonces

• Ante stress se acumula MICA en RE• Sobre expresion de Vasostatina en melanoma

produce acumulacion de MICA en reticulo• No se han detectado variantes de splicing y no

posee secuencia de retención en RE• Folding• Proteínas Chaperonas

• Mecanismo de Evasión Inmune– Tumoral– Placenta

En Placenta

• Se conoce que en este órgano existe una gran cantidad de IL-10 en el trofoblasto como mecanismo de escape inmune permitiendo la sobrevida del feto

• Regulación de expresión de moléculas relacionadas al complejo mayor de histocompatibilidad por citoquinas.

Entonces…

• IL-10 induce baja de MHC-1 en membrana • IL-10 induce baja de MHC-2 en membrana • IL-6 induce baja de MHC-2 en membrana (Stat3)• INF-g aumenta MHC I en membrana (TAP y LPM2/7)• MHC-II aumento transactivador CIITA

Hipótesis

• MICA es retenido en retículo endoplasmico de trofoblasto temprano por interacción con un multicomplejo de chaperonas

• Citoquinas modulan retención de MICA en retículo endoplasmico por acción de proteínas chaperonas o del sistema de exportación a membrana en células de citotrofoblasto

Objetivo

• Determinar proteínas asociadas a MICA en su acumulacíon en retículo endoplasmico de células trofoblásticas tempranas.

• Determinar influencia de citoquinas en la acumulación de MICA en retículo endoplasmico de células del de citotrofoblasto

1) Detectar MICA asociado a retículo endoplásmico y a moléculas chaperonas en placenta y citotrofoblasto.

Tejido Citologia

MICA GolgiCALR

Confocal

IHQMICA

Placenta 1er Trimestre

HSJ

CITOTROFOBLASTO CULTIVO

Sin tto

IL-10

INF-g

FACS MEMBRANA INTRACELULAR

2) Detectar Variaciones de MICA Intracelular y de membrana según condición de citoquinas

MICA

3) Detectar Proteínas asociadas a MICA en fracción microsomal de placenta.

Inmunoprecipitacion

Ultracentrifugación

MICA

Placenta 1er Trimestre

HSJ

Fracción Microsomal

SDS PAGE 2D

4) Identificar proteínas asociadas a MICA en fracción microsomal de placenta.

Inmunoprecipitacion

MICA

CALX

HSP

CRT

MALDI/TOF

MICA

SDS PAGE 2DCITOTROFOBLASTO CULTIVO

Sin tto

IL-10

INF-g

RT-PCR Semi-Q

5) Identificar proteínas asociadas a MICA en fracción microsomal de placenta, que varían según citoquina

Proyeciones

• Determinar comunicación entre via de IL-10 y Ing-g y chaperonas

• Correlacionar hallazgos con células de melanoma, Ca. de próstata.

• Determinar nuevos mecanismos de evasion inmune :

– Células malignas– Protección al feto– Mecanismos autoimunes