UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD CIENCIAS QUÍMICAS

MODALIDAD:

INVESTIGACIÓN

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA DE LA

MEZCLA HIDROALCOHÓLICA DE MATRICARIA CHAMOMILLA Y

URTICA URENS EN RATAS WISTAR

TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA

OPTAR AL GRADO DE QUÍMICOS Y FARMACÉUTICOS

AUTORES:

GRACE PATRICIA BORBOR TOMALÁ

KLEBER JAVIER COLOMA ENCALADA

TUTOR (A):

Q.F. GLENDA MARCELA SARMIENTO TOMALÁ M. Sc.

CO – TUTOR (A):

Q.F. ZORAIDA DEL CARMEN BURBANO GÓMEZ M. Sc.

GUAYAQUIL - ECUADOR

2015

i

APROBACIÓN DEL TUTOR

En calidad de tutor/a del Trabajo de Titulación, Certifico: Que he asesorado,

guiado y revisado el trabajo de titulación en la modalidad de investigación,

cuyo título es Evaluación de la actividad antiinflamatoria de la mezcla

hidroalcohólica de Matricaria chamomilla y Urtica urens en ratas wistar,

presentado por Grace Patricia Borbor Tomalá, con cédula de ciudadanía Nº

093085625-7, y por Kleber Javier Coloma Encalada, con cédula de ciudadanía

Nº 092839818-9, previo a la obtención del título de Químicos y Farmacéuticos.

Este trabajo ha sido aprobado en su totalidad y se adjunta el informe de Anti-

plagio del programa URKUND. Lo Certifico.-

Guayaquil, octubre 2015

ii

CERTIFICADO DE URKUND

iii

CERTIFICADO DEL TRIBUNAL

El Tribunal de Sustentación del Trabajo de Titulación de la Srta. GRACE

PATRICIA BORBOR TOMALÁ y del Sr. KLEBER JAVIER COLOMA

ENCALADA después de ser examinado en su presentación, memoria científica

y defensa oral, da por aprobado el Trabajo de Titulación.

iv

CARTA DE AUTORÍA DEL TRABAJO DE TESIS

Guayaquil 15, octubre 2015

Yo, Grace Patricia Borbor Tomalá y Kleber Javier Coloma Encalada,

autores de este trabajo declaro ante las autoridades de la Facultad de Ciencias

Químicas de la Universidad de Guayaquil, que la responsabilidad del contenido

de este TRABAJO DE TITULACIÓN, me corresponde a mi exclusivamente; y

el patrimonio intelectual de la misma a la Facultad de Ciencias Químicas de la

Universidad de Guayaquil.

Declaro también es de mi autoría, que todo el material escrito, salvo el que

está debidamente referenciado en el texto. Además ratifico que este trabajo no

ha sido parcial ni totalmente presentado para la obtención de un título, ni en

una Universidad Nacional, ni una Extranjera.

v

AGRADECIMIENTO

A Dios, a mí mamá Mariana Encalada, quien fue mí apoyo incondicional, mí

pilar en todo momento; mí tutora la Q.F. Glenda Sarmiento M. Sc., quien nos ha

guiado con su esfuerzo y apoyo a esta gran meta final; a nuestra co-tutora Q.F.

Zoraida Burbano M. Sc., al Dr. Oswaldo Pesantes, a mí amiga y compañera de

tesis Grace Borbor y a mis amigos. Además agradezco a la Facultad de

Ciencias Químicas y a mis maestros por los conocimientos adquiridos.

Kleber Coloma Encalada.

vi

AGRADECIMIENTO

A Dios, a mis padres, a mí esposo, a mí hijo Jeremy que mediante sus sonrisas y

lágrimas fortaleció mí entusiasmo de persuadir este objetivo, a mis amigos

Lourdes Puig, Kleber Coloma que sin su compañía no hubiésemos logrado

obtener resultados en este trabajo, a Kenny Oleas, Cyntia Betancourt que nos

brindaron su apoyo desde la distancia, y a Fernando Lara que siempre nos

brindó su ayuda incondicional. Agradezco además a la Universidad de

Guayaquil, Facultad de Ciencias Químicas, a mí tutora Q.F. Glenda Sarmiento

M. Sc. debó de agradecerle su comprensión, paciencia y dedicación, a nuestra

querida cotutora Q.F. Zoraida Burbano M. Sc. que nos facilitó el área de

PROGECA y al Q.F. Oswaldo Pesantes que nos permitió trabajar en el

Laboratorio de Fitoquímica en los inicios de este proyecto.

Grace Borbor Tomalá.

vii

ÍNDICE GENERAL

APROBACIÓN DEL TUTOR i

CERTIFICADO DE URKUND ii

CERTIFICADO DEL TRIBUNAL iii

CARTA DE AUTORÍA DEL TRABAJO DE TESIS iv

AGRADECIMIENTO v

ÍNDICE GENERAL vii

ÍNDICE DE FIGURAS xi

ÍNDICE DE TABLAS xii

RESUMEN xv

ABSTRACT xvi

Introducción 1

Planteamiento del problema 3

Formulación del problema 5

Justificación 6

Objetivos 8

Hipótesis 9

Variables 10

Variables, conceptualización e indicadores 11

CAPITULO I

1.1 Antecedentes 12

1.1.1 Estudios de la Urtica 12

1.1.2 Estudios de la de la Matricaria chamomilla 13

1.1.3 Estudio del arte 15

1.2 Fundamentos teóricos 17

1.2.1 Ortiga 17

viii

1.2.1.1 Características macroscópicas y microscópicas 17

1.2.1.2 Composición química 18

1.2.1.3 Mecanismo de acción 19

1.2.1.4 Contraindicaciones 19

1.2.2 Manzanilla 19

1.2.2.1 Características macroscópicas y microscópicas 20

1.2.2.2 Composición química 20

1.2.2.3 Mecanismo de acción 22

1.2.2.4 Contraindicaciones 23

1.2.3 Flavonoides 23

1.2.4 Taninos 24

1.2.5 Mecanismo de acción de los flavonoides y taninos 25

1.2.6 Carragenina 26

1.2.6.1 Mecanismo de acción de la carragenina 26

1.2.7 Inflamación 27

1.2.7.1 Factores desencadenantes 28

1.2.7.2 Respuesta inmune 29

1.2.7.3 Mecanismos de acción que intervienen en la inflamación 30

1.2.8 AINEs (Antiinflamatorios No Esteroides) 31

1.2.8.1 Fármacos antiinflamatorios (AINEs) 31

1.2.8.2 Mecanismo de acción de los AINEs 33

1.2.8.3 Indicaciones terapéuticas 36

1.2.8.4 Reacciones adversas medicamentosas 36

1.2.8.5 Efectos indeseables 37

1.2.8.5.1 Efectos gastrointestinales 37

1.2.8.5.2 Efectos cardiovasculares 38

1.2.8.5.3 Efectos renales 39

1.2.8.5.4 Hipertensión arterial 39

1.3 Glosario 40

CAPITULO II

2.1 Métodos científicos empleados en la investigación 45

2.1.1 Diagrama de flujo 45

2.1.2 Métodos teóricos 46

ix

2.1.3 Métodos empíricos 46

2.1.4 Métodos matemáticos o estadísticos 46

2.2 Metodología 46

2.2.1 Adquisición de las especies 47

2.2.2 Parámetros Físico y Fisicoquímicos de las especies vegetales 47

2.2.2.1 Humedad 47

2.2.2.2 Cenizas 48

2.2.2.3 Screening− Taminzaje Fitoquímico 49

2.2.2.3.1 Alcaloides 49

2.2.2.3.1.1 Ensayo de Dragendorff 49

2.2.2.3.1.2 Ensayo de Mayer 49

2.2.2.3.1.3 Ensayo de Wagner 50

2.2.2.3.2 Saponinas 50

2.2.2.3.3 Cumarinas 50

2.2.2.3.4 Triterpenos y/o esteroides 50

2.2.2.3.4.1 Ensayo de Lieberman-Bouchard 50

2.2.2.3.5 Azúcares reductores 51

2.2.2.3.5.1 Ensayo de Fehling 51

2.2.2.3.6 Compuestos fenólicos y/o taninos 52

2.2.2.3.6.1 Ensayo de Cloruro Férrico 52

2.2.2.3.7 Flavonoides 52

2.2.2.3.7.1 Ensayo de Shinoda 52

2.2.3 Extractos Hidroalcohólicos 53

2.2.3.1 Extracción de los principios activos de Matricaria chamomilla y Urtica

urens 53

2.2.3.2 Obtención de las mezclas hidroalcohólicas de Matricaria chamomilla y

Urtica urens 53

2.2.4 Parámetros Físico y Fisicoquímicos de los extractos hidroalcohólicos y

mezcla 54

2.2.4.1 Características Organolépticas 54

2.2.4.1.1 Olor 54

2.2.4.1.2 Color 54

2.2.4.2 Determinación de los Sólidos Totales 55

2.2.4.3 Determinación de la Densidad Relativa 56

x

2.2.4.4 Determinación del pH de los extractos 56

2.2.5 Cuantificación de principios activos 57

2.2.5.1 Cuantificación de quercetina 57

2.2.5.2 Cuantificación de taninos 59

2.2.6 Estudio Farmacológico 60

2.2.6.1 Material biológico 60

2.2.6.2 Materiales y Métodos “Actividad Antiinflamatoria” 60

2.2.6.2.1 Materiales 60

2.2.6.2.2 Reactivos 60

2.2.6.3 Método 61

2.2.6.3.1 Conformación de grupos tratamientos 61

2.2.6.3.2 Inducción del Edema Plantar 63

2.2.6.3.3 Medición de la Inflamación plantar 64

2.2.7 Bioética 64

2.2.8 Resultados 65

2.2.9 Cálculos de los resultados 65

2.2.10 Análisis de los resultados 65

2.3 Tipo de investigación 66

2.4 Diseño experimental de la investigación 66

CAPITULO III

3.1 Análisis Físico y Fisicoquímicos 67

3.1.1 Humedad 67

3.1.2 Cenizas 68

3.1.3 Screening o Tamizaje Fitoquímico 69

3.1.4 Análisis Físico y Fisicoquímicos en los extractos hidroalcohólicos

independientes y mezcla hidroalcohólica 71

3.2 Cuantificación de los principios activos presentes en las especies vegetales

y mezcla hidroalcohólica (80O:20M) 72

3.2.1 Quercetina 73

3.2.2 Taninos 74

3.3 Evaluación de la Actividad Antiinflamatoria 75

3.3.1 Primera fase 75

xi

3.3.2 Segunda fase 82

Conclusiones 91

Recomendaciones 93

Referencias Bibliográficas 94

Anexos 101

xii

ÍNDICE DE FIGURAS

Figura I. Estructura química del α-bisabolol.

Figura II. Estructura molecular de los flavonoides.

Figura III, Clasificación de los taninos.

Figura IV. Estructura química de la carragenina.

Figura V. Aspectos básicos en un proceso inflamatorio.

Figura VI. Fases de la inflamación.

Figura VII. Isoformas de la ciclo-oxigenasa.

Figura VIII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la primera

Fase de la primera hora.

Figura IX. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la primera

Fase de la tercera hora.

Figura X. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la primera

Fase de la quinta hora.

Figura XI. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda

Fase de la primera hora.

Figura XII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda

Fase de la tercera hora.

Figura XIII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda

Fase de la quinta hora.

xiii

ÍNDICE DE TABLA

Tabla I. Conceptualización de las variables e indicadores

Taba II. Composición Química de la Urtica urens

Tabla III. Componentes del aceite esencial de manzanilla (matricaria

chamomilla).

Tabla IV. Clasificación de los AINEs, según su capacidad para inhibir la COX.

Tabla V. Diluciones para la elaboración de la curva de calibrado.

Tabla VI. Tratamiento de los extractos para la cuantificación de quercetina.

Tabla VII. Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria:

Urtica urens y Matricaria chamomilla de las Mezclas hidroalcohólicas (Primer

Ensayo).

Tabla VIII. Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria:

Urtica urens y Matricaria chamomilla de los extractos independientes frente a la

mezcla hidroalcohólica 80O:20M (Segundo Ensayo).

Tabla IX. Tabla de resultados de los porcentajes de humedad en especies

vegetales.

Tabla X. Tabla de resultados de los porcentajes de cenizas en especies

vegetales.

Tabla XI. Screening Fitoquímico de las especies vegetales de ortiga (Urtica

urens) y manzanilla (Matricaria chamomilla), en extracto acuoso y hidro-

alcohólico.

Tabla XII. Caracterización Organoléptica de los extractos independientes y

mezcla hidro-alcohólica (80O:20M).

Tabla XIII. Determinación de Solidos Totales; Densidad Relativa, y pH de las

especies vegetales y mezcla hidroalcohólica (80O:20M)

Tabla XIV. Cuantificación de Quercetina de ambas especies vegetales y mezcla

hidroalcohólica (80O:20M) en alcohol al 70%.

Tabla XV. Cuantificación de Taninos Totales de extracto de Urtica urens y

mezcla hidroalcohólica (80O:20M)

xiv

Tabla XVI. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con

su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la primera fase de la evaluación durante la Primera Hora Post-

Inducción

Tabla XVII. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con

su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la primera fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-

inducción.

Tabla XVIII. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con

su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la primera fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-

inducción.

Tabla XIX. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con

su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Primera Hora post-

inducción.

Tabla XX. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con

su respectiva desviación estándar, y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-

inducción.

Tabla XXI. Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con

su respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-

inducción.

xv

RESUMEN

La acción farmacológica de fármacos con fines terapéuticos; está unida al riesgo

de aparición de efectos indeseables, debe evitarse el uso inadecuado de

medicamentos. Se han desarrollado estudios a partir de extractos de manzanilla

y ortiga por separado, demostrando su actividad como antiinflamatorio. El

presente estudio tuvo como objetivo evaluar la mezcla de los extractos

hidroalcohólicos de ambas especies vegetales, y extractos independientes. El

estudio se realizó en dos fases: la primera consistió en determinar que

concentración de las mezclas hidroalcohólicas; presentó menor porcentaje de

inflamación, se formó 5 grupos de 4 animales cada uno, un grupo control

negativo sin tratamiento con inflamación, control positivo tratado con diclofenaco,

los grupos tratados con las mezclas de manzanilla y ortiga (20:80); (50:50);

(80:20), respectivamente. En tanto, que en la segunda fase consistió en

comparar la mezcla hidroalcohólica con mayor actividad farmacológica de la fase

uno, frente a los extractos independientes. En cada una de las fases se

administró una hora antes los tratamientos, luego se indujo la inflamación con

carragenina al 2%, a nivel plantar en los animales de los diferentes grupos

tratados, se realizó las lecturas a partir de la tercera hora post- inducción. En la

primera fase, de la quinta hora se encontró los siguientes porcentajes de

inflamación: control negativo (48,6±10%), diclofenaco (34,61±4,43%), y el grupo

muestra 80O:20M (14,35±3,59%); determinando que el grupo muestra 80O:20M

posee mayor actividad antiinflamatoria. En la segunda fase, de la quinta hora se

encontró los siguientes porcentajes de inflamación: control negativo (45±20%),

grupo muestra 80O:20M (13,6±5%), diclofenaco (22,9±2,95%). De lo que se

puede concluir que, el efecto antinflamatorio lo presentó la mezcla

hidroalcohólica (80O:20M), al potenciar su acción mediante el uso de dos

especies vegetales.

Palabras claves: extractos hidroalcohólicos; Urtica urens, Matricaria

chamomilla; mezcla hidroalcohólica; carragenina; actividad antiinflamatoria.

xvi

ABSTRACT

The pharmacological action of drugs with therapeutic purposes; is attached to the

risk of occurrence of undesirable effects, the inappropriate use of medications

should be avoided. Studies from extracts of Chamomile and nettle separately,

showing as an anti-inflammatory activity have been developed. The present study

aimed to evaluate the mix of both plants species hydroalcoholic extracts, and

independent extracts. The work was carried out in two phases: the first was to

determine concentration of hydroalcoholic mixtures; presented lower percentage

of inflammation, It was formed 5 groups of 4 animals each one, a negative control

group without treatment with inflammation, positive control treated

with diclofenac, the groups treated with mixtures of Chamomile and nettle

(20:80); (50:50); (80:20), respectively. Meanwhile, that in the second phase it

consisted in comparing the mixture hydro-alcoholic with increased

pharmacological activity of the phase one, against independent extracts. In each

of the phases was administered one hour before the treatments, after

inflammation was induced with carrageenan to 2%, to level planting in the

different groups of treated animals, held readings from the third hour post-

induction. In the first phase, the fifth time found the following percentages of

inflammation: negative control (48,6±10%), diclofenac (34,61±4.43%), and

the Group shows 80O:20M (14,35±3.59%); determining the group

shows 80O:20M has greater anti-inflammatory activity. The following percentages

of inflammation was found in the second phase of the fifth hour: negative control

(45±20%), group shows 80O:20 M (13,6±5%), diclofenac (22,9±2.95%). Can in

fact the anti-inflammatory effect presented the hydro-alcoholic (80O:20 M), the

mixture to enhance its action through the use of two plant species.

Key words: extracts hydroalcoholic; Urtica urens, Matricaria chamomilla; mixing

hydroalcoholic; carrageenan; anti-inflammatory activity.

1

INTRODUCCIÓN

La inflamación se debe a procesos fisiopatológicos que se produce como una

respuesta a estímulos externos, como: infecciones, lesiones en las que el

organismo necesita defenderse ante estas agresiones (Rodríguez, s. f.). La

inflamación se produce en algunas fases en la existe vasodilatación local,

infiltración leucocitaria, aumento de la permeabilidad capilar y signos de fase

crónica, se puede presentar degeneración y fibrosis de tejidos afectados, en este

mecanismo intervienen factor activador de plaquetas, eicosanoides, citocinas,

histamina y bradicinina (Salaices, 2012).

En muchas ocasiones la inflamación es temporal, proceso característico de la

misma, está determinada en relación al tiempo de acuerdo a la causa que la

desencadenó; en tanto que otras, cuando las agresiones son autoinmunes

generan procesos en cascada (vasodilatación, quimiotaxis), lo que conlleva a

una patología crónica; haciendo así, que el paciente consuma frecuentemente

ciertos fármacos que alivien el malestar que se produce como consecuencia esta

afectación (Herrera, García, Herrera, Pérez, & Saura, 2006).

Por otro lado, existen fármacos Antinflamatorios No Esteroideos (AINEs), que

poseen actividad antiflogística; debido a sus acciones farmacológicas, con

frecuencia se autoprescriben sin control médico para aliviar dolores, ya sea

como fármacos aislados o asociados. Muchos de ellos presentan una capacidad

elevada de provocar reacciones adversas de intensidad y gravedad, de las

cuales generalmente, los consumidores no son conscientes de la toxicidad que

puede ser aguda o crónica en dependencia del consumo; resulta de gran interés

epidemiológico, siendo motivo de preocupación a nivel mundial.

En muchos países utilizan raíces y hojas de la Urtica urens y las flores de la

Matricaria como tratamiento en la medicina tradicional. Estudios realizados han

demostrado que el aceite esencial y los flavonoides de la Matricaria chamomilla,

2

serían los responsables del efecto farmacológicos mencionado, al inhibir la

inflamación, y regular las distintas actividades celulares de las ciclooxigenasas

(COX), además, bloquea la formación de las prostaglandinas, leucotrienos. En

tanto, que el mecanismo de acción de la ortiga, radica fundamentalmente en

inhibir la COX y LOX (lipooxigenasas); la producción de prostaglandinas y

leucotrienos se encuentran disminuidos. Lo que ha sido demostrado en varios

modelos con animales en la que algunos flavonoides inhiben la inflamación

crónica a través de diversos mecanismos (Muñoz, et al., 2012).

Por lo expuesto, se hace necesario realizar una investigación que permita

aportar conocimientos sobre la actividad sinérgica de los componentes que

posee la Matricaria chamomilla y la Urtica urens, y que presentan actividad

antiinflamatoria. El presente estudio comprende varios capítulos, los mismos que

se encuentran distribuidos como a continuación se detalla: en la primera sección

encontraremos lo relacionado objetivos, hipótesis, variables que se miden para

establecer la actividad anti-inflamatoria; planteamiento del problema,

justificación, antecedentes de las bases conceptuales en la que se fundamenta

la realización de esta investigación de estudios que existen, y se ha demostrado

que debido a la presencia de principios activos como: flavonoides y taninos

actúan como anti-inflamatorios.

El segundo capítulo, incluye lo referente al mecanismo de inflamación,

componentes presentes en la manzanilla y ortiga; mecanismo de acción,

acciones farmacológicas con respecto a los grupos químicos, fármacos

antiinflamatorios (AINEs), reacciones adversas. En el tercer apartado se

encuentra la obtención de los extractos, los análisis físicoquímicos que se les

realizó tanto a las especies vegetales, como a los extractos; para su

identificación, cuantificación y valoración de la actividad antiinflamatoria de los

extractos aislados y en mezclas. En otro apartado, encontramos los resultados y

análisis, en el que se detalla los hallazgos y las respuestas en los diferentes

momentos de evaluación. Finalmente, están las conclusiones, recomendaciones,

a las que se llegó en base a los resultados.

3

PROBLEMA

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Enunciado/Contextualización

Alrededor del mundo existen personas que por múltiples factores reciben

medicación, sea por prescripción médica, automedicación para el control del

dolor leve a moderado; como consecuencia de procesos inflamatorios, ya sea

por presentar enfermedades tales como: artritis reumatoide, esclerosis sistémica,

ruptura espontáneas de huesos, fracturas, lesiones, tendinitis, osteomielitis,

trastornos inflamatorios de la pelvis femenina, procesos inflamatorios de la

próstata, osteoporosis, entre otros (INEC, 2013).

Según, datos estadísticos, el consumo de antiinflamatorios no esteroideos

(AINEs) se encuentran en el segundo lugar en referencia después de los

antibióticos betalactámicos (Duarte de Prato, 2010). De acuerdo a la

Organización Mundial de la Salud (OMS), existen tres escalones en que en cada

nivel está representado por fármacos específicos de acuerdo a la intensidad del

dolor que van desde los opioides potentes, opioides débiles hasta los AINEs

(Anexo1) (Prieto Setién, 2007).

El consumo de AINEs, posee un efecto máximo de techo, es decir, que el

incremento de dosis no mejora la actividad terapéutica, pero si incrementa los

efectos adversos, por lo tanto, el tratamiento por su uso irracional, continuo, y

muchas veces prolongado produce reacciones adversas y genera patologías

(Prieto Setién, 2007), que pueden ir desde una alergia hasta complicaciones

mayores a nivel tracto gastrointestinal y renal (Duarte de Prato, 2010).

4

Por consiguiente, se hace necesario realizar esta investigación con la

finalidad de comparar la efectividad y eficacia de la actividad antiinflamatoria de

Matricaria chamomilla y Urtica urens respectivamente, frente a la mezcla

hidroalcohólica de ambas especies en ratas Wistar, cuya concentración ejerce

mayor actividad antiinflamatoria. De tal forma indicar que la mezcla

hidroalcohólica de Matricaria chamomilla y Urtica urens, desempeña mejor efecto

terapéutico a comparación del estudio por separado de ambas especies, por lo

cual se propone emplear dicha mezcla fitoterapéutica como un coadyuvante

natural que actúe como antiinflamatorio, conservando su eficacia terapéutica, de

manera que posea un mínimo de efectos adversos sobre todo en aquellos

tratamientos a largo plazo.

5

FORMULACIÓN DEL PROBLEMA

¿Es posible establecer el nivel de concentración de la mezcla hidroalcóholica

de Matricaria chamomilla y Urtica urens, con mayor actividad terapéutica entre

los diferentes grupos tratados y demostrar la acción sinérgica al ser comparado

frente a los extractos aislados de las plantas que contiene la misma proporción

de principios activos que en la mezcla estudiada?

6

JUSTIFICACIÓN

Estudios realizados por el FDA (Federal Drug administration), indican que el

21% de los AINEs en Estados Unidos son la causa más frecuente de producir

reacciones medicamentosas (RAM). En España, el 35% de las reacciones

medicamentosas (pacientes que acuden a consultas), se deben al uso de AINEs

(Duarte de Prato, 2010).

Las reacciones adversas se dan por factores como los dependientes del

fármaco o del paciente, tales como: la edad, sexo, raza, debido a que ciertos

grupos étnicos muestran más sensibilidad de presentar procesos alérgicos, o

también cuando padecen de alguna patología (Jara Arévalo, Jaramillo Castro, &

Macías Matamoros, 2011).

Las lesiones de la mucosa gástrica en pacientes que consumen AINEs por un

período de 3 meses se da en un 40%, así también como en personas mayores

de 60 años, pudiendo estas lesiones causar perforaciones o hemorragias lo que

ocasiona un incremento en el número de ingresos hospitalarios y muertes

(Ponte, s.f.). Existen otros factores de riesgo, tales como: la presencia del H

Pylori, tabaquismo y el consumo crónico de alcohol que administrado

conjuntamente con algún tipo de AINEs, generan toxicidad a nivel

gastrointestinal (Jara Arévalo, Jaramillo Castro, & Macías Matamoros, 2011).

Según, OMS (2012), estableció que la Artritis Reumatoide (proceso de

inflamación severa), afecta a un 30% de la población mundial, donde se calcula

que quienes la padecen en su mayor porcentaje son mujeres entre 30 y 50 años

de edad.

7

Un estudio realizado en año 2011 en Cuenca, se obtuvo que la frecuencia de

razón de automedicación de AINEs, era la siguiente: 52,4%, cefalea; 38,5%,

lumbalgia; 31,8%, dolor muscular; 20,3%, malestar general; 19,2%, artrosis;

14%, dismenorrea; 11,2%, traumatismo sin fractura; 1,4%, fracturas (Jara

Arévalo, Jaramillo Castro, & Macías Matamoros, 2011).

El objetivo 3 del Plan del Buen Vivir de la salud, plantea garantizar

condiciones de fomentar la salud, y a partir de prevenir las enfermedades de las

personas para el mejoramiento de su calidad de vida (Secretaría Nacional de

Planificación y Desarrollo, 2009).

El tratamiento de enfermedades puede requerir de la ayuda de las

propiedades medicinales de las plantas, o de sus derivados. Las plantas

medicinales ofrecen una medicina sana y natural que está en dependencia de

sus características, y de los principios activos presentes en ellas; pudiendo

ejercer un efecto sinérgico, en las que es posible que todos interactúen al mismo

tiempo, y su función sea de complementar o potenciar a otros, y de esta forma

neutralice los posibles efectos negativos que pudieran presentar estos fármacos.

En base a esto, es la siguiente propuesta de investigación para establecer la

actividad antiinflamatoria mediante la combinación de manzanilla y ortiga, y

ayudará a disminuir, no solo el uso de otros fármacos, sino también, la presencia

de efectos secundarios, además cabe recalcar que la manzanilla presenta otros

beneficios, de ser protectora y reparadora de la membrana gástrica.

8

OBJETIVOS

Objetivo General

Evaluar el efecto antiinflamatorio de la mezcla hidroalcohólica de

Matricaria chamomilla y Urtica urens en animales de

experimentación.

Objetivos Específicos

Determinar las características físico y físicoquímicas de las especies

vegetales utilizadas en la elaboración del extracto.

Cuantificar la presencia de flavonoides (quercetina) y taninos en

extracto hidroalcohólico de Matricaria chamomilla y Urtica urens.

Establecer la concentración de la mezcla hidroalcóholica a partir del

cual se obtendrá el menor porcentaje de inflamación, determinado

por el volumen de agua desplazado en patas normales e inflamadas.

Comparar el porcentaje de inflamación que presentan los grupos

tratados con la mezcla hidroalcóholica de Matricaria chamomilla y

Urtica urens de mayor actividad antiinflamatoria vs al extracto

hidroalcohólico aislado tanto de Matricaria chamomilla y Urtica urens.

9

HIPÓTESIS

Con el suministro de la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla − 20 Ortiga), el

porcentaje de inflamación de la pata que presenten los animales de

experimentación será menor al ser comparados con los extractos aislados de

ortiga y manzanilla.

10

VARIABLES

Dependientes

Porcentaje de Inflamación (%).

Independientes

Tiempo (horas).

Niveles de concentraciones de la mezcla hidroalcohólica (mg/ml).

11

VARIABLES, CONCEPTUALIZACIÓN E INDICADORES

Tabla I

Conceptualización de las variables e indicadores

Variables Conceptualización Indicadores/

Escalas

Dependiente

Porcentaje de inflamación

Medido a partir del volumen desplazado

con la pata normal y con el edema

plantar inducido en el animal.

%

Independiente

Tiempo

Tomado en horas post administración de

los tratamientos y de la inducción.

Horas

Niveles de concentraciones

Mezcla hidroalcohólica de Matricaria

chamomilla y Urtica urens (80O:20M),

(50O:50M) y (20O:80M).

mg/ml

Nota. Conceptualización de las variables dependientes expresadas en porcentaje de

inflamación; y las variables independientes en tiempo y niveles de concentraciones

80O (80 ml de ortiga), 50O (50 ml de ortiga), 20M (20 ml de manzanilla) y 50M (50 ml

de manzanilla). Elaboración propia.

12

CAPÍTULO I

1.1 ANTECEDENTES

1.1.1 Estudios de la Actividad Antiinflamatoria de la Urtica

En 1988, Piñeros C., realizó un primer ensayo en Colombia donde evaluaron

la actividad antiinflamatoria que presentaron 78 pacientes a nivel de piel.

Aplicándose de forma local un extracto de Urtica, obteniéndose los siguientes

resultados: 53%, excelente; 40%, bueno y 7%, nulo. Otro estudio realizado en

1997 por Ramm S. & Chrubasik S., mediante la combinación de 50 g de

extractos de ortiga ligado a 50 mg de diclofenaco diarios, produciendo una

acción sinérgica, obteniéndose el mismo efecto anti-inflamatorio que si se tratase

con la administración de 200 mg diarios de diclofenaco. Al administrar extractos

de ortiga conjunto con el diclofenaco, permitió comprobar la menor cantidad de

efectos adversos percibidos en el caso con monodrogas AINEs (Alonso, 2007).

Además, Randall C. en 1999, realizó un estudio con 18 pacientes quienes

presentaban problemas de procesos reumáticos, como resultados se obtuvo que

con la toma de extracto de ortiga por vía oral, produjo un alivio sintomático en 17

de ellos, presentando buena tolerancia al producto, además se registró un caso

de reacción adversa (presencia de un rash cutáneo pasajero) (Alonso, 2007).

Según, estudios encontrados en la Biblioteca Digital de la Medicina

Tradicional Mexicana, comprobaron la actividad antiinflamatoria del aceite

esencial de manzanilla en ratas; empleando una dosis efectiva media de 35

mg/kg y extractos etanólicos al 30 y 80%, un primer ensayo por vía intravenosa y

un segundo ensayo por vía intraperitoneal induciendo un edema plantar en ratas

empleando carragenina, comprobándose su efecto antiinflamatorio debido a la

presencia de los azúlenos, camazuleno y guaiazuleno, quienes poseen esta

13

actividad, además de que ayudan a la regeneración del hígado (Zamudio &

Argueta, 2009).

A su vez realizaron estudios en humanos por vía oral en adultos, empleando

aceite esencial a quienes indujeron un eritema por irradiación y aplicando sobre

tejidos inflamados por diferentes orígenes, comprobando así la actividad

antinflamatoria en ambos casos (Zamudio & Argueta, 2009).

1.1.2 Estudios de la Actividad Antiinflamatoria de la Matricaria chamomilla

En 1984, Tubaro A., determinó que la presencia de mucílagos, flavonoides,

taninos y compuestos fenólicos captadores de radicales libres en los extractos

de Matricaria chamomilla aplicados por vía dérmica, favoreció la actividad

desinflamatoria (Alonso, 2007).

En 1986, Mann C. & Staba E., comprobaron que los esteroles presentes en la

Matricaria chamomilla, influyen en el proceso antiinflamatorio favoreciendo la

liberación de la hormona adrenocorticotropa (ACTH) a nivel suprarrenal (Alonso,

2007).

En 1988, Retamar J., comprobó que los flavonoides “apigenina” en animales,

tuvo un efecto antiinflamatorio superior al evidenciado por indometacina,

manteniéndose así luego de 18 horas de su administración. Esta actividad fue

diez veces superior a la observada con matricina, y veinte veces superior a la

demostrada por camazuleno. En el aceite esencial de Matricaria chamomilla se

encuentran presentes, los azúlenos no así en las infusiones. La familia de los

azúlenos tienen propiedades importantes como antiinflamatorios (Alonso, 2007).

En 1990, Della Loggia R., demostró que las aplicaciones tópicas de extractos

frescos de manzanilla en solución hidroalcohólica en orejas de ratones, con

inflamaciones inducidas con aceite de crotón presentaron un gran porcentaje de

14

inhibición inflamatoria. La dosis efectiva 50 (DE50) de la fracción lipofílica fue de

374 µg/oreja, y la de la fracción flavónica alcanzó 193 µg/oreja (Alonso, 2007).

En 1995, Ríos Cañavate J., estableció que la actividad antiinflamatoria de la

Matricaria chamomilla se debe a la interacción de flavonoides y los componentes

del aceite esencial (fracción sesquiterpénica conformada por el α-bisabolol y los

bisabolóxidos A y B), este estudio fue realizado en ratas mediante la prueba de

un edema inflamatorio plantar, producido bajo inducción por carragenina

(Alonso, 2007).

En 1999, Liang Y. et al., demostró el efecto inhibitorio de la activación

transcripcional del óxido nítrico sintasa inducible en lipopolisacáridos activados

por macrófagos (Alonso, 2007).

En el 2001, Shulz V. et al., demostraron el efecto sinérgico entre la apigenina

y la quercetina, sobre los mecanismos de acción en la actividad inhibitoria de las

enzimas 5-lipooxigenasa y ciclooxigenasa. Se demostró además, que la

apigenina in vitro posee un efecto inhibitorio de la activación transcripcional de la

enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2) (Alonso, 2007).

Un estudio realizado en la Facultad de Odontología de la Universidad de San

Carlos de Guatemala, confirma la hipótesis nula, sobre la medición del efecto

antiinflamatorio del gel de Matricaria recutita o Matricaria chamomilla en niños de

6 meses a 2 años con inflamación de la encía en la zona de erupción de la

dentición primaria, en la Casa Nº 1 de la Sociedad Protectora del Niño de la

Ciudad de Guatemala, durante el mes de septiembre del 2001. Al utilizar la

Matricaria recutita o Matricaria chamomilla en preparación de gel sobre la zona

inflamada, se presentó a las 96 horas del inicio de su uso un 46,67, ausencia de

inflamación, y un 53,33% de los casos con inflamación leve, lo cual evidencia

una notable disminución en el grado de inflamación (Herrera Gómez, 2002).

15

1.1.3 Estado del arte

Otros estudios en las que se evaluaron extractos hidroalcohólicos de plantas

comestibles: actividad antiinflamatoria (in vivo medido en la oreja del ratón con

inducción de aceite de crotón) y antioxidante (in vitro propiedades

antiradicales), todos los extractos estudiados demostraron poseer acción sobre

los efectos medidos, con un porcentaje de reducción del edema entre 21 y 27%,

siendo que Mentha aquatica L. (Lamiaceae), presentaba mayor efectividad

debido a la presencia de compuestos fenólicos y de flavonoides (Conforti et al.,

2008).

El Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la

Universidad de Costa Rica, realizó un estudio sobre el efecto de la manzanilla en

las ojeras y en la inflamación en la zona periocular. Se realizó un estudio en

paralelo (n=15), donde se aleatorizó los sujetos en proporción de 2:1, el grupo

interviniente (tratamiento tópico Matricaria chamomilla n=10), y el grupo control

tratados con agua. Las infusiones se obtuvieron a partir de 6 g de flores en 1 litro

de agua. El tratamiento consistía en aplicarse unos apósitos de gasa alrededor

del ojo por 7 noches en un tiempo de 15 minutos diarios (Jiménez Delgado,

Madrigal Rojas, & Salazar Barrantes, 2009).

Dentro de los resultados se obtuvo que, el 70% de los individuos del grupo

intervención consideraron efectivo el tratamiento en la disminución de la

tonalidad y volumen de las ojeras; el 80%, sintió mayor relajación en la región

periocular. En la que demostraron una disminución de la tonalidad de las ojeras.

Conclusiones: No se encontró diferencia estadísticamente significativa en la

disminución de las ojeras, sin embargo, se observa una tendencia a su

disminución (Jiménez Delgado, Madrigal Rojas, & Salazar Barrantes, 2009).

16

Se determinó que debido a la presencia del ácido clorogénico en extractos

hidroalcohólicos de la parte aérea de Urtica urens, se usó para medir la

actividad: térmica, analgésica y antiinflamatoria; bajo la aplicación de modelos

experimentales, además se demostró que poseía actividad antinociceptiva, cuyo

experimento consistió en la inducción química del dolor medido a partir del

retorcimiento en que el porcentaje de inhibición fue de 62,8%; asimismo, se

definió la actividad antiinflamatoria en ratas, induciendo un edema en la pata

trasera inducida por carragenina (inhibición de 41,5% a una dosis de 300 mg/kg

ip) (Marrassini, Acevedo, Miño, Ferraro, & Gorzalczany, 2010).

17

1.2 FUNDAMENTOS TEÓRICOS

1.2.1 Ortiga

El nombre científico es Urtica urens L. Se trata de una planta anual

perteneciente a la familia de las Urticáceas. La parte utilizada de la planta son

las hojas, o la parte desecada con los tallos, raíces (Botero, 2011).

1.2.1.1 Características macroscópicas y microscópicas

La forma del rizoma se presenta de forma torcida irregular, donde nacen las

raíces se encuentra un surco longitudinal con protuberancias. El rizoma se

presenta una forma fibrosa y de color blanco amarillento claro, y con una cavidad

medular pequeña. El tamaño de sus raíces son largas 2mm, de color amarillo

marrón. La raíz en forma de un corte transversal se muestra un color blanco

pálido casi puro. Presenta periciclo, y parte externa del floema secundario

(parenquimatoso con grupos de tejido criboso de pared delgada). El xilema es

denso y en su totalidad lignificado. La médula está formada por un parénquima

redondeado no lignificado que colapsa en su parte central para formar una

cavidad (Botero, 2011).

18

1.2.1.2 Composición química

Tabla II

Composición Química de la Urtica urens

Sumidad

Florida

Flavonoides 0,7 - 1,8% (heterósidos de quercetina,

isoramnetina y kenferol, rutina, isoquercitrina 0,02%; aceite

esencial: cetonas 38,5%; ésteres 14,7%, alcoholes libres 2%;

ácidos fenólicos derivados del ácido cinámico; ácido

clorogénico: clorofila a y b, ácido caféico; taninos; ácidos

orgánicos: ácido acético, cítrico, fórmico, fumárico; sales

minerales: hierro, azufre, manganeso, sales potásicas y

cálcicas, nitratos; carotenos, esteroides; vitamina A, B2, C, K,

ácido fólico y pantoténico.

Tricomas

(Pelos

urticantes)

Histamina 0,2 - 1%, acetilcolina no mayor al 1%, histamina

serotonina.

Raíz

Taninos, fenilpropanoides, fitoesteroles ceramidas, heterósidos

esteroidales, lignanos, polifenoles, escopoletina, léctina,

monoterpendioles.

Semillas

(aceite)

Mucílagos, proteínas, ácido linoleico, glicerol, tocoferoles, ácido

oleico, ácido linolenico y ácidos saturados.

Hojas

Clorofila a y b (2,5-3%), carotenoides (beta-caroteno);

Flavonoides: quercetina (0,7-1,8%) rutina, isoquercitrina

(0,02%), quercetina, isoramnetina, kaempferol y ramnetol,

sales minerales (20%), ácidos orgánicos como el: caféico,

clorogénico, gálico, fórmico, acético, provitamina (A, B, C y K),

mucílagos, escopoletósido, sitosterol, betaína, colina,

polisacáridos, esteres del ácido caféico, taninos.

Fuente: Huerta, J. (2007). Ortiga Mayor Urtica dioica L. Medicina Naturista, 1, 131.

19

1.2.1.3 Mecanismo de acción

Inhibe la producción de prostaglandinas o COX y a la vez disminuye la LOX o

la producción de leucotrienos.

1.2.1.4 Contraindicaciones

Genera una fuerte irritación al entrar en contacto con la piel frente a la acción

urticante y pruriginosa. Puede llegar a ocasionar ronchas, pápulas, eritemas o

edemas que van siempre precedidas de fiebre (Nogué, Simón, & Blanché, 2009).

A la vez el uso de Urtica urens es contraindicado frente a la actividad diurética en

manifestaciones como hipertensión, cardiopatías o insuficiencia renal moderada

o grave, también es contraindicada en caso de diabetes (Dueñas, s. f.).

1.2.2 Manzanilla

Cuyo nombre científico es Matricaria chamomilla, Matricaria recutita, es una

planta herbácea que pertenece a la familia de las Compuestas. La parte utilizada

de la planta son las flores, con sabor ligeramente amargo y olor aromático

característico. La mayor concentración de aceites esenciales en la manzanilla se

encuentra en la noche o en las primeras horas del amanecer (Alonso, 2007).

20

1.2.2.1 Características macroscópicas y microscópicas

Tallo cilíndrico, erguido, ramoso, mide aproximadamente 30 cm de alto, las

hojas están divididas en pequeños segmentos lineales muy finos. Se compone

de cabezuelas de forma semiesférica de un diámetro aproximadamente 6 mm,

de color amarillo-dorado. Poseen de 10 a 20 pistilos, su corola es ligulada y de

color blanco. La parte externa de la epidermis se compone de células papilares

con cutícula estirada desde los extremos. La epidermis del ovario está

compuesta de células alongadas con paredes sinuosas, en las que se hallan

tricomas secretores, presentan numerosas agrupaciones de oxalato de calcio

(Cosco, 2010).

1.2.2.2 Composición química

Aceite esencial se lo obtiene a partir de las cabezuela de la planta entre el 0,3

- 1,5%. De acuerdo a la Farmacopea Argentina (2003), no debe de contener más

del 10% de otras partes de la planta, ni más de 2% de materia orgánica extraña.

La Farmacopea Británica (2012) exige un contenido de aceite esencial entre

0,25-0,70%. La Farmacopea Brasilera al igual que la Española, Alemana y

Europea (2007), exige un tenor de aceite esencial no menor del 0,4% (Jiménez

Delgado, Madrigal Rojas, & Salazar Barrantes, 2009).

21

Tabla III

Componentes del aceite esencial de manzanilla (Matricaria chamomilla)

Azúlenos 26-

46%,

Principalmente camazuleno entre el 6-15% y en menor

medida guajazuleno.

Sesquiterpenos

α-bisabolol entre el 10-25% y derivados (bisaboloxidos

A, B, C; bisabonlonóxido A). Además se encuentra

trazas de antecotúlido.

Lactonas

sesquiterpénicas

Matricina, matricarina y desacetilmatricarina. La

matricina sería también precursora del camazuleno.

Fuente: Cosco, D. (2010). Actividad inhibitoria del crecimiento de Streptococcus

mutans y de flora mixta salival por acción de aceite esencial de la Matricaria

chamomilla. Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.

.

Figura I. Estructura química del α-bisabolol

Fuente: Gibers, T., & Jimenez, P. (s. f.).

Cabe recalcar, que tanto el camazuleno y el bisabolol son los principales

componentes del aceite esencial a los cuales se les atribuye la actividad como

antiinflamatorio (Cosco, 2010).

22

Flavonoides entre el 1-3%, forman junto a los mucilagos el grupo hidrofílico

de la droga. Entre los flavonoides encontramos: flavonas y flavonoles

metoxilados, apigenina, quercetina. Entre otros como: luteolina, petuletina,

lisorhamnetol, apiína, rutina, presencia de cumarinas: diocicumarina,

umbreliferona, hemiarina; ácidos como: acido valeriánico, taninos, ácidos

fenólicos, ácido ascórbico, ácidos grasos, mucilagos urónicos en un 19% (Cosco,

2010).

Figura II. Estructura molecular de los flavonoides

Fuente: Instituto Quimico Biológico. (2014).

1.2.2.3 Mecanismo de acción

Los ácidos grasos esenciales tienen adquieren la propiedad antiinflamatoria,

ya que la ingestión de Matricaria chamomilla infiere en la disminución de la

inflamación por medio de dos formas. La primera que se encarga de inhibir la

producción de prostaglandinas (COX), y la producción de leucotrienos (LOX). La

segunda forma se encarga de inhibir la producción de prostaglandinas E1 que

realizan su efecto sobre las células pro-inflamatorias. A la vez posee actividad

antioxidante y antimicrobiana (Cosco, 2010).

23

1.2.2.4 Contraindicaciones

En la ingesta por dosis elevadas ocasiona irritación de la mucosa digestiva

acompañada de mareos y vómitos. A nivel dérmico produce dermatitis en

pacientes hipersensibles o alérgicas. Está contraindicado el alcohol, ya que

posee efecto ansiolítico, a la vez interactúa con fármacos que tienen efecto

sedante y está contraindicado en pacientes que ingieran warfarina que es un

anticoagulante cumarinico (Cosco, 2010).

1.2.3 Flavonoides

Se conoce como flavonoide a los compuestos fenólicos que se encargan de

proteger al organismo, en sí son pigmentos naturales hallados en el reino

vegetal; tales como las semillas, frutas e incluso en bebidas como el vino. Se

conocen más de 5.000 clases de diferentes flavonoides, se debe estimar que 23

mg/día en la ingesta humana, predominando así la quercetina con un valor

medio de 16 mg/día; posee acción antioxidante y elimina radicales libres, ya que

actúan como protectores frente a enfermedades cardiovasculares, cáncer y

diversas patologías (Martínez, González, & Culebras J. M. y Tuñón, 2002).

Szent-György, (1930) descubrió a los flavonoides aislando la citrina de la

cascara de limón encargada de regular la permeabilidad de los capilares, por lo

tanto, se la consideró como vitamina P o vitamina C2, en el año 1950 se

descarta esta denominación, al determinar que los flavonoides contienen un

número indefinido de grupos hidroxilo fenólicos en su estructura química, con

propiedades de quelación del hierro y entre otros metales de transición que le

confieren la propiedad antioxidante (Martínez, González, & Culebras J. M. y

Tuñón, 2002).

24

1.2.4 Taninos

Pertenecen al grupo de los compuestos polifenólicos de gusto amargo y muy

astringentes; se clasifican en taninos hidrolizables o hidrosolubles, también

denominados como pirogálicos, son hallados en pétalos de la rosa roja

presentando 15% de taninos gálicos usadas como colutorios y lociones; en las

hojas y cortezas destinadas tanto para vía interna como externa; también se

presentan en la sumidad florida con un 10% de taninos elágicos empleadas en

efectos antidiarreicos (Botero, 2011).

También se clasifican en taninos condensados llamados proantocianidinas,

ya que trascienden de polímeros del flavonoide antocianidina; prioritariamente se

los halla en maderas de plantas leñosas, poseen una estructura similar a los

flavonoides pero carecen de osas en las moléculas. Entre ellos predominan los

taninos catéquicos que poseen de 2 o más moléculas de 3-flavonoles y los

leucoantocianos o procianidoles del mismo modo estructurados por 2 o más

moléculas de 3,4-flavandioles (Cabrera, Morón, Victoria, & Acosta, 2012).

Figura III. Clasificación de los taninos.

Fuente: Khanbabbaee y Van Ree, 2001)

25

1.2.5 Mecanismo de acción de los flavonoides y taninos

Se conoce la relación entre especies reactivas entre el oxígeno y el nitrógeno

que inducen a procesos oxidativos, entre ellas se encuentran las enfermedades

inflamatorias; por consiguiente existen especies vegetales que al presentar entre

sus compuestos: flavonoides, polifenoles y tocoferol adquieren la propiedad

antioxidante influyendo en el efecto antiinflamatorio (García, Rojo, García, &

Hernández, 2002).

El mecanismo de acción de los compuestos fenólicos tales como: taninos y

flavonoides; se basa en disminuir la formación de mediadores proinflamatorios

tales como leucotrienos, prostaglandinas, y óxido nítrico. Además el efecto

anticanceroso va ligado a la acción antiinflamatoria; demostrado por Narizawa (s.

f.), donde empleó la Indometacina, siendo esta capaz de inhibir la acción

anticancerosa inducida en el colon de las ratas (González, Larionova, Martínez &

Marrero, 2003).

26

1.2.6 Carragenina

La carragenina es un polisacárido de peso molecular alto, el cual se sitúa en

la pared de las células y en la matriz intercelular del tejido de algas rojas de la

familia Rhodophycae, de los géneros

Chrondus, Gigartina, Euchema, Hypnea e Iridaea. Polvo o granulado, insípido e

inodoro, de color blanco a beige. Esta estructuralmente comprendida de éster

sulfato de 15% a 40% formado por unidades alternadas de D-galactosa y 3,6-

anhidro-galactosa (3,6-AG) unidas por ligaduras α-1,3 y β-1,4-glucosídica

(Yueqin, 2007).

Figura IV. Estructura química de la carragenina.

Fuente: Sánchez-Barreiro, et al. (2012)

1.2.6.1 Mecanismo de acción de la carragenina

Al administrar carragenina a nivel plantar, se provocará un edema en la pata

del ratón; dicho mucopolisacárido de origen marino produce un efecto bifásico,

en el cual intervienen mediadores para generar una respuesta inflamatoria. Se

genera está reacción en su fase inicial de cero a la primera hora, a partir de la

liberación de bradicina, histamina y serotonina. Posteriormente, en la segunda

fase se origina desde la primera a la sexta hora; que se relaciona con la

producción de PGs y la inducción de la COX-2. En la fase tardía es cuando se

llega al nivel máximo y estable entre la primero a la tercera hora (Yueqin, 2007).

27

1.2.7 Inflamación

La inflamación se basa en un proceso tisular, frente a una lesión que

responden a estímulos ocasionados por una serie de fenómenos moleculares,

celulares y vasculares de finalidad defensiva frente a agresiones físicas,

químicas, infecciosas y traumáticas (Bordés González, Martínez Beltrán, García

Olivares, & Guisado Barrilao, s. f.). La reacción de la inflamación se altera

dependiendo del agente causal y por la capacidad que posee de respuesta el

huésped (EUSALUD, 2015).

Figura V. Aspectos básicos en un proceso inflamatorio.

Fuente: Bordés González (s. f).

Se fundamenta la inflamación a partir de los signos de celso; tales como

calor, rubor, tumor, y dolor; que proceden de alteraciones vasculares indicando

una acumulación sanguínea en el sitio afectado (Martínez, s. f.). El tumor se

produce por el edema y acúmulo de células inmunes, el dolor es producido por la

actuación de determinados mediadores sobre terminaciones nerviosas del dolor

(García-Barreno, 2008).

Focalización dela respuesta,que tiende acircunscribir lazona de luchacontra elagente agresor.

La respuestainflamatoria esinmediata, deurgencia.

Focoinflamatorioatrae a lascélulasinmunes de lostejidoscercanos.

Lasalteracionesvasculares vana permitir, lallegada demoléculasinmunes desdela sangre.

28

Una lesión cuando se genera es precedida por una inflamación que puede

ser aguda o crónica; una inflamación se presenta a través de un daño tisular,

provocada por procesos físicos, químicos, infecciosos, radiaciones

electromagnéticas y traumáticas. En tanto que, en una mínima lesión no ocurre

daño tisular iniciándose la regeneración de células. Cuando ocurre una lesión

mayor se iniciará con la restauración de los tejidos afectados, y se genera una

inflamación crónica con formación de absceso (Gómez-Barrera, 2010).

1.2.7.1 Factores Desencadenantes

Al generarse una inflamación, participan moléculas con efectos

proinflamatorios con actividad anafiláctica, que permiten la fagocitosis o ayudan

a la adhesión celular de los polimorfos nucleares y macrófagos de las células

endoteliales, existiendo factores que atrapan y atraen a los leucocitos hacia el

foco inflamatorio y favorece la vasodilatación. Los factores que originan una

respuesta inflamatoria se clasifican de acuerdo a su origen interno: propia o

autogénicos u origen externo o xenógenicos y alérgenos (Gómez-Barrera, 2010).

Figura VI. Fases de la inflamación

Fuente: Bordés González, Martínez Beltrán, García Olivares, & Guisado Barrilao (s. f.).

FASES DE LA INFLAMACIÓN

Liberación de mediadores

Moléculas de estructura elemental, liberadas o

sintetizadas por el mastocito

bajo la actuación de determinados

estímulos.

Efecto de los mediadores

Liberadas,producen alteraciones vasculares, que

favorecen la llegada de

moléculas y células inmunes

al foco inflamatorio.

Llegada de moléculas y

células inmunes al foco

inflamatorio

Proceden en su mayor parte de la sangre, pero también de las

zonas circundantes al

foco.

Regulación del proceso

inflamatorio

El fenómeno inflamatorio,

además integra una serié de mecanismos inhibidores tendentes a finalizar o

equilibrar el proceso.

Reparación

Fenómenos que van a

determinar la reparación total o parcial de los tejidos dañados

por el agente agresor o por la

propia respuesta

inflamatoria.

29

1.2.7.2 Respuesta Inmune

Cuando ocurre una lesión, se inicia la respuesta del sistema vascular que

está dada por los tejidos, la respuesta inmunitaria es realizada linfocitos y células

presentadoras de antígenos, interviniendo también, otro tipo de células como

proteínas extracelulares. En casos de edema o inflamación los signos están

dados en los vasos sanguíneos de tejidos circundantes, pues se dilatan las

arteriolas aumentando el riesgo vascular, las vénulas postcapilares son

permeables, lo que produce el escape de líquido vascular hacia los tejidos

afectados (Villalba, 2014).

Ciertos tipos de células nucleadas migran al sitio de afectación, se genera

moco u otras secreciones. Los fibroblastos y células endoteliales proliferan

produciendo cicatrices; por otro lado las respuestas inmunitarias se caracterizan

por la formación de coágulos locales e incluso fiebre por afectaciones sistémicas

(Villalba, 2014).

Existen vías inflamatorias que son controlada por citocinas y mediadores

inflamatorios que son moléculas reguladoras solubles, estimulan la producción

de otros mediadores que se encargados de controlar otro tipo de afectaciones. A

su vez se originan efectos secundarios por complejos antígeno vs anticuerpo.

Las células efectoras de la inflamación incluyen a otras células que intervienen

en las respuestas inmunes, tales como: macrófagos, neutrófilos, linfocitos T

citotóxicos, y células NK (Bordés González, Martínez Beltrán, García Olivares, &

Guisado Barrilao, s. f.).

30

1.2.7.3 Mecanismos de acción que intervienen en la inflamación

Según, Grabowski (2002), entre las sustancias que contribuyen a la

vasodilatación, el aumento de la permeabilidad, y otros aspectos de la respuesta

inflamatoria, se cuentan los siguientes:

Histaminas: en respuesta a una lesión, las células cebadas o mastocitos del

tejido conectivo y los basófilos y plaquetas sanguíneas liberan histaminas.

Los neutrófilos y macrófagos atraídos al sitio de la lesión, también estimulan

su liberación, lo cual produce una vasodilatación y mayor permeabilidad de

los vasos sanguíneos.

Cininas: estos polipéptidos, formados en la sangre a partir de precursores

inactivos llamados cininógenos, inducen la vasodilatación y aumento de la

permeabilidad, además de servir como agentes quimiotácticos que atraen a

fagocitos.

Prostaglandinas PG: estos lípidos, en especial las prostaglandinas E, son

sustancias que liberan las células dañadas e intensifican los efectos de las

histaminas y las cininas, las PG inducen la emigración de fagocitos a través

de la pared de los capilares.

Leucotrienos LT: producidos en los basófilos y las células cebadas por

desdoblamiento de fosfolípidos de la membrana plasmática, los LT

incrementan la permeabilidad vascular, además de participar en la adhesión

de los fagocitos y como agentes quimiotácticos de los fagocitos mismos.

Sistema del complemento: Los diversos componentes de este sistema

estimulan la liberación de histamina, atraen a neutrófilos por quimiotaxia y

promueven la fagocitosis, además de que algunos pueden destruir bacterias.

31

1.2.8 AINEs (antiinflamatorios No Esteroides)

Los AINEs, tienen actividades analgésicas, antiinflamatorias y antipiréticas

dependiendo de la dosificación. Así, en dosis únicas, presentan actividad

analgésica similar a la del paracetamol. A dosis completa regular, poseen efecto

analgésico y antiinflamatorio duradero, por lo que se prescriben en dolor

continuo y regular secundario a inflamación. En cuanto al porcentaje de actividad

antiinflamatoria entre los diferentes AINE son mínimas, existiendo grandes

variaciones en cuanto a respuestas que presentan cada paciente, la incidencia

y tipo de efectos adversos (Batlouni, 2010).

Los AINEs, deben ser utilizados con precaución en personas de edad

avanzada, trastornos alérgicos, durante la gestación y la lactancia. En pacientes

con alteración renal, cardíaca o hepática, se recomienda administrar la menor

dosis posible y vigilar la función renal, no se deben administrar en pacientes con

úlcera péptica activa. Los efectos adversos más frecuentes son generalmente

gastrointestinales, como: náusea, vómitos, diarrea y dispepsia; se han descrito

reacciones de hipersensibilidad, como anafilaxia, broncoespasmo y erupción

cutánea; así como retención de líquidos (OMS, 2004).

1.2.8.1 Fármacos antiinflamatorios (AINEs)

Es un conjunto heterogéneo de fármacos, a diferencia de otros fármacos con

el mismo efecto terapéutico, estos en cambio tienen mayor propiedad antipirética

que inflamatoria. En el año 1952 se definió el término AINEs o Antiinflamatorio

no esteroideo, son componentes químicos similares a los corticoides, pero se

diferencia al evitar consecuencias secundarias. Estos llamados glucocorticoides

con efecto antiinflamatorio, en sí bloquean las síntesis de las prostaglandinas

(Batlouni, 2010).

32

Según, la OMS (2004), de acuerdo a su composición química estos se

clasifican por grupos:

Ácidos:

Ácidos enólicos: Son derivados oxicams o amidas benzotiazínicas (como el

piroxicam). A su vez se encuentran las Pirazolonas, como la fenilbutazona.

Ácidos carboxílicos: Como los salicilatos, ácidos propiónicos, ácidos

acéticos, ácidos antranílicos o fenamatos y ácidos nicotínicos.

No Ácidos:

Sulfoanilidas

Alcanonas

En la actualidad desde que se conoce de los Coxibs o inhibidores selectivos

de la COX-2, por lo tanto se los agrupa por su capacidad de inhibir el 50% de la

COX-2, y comparar con la concentración necesaria para inhibir el 50% de la

COX-1. Por lo tanto, mientras mayor sea la relación IC50 COX-2/IC50 COX-1,

mayor es la selectividad COX-2 (OMS, 2004).

33

Tabla IV

Clasificación de los AINEs, según su capacidad para inhibir la COX

Muy

Selectivos a

la COX-1

Relativamente

Selectivos a

la COX-1

Igualmente

Selectivos

Relativamente

Selectivos a

la COX-2

Muy

selectivos a la

COX-2

Flurbiprofen

Ketoprofen

Fenoprofen

Piroxicam

Sulindac

Aspirina

Ibuprofeno

Indometacina

Naproxeno

Tenoxicam

Tolmetín

Etodolac

Meloxicam

Nabumetona

Nimesulide

Lumiracoxib

Rofecoxib

Valdecoxib

Parecoxib

Celecoxib

Nota: COX= Inhibidor de prostaglandinas. Fuente: Prieto Setién, J. (2007).

Antiinflamatorios No Esteroideos (AINEs).

Existen pacientes intolerantes de AINEs, pero por esta razón se realiza esta

clasificación y a la vez relación, ya que se ha comprobado que a mayor

selectividad a la COX-2, estos son tolerados e incluso evitan menos efectos

adversos a nivel gastrointestinal.

1.2.8.2 Mecanismo de acción de los AINEs

La clase terapéutica considerablemente utilizada son los analgésicos,

antipiréticos y los antiinflamatorios no esteroideos, de acuerdo a su propiedad

analgésica, antipirética y antiinflamatoria que interfieren con una variedad de

enzimas y sistemas celulares (Rodríguez, s. f.).

34

Se conoce que en la década de los 70, inició la etapa sobre el mecanismo de

acción de los AINEs. Se descubrió principalmente el rol de las prostaglandinas

(PGs) en cuanto a la fiebre, dolor, concentración uterina, circulación sanguínea,

secreción y protección gástrica (Prieto Setién, 2007).

Más tarde descubrió, Vane y col y Beaver que los AINEs, incluyendo a los

salicilatos, se encargan de inhibir la enzima ciclooxigenasa que directamente

interviene en la vía metabólica del ácido araquidónico. Por otro lado, Brunne

demuestra que el ASS inhibe de manera definitiva a la ciclooxigenasa por su

cualidad de acetilar proteínas (OMS, 2004).

En sí, la actividad de los AINEs es inhibir a la ciclooxigenasa, enzima que

permite al organismo producir sustancias (prostaglandinas), capaces de

transformar al ácido araquidónico en endoperóxidos cíclicos, convirtiéndose así

en PGs y en TX, por ende la inhibición de su síntesis por parte de los AINEs es

el responsable, tanto de su actividad terapéutica como de los efectos

secundarios de estos fármacos (Batlouni, 2010).

Isoenzimas de la ciclooxigenasa: La ciclooxigenasa se la haya como dos

isoformas COX-1, COX-2, y actualmente fue descubierta la COX-3. Nos

referiremos a la COX-1, responsable de la síntesis de prostaglandinas, por

ejemplo se le atribuye a la reducción de secreción gástrica al estimular la

secreción de bicarbonato y moco, así asegura protección de la mucosa gástrica.

Actúa a nivel renal y en los túbulos colectores al mantener la homeostasis renal

en situaciones de depleción de volumen, o de disminución de la presión de

perfusión renal (Batlouni, 2010).

35

Al hablar de la COX-2, era referirse a inflamación y, por tal razón se la llamó

COX-2 inducida. La PGE2, generaba la fiebre endógena y está vinculada con el

estímulo de la COX-2 a través de los lipopolisacáridos e interleucina-1 en las

células endoteliales de los vasos cerebrales. Se establece diferencias de ambas

enzimas de acuerdo a su expresión temporal, la COX-1 es constitutiva; mientras

que la COX-2 se expresa a través de estímulos, pero es constitutiva en el riñón y

SNC (Batlouni, 2010)

Por otro lado, la COX-3 es descubierta en el perro, pero se localiza en el

cerebro humano, también en el corazón, aunque su función aun es desconocida

(Batlouni, 2010).

Figura VII. Isoformas de la ciclo-oxigenasa

Fuente: Batlouni, 2010.

Ácido Araquidónico

COX-1

(Constitutiva)

Prostaglandinas Fisiológicas

(Citoprotección)

Tromboxanos

AINEs

COX-2

(inducible)

Prostaglandinas Patológicas

(Proinflamatorias)

Prostaciclinas (Vasodilatadoras)

36

1.2.8.3 Indicaciones terapéuticas

Todos los AINEs incluyendo a los inhibidores selectivos de la COX-2 como

los antipiréticos, analgésicos y antiinflamatorios. Estos modifican o reducen la

inflamación, ayudan a mejorar el dolor y disminuye la fiebre. La primordial

indicación de los AINEs se refiere al alivio de enfermedades inflamatorias

osteoarticulares, se utilizan en tratamientos sintomáticos como: artritis

reumatoide, la osteoartritis, entre otras (Batlouni, 2010).

1.2.8.4 Reacciones adversas medicamentosas

Los antiinflamatorios no esteroides (AINEs) constituye una clase heterogénea

de fármacos que más se prescriben, los cuales pueden ser selectivos o no; así

como: la aspirina y otros agentes inhibidores de la COX. Los AINEs no selectivos

son llamados también tradicionales y/o convencionales, y se designan COXIBEs

(Batlouni, 2010).

Los inhibidores selectivos de la COX-2 (inhiben la ciclooxigenasa 2 y así la

síntesis de prostaciclina), en cuanto a su seguridad de su uso, se encontraron

evidencias sobre el aumento del riesgo cardiovascular, pero aún son escasos,

por la falta de ensayos clínicos. Además se realizaron estudios clínicos

prospectivos, demostrando así que los inhibidores selectivos de la COX-2

producen efectos adversos como: aumento de riesgo de infarto del miocardio,

accidente cerebrovascular, insuficiencia cardiaca, insuficiencia renal e incluso

hipertensión arterial; se presenta con mayor frecuencia en pacientes con

enfermedad cardiovascular, en los que el uso de estos inhibidores de la COX-2

deben ser establecido en meticulosas dosis y en un lapso de tiempo mínimo,

pues se relaciona a la inhibición selectiva de la COX-2 frente a efectos adversos

frecuentes. Por lo tanto no se descarta el riesgo de eventos cardiovasculares

ante la ausencia de la selectividad para esta isoenzima (Batlouni, 2010).

37

1.2.8.5 Efectos indeseables

Generan efectos indeseables a nivel gastrointestinal, cardiovascular, renal,

hepático, y en general en todo el organismo dependiendo de la susceptibilidad

de cada persona (Batlouni, 2010).

1.2.8.5.1 Efectos Gastrointestinales

Los AINEs generan como efecto secundario más frecuentes a los

gastrointestinales siendo parte de la morbilidad y de mortalidad relativa.

Provocando úlcera gástrica, dispepsia, micro sangrado gástrico, hemorragia

gastrointestinal alta y lesiones sobre el intestino delgado distal. Esto ocurre, ya

que los AINEs inhiben la COX-1, aunque los que inhiben la cox-2 presenta una

mayor seguridad sobre este efecto adverso, pero no demuestran en su totalidad

diferencias significativas en la incidencia de úlceras complicadas, así como de

hemorragias gastrointestinales (Batlouni, 2010).

Entre los efectos colaterales por el consumo de AINEs es que, alrededor de

20% de pacientes que lo consumen no toleran el tratamiento, presentan dolor

abdominal, acidez y diarrea (Batlouni, 2010).

Al emplear un tratamiento a largo plazo ocasiona erosiones, úlceras gástricas

y duodenales. En su mayoría no presentan síntomas, pero sin embargo, pueden

desarrollarse complicaciones severas, tales como sangrado y perforación del

estómago. Anualmente el riesgo es del 1 al 4% en tratamientos crónicos

(Batlouni, 2010).

38

Generalmente, los más susceptibles a presentar estos síntomas son

pacientes adultos mayores, mujeres que como consecuencia de los desórdenes

hormonales en etapas post menopáusicas presentan procesos de artritis

reumatoides, osteoporosis. Otros pacientes que presentan marcada

susceptibilidad al consumo de AINEs, pueden ser los que presenten historia

clínica de sangrado gastroduodenal, el uso de agentes antitrombóticos o

corticosteroides, y presencia de enfermedad sistémica severa (Batlouni, 2010).

Mecanismo que resulta por el bloqueo de la COX-1 y por la inhibición de la

producción de prostaciclina, PGE2 y PGD2 en la mucosa gastrointestinal. La

función de las prostaglandinas es citoprotectora ayudando a inhibir la secreción

ácida del estómago, y así, de esta manera aumentando el flujo sanguíneo local y

la secreción de moco. En casos, que el pacientes requiera de la administración

diaria de AINEs es recomendable usar inhibidores de la bomba de protones

entre ellos el omeprazol (Batlouni, 2010).

1.2.8.5.2 Efectos cardiovasculares

Los inhibidores selectivos de la COX-2, designados COXIBEs, se introdujeron

en la terapéutica clínica, con el fin de minimizar la toxicidad gastrointestinal de

los AINEs no selectivos15. Los COXIBEs son iguales o más efectivos que los

AINEs no selectivos para el tratamiento de la inflamación, como las plaquetas

expresan primariamente la COX-1, estos fármacos no tienen propiedades

antitrombóticas (Batlouni, 2010).

De los experimentos en animales, seguimiento de la observación de registros

y ensayos clínicos, se pudo establecer las consecuencias de la inhibición

selectiva de la trombosis, por la desviación del balance

protrombótico/antitrombótico en la superficie endotelial, por la pérdida del efecto

protector de la regulación superior de la COX-2 en la isquemia miocárdica y en el

infarto del miocardio (Batlouni, 2010).

39

1.2.8.5.3 Efectos renales

Prostaglandinas homeostáticas - prostaciclina, PGE2 y PGD2, generadas por

acción de la COX-1 en distintas regiones de los riñones, dilatan la vasculatura,

disminuyen la resistencia vascular renal y aumentan la perfusión del órgano. Lo

que conlleva a la redistribución del flujo sanguíneo de la corteza renal para los

nefronas en la región intramedular (Batlouni, 2010).

1.2.8.5.4 Hipertensión arterial

Batlouni (2010), cita a Pope et al. (1993), quienes demostraron que los AINEs

pueden elevar la presión arterial. En aquellos pacientes con presión arterial alta

con la administración de indometacina y naproxeno, la presión arterial se elevó

en un promedio en 3,59 mmHg y 3,74 mmHg, respectivamente. En tanto que,

con el piroxicam el aumento no fue significativo. Este aumento se asocia a la

disminución significativa de las concentraciones de prostaglandinas y renina

(Batlouni, 2010).

Según los datos obtenidos por Johnson et al. (1994), demostraron que los

AINEs aumentan la presión arterial aproximadamente hasta 5,0 mmHg, El

piroxicam aumentó en un 6,2 mmHg, La aspirina presentó un menor incremento

de la presión arterial, en tanto que la indometacina e ibuprofeno mostraron

efectos intermediarios (Batlouni, 2010).

40

1.3 GLOSARIO

Aceite de crotón: Se utiliza farmacológicamente para provocar una inflamación

localizada en las orejas de los animales de laboratorio, inflamación que responde

a los anti-inflamatorios no esteroídicos.

Ácido clorogénico: Es un compuestos fenólicos que se clasifica dentro de los

fenólicos simples o no flavonoides.

Actividad antiflogística: Se encarga de combatir la inflamación.

AINEs: Denominado como antiinflamatorios no esteroideos son un grupo variado

y químicamente heterogéneo de fármacos principalmente antiinflamatorios,

analgésicos y antipiréticos, por lo que reducen los síntomas de la inflamación, el

dolor y la fiebre.

Anafilaxia: Es una reacción alérgica grave en todo el cuerpo originado por un

químico que se ha convertido en alérgeno.

Antinociceptiva: Es un proceso que se despliega por su capacidad de

detección de daño necrótico consumado, inminente o potencial, tan pronto como

se den las condiciones codificadas como inductoras de dicho daño.

Apigenína: Es una molécula que pertenece a la clase flavona, como la

anglicona de varios glucósidos de origen natural.

Apósitos: Es la reepitelización del tejido dañado y en consecuencia la

cicatrización de la herida.

41

Azúlenos: Compuesto orgánico y un isómero del naftaleno, pero mientras este

es incoloro, el compuesto de título es azul profundo.

Bradicinina: Es un polipéptido compuesto por nueve aminoácidos que se forma

en las plaquetas y que se libera por acción de ciertos venenos o de la tripsina;

tienen efectos similares correspondientes a las quininas.

Camazuleno: Compuesto químico aromático con la fórmula molecular C₁₄H₁₆

que se encuentra en una variedad de plantas, incluyendo en la manzanilla.

Carragenina: Es una mezcla de varios polisacáridos, se encuentra rellenando

los huecos en la estructura de celulosa de las paredes celulares de

algunas algas de varias familias de Rhodophycae.

Ciclooxigenasa (COX): Es una enzima responsable de la formación de

mediadores biológicos importantes llamados prostanoides, que incluye la

prostaglandina, la prostaciclina, y los tromboxanos, a partir del ácido

araquidónico. La inhibición farmacológica de la ciclooxigenasa alivia los síntomas

de la inflamación.

Cininas: Son proteínas en la sangre que causan inflamación, afectan a la

presión arterial, facilitan el paso de líquidos a través de pequeños vasos

sanguíneos y estimulan os receptores del dolor.

Citocinas: Son proteínas encargadas de regular la función de las células que las

producen sobre otros tipos celulares.

42

Eicosanoides: Corresponde al grupo de moléculas de

carácter lipídico originadas de la oxigenación de los ácidos grasos esenciales de

20 carbonos tipo omega-3 y omega-6, compuesto de prostaglandinas (PG),

tromboxanos (TX), leucotrienos (LT) y lipoxinas (LX). El PG y TX colectivamente

identificados como los prostanoides.

Fibrosis de tejidos: Genera endurecimiento de los tejidos a partir de la

formación de nuevos tejidos conectivos endurecimiento de tejido debido a la

formación de nuevo tejido conectivo

Guaiazuleno: También es conocido como azulón o 1,4-dimethyl-7-

isopropylazulene, es un hidrocarburo sólido cristalino de color azul oscuro.

Histamina: Amina idazólica involucrada en las respuestas locales del sistema

inmune.

Isoenzima: Son enzimas que difieren en la secuencia de aminoácidos, pero que

catalizan la misma reacción química.

Leucotrienos: Son ácidos grasos derivados del metabolismo oxidativo del ácido

araquidónico por la vía de la 5-lipooxigenasa

Lipooxigenasas: Es una enzima humana, miembro de la familia de

lipooxigenasas con un peso molecular entre 72,000-80,000 y 672 o 673

aminoácidos.

Osteomielitis: Inflamación simultánea de la médula ósea y del hueso.

43

Osteoporosis: Enfermedad ósea que se caracteriza por una disminución de la

densidad del tejido óseo y tiene como consecuencia una fragilidad exagerada de

los huesos.

Prostaglandinas (PGs): Es un conjunto de sustancias de carácter lipídico

derivadas de los ácidos grasos de 20 carbonos, que contienen un anillo

ciclopentano y constituyen una familia de mediadores celulares.

Quercetina: Es un flavonol que se encuentra presente generalmente como O -

glicósidos y raramente como C - glicósidos en altas concentraciones tanto en

frutas como en verduras en especial en la cebolla.

Quimiotácticos: Son un conjunto de factores que tienen la capacidad de atraer

los eosinófilos al foco inflamatorio, los cuales liberan mediadores en las

reacciones de hipersensibilidad inmediata y en la respuesta a parásitos.

Quimiotaxis: Reacción de orientación de los organismos celulares libres como

respuesta a un estímulo químico

Randomizados: Consiste en asignar aleatoriamente a los participantes en un

ensayo a dos o más grupos de tratamiento o de control. Es una de las formas de

evitar los sesgos de selección; su propósito es posibilitar las comparaciones en

los grupos de asignación de los tratamientos.

Reacciones Adversas Medicamentosas (RAM): Reacción tóxica o no

intencionada de una medicación utilizada a dosis adecuada estándar con fines

profilácticos, diagnósticos o terapéuticos.

44

Tendinitis: Es el resultado de una lesión o sobrecarga. También puede ocurrir

con la edad a medida que el tendón pierde elasticidad.

Vasodilatación: Permite un mayor flujo de sangre al aumentar el tamaño de la

cavidad hueca.

45

CAPÍTULO II

METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN

2.1 Métodos científicos empleados en la investigación

2.1.1 Diagrama de flujo

Idea de la investigación

Planteamiento del problema

Elaboración del marco

teórico

Definición del tipo de

investigación

Desarrollo de la hipótesis

Diseño de la investigación

Extracción de los extractos

Parámetros de Control de

Calidad de los extractos

Conformación de grupos

Primera fase del ensayo

Segunda fase del ensayo

Recolección de datos

Análisis de resultados

Conclusiones y RecomendacionesInforme Final

Presentación final

46

2.1.2 Métodos teóricos

El método científico utilizado concierne al hipotético deductivo, dado que en la

investigación realizada existe un planteamiento de hipótesis que a través de los

resultados logrados nos permitirá aceptar o rechazar la misma; esto es, que con

la administración de la mezcla hidroalcohólica se obtendrá el efecto buscado.

2.1.3 Métodos empíricos

Otro método empleado es de carácter Observacional y experimental, debido a

que en la evaluación realizada empezó desde la obtención y cuantificación de

los principios activos presentes en las plantas y culminó con la aplicación de la

actividad antiinflamatoria en los animales de experimentación.

2.1.4 Métodos matemáticos o estadísticos

Se aplicó la fórmula del porcentaje de inflamación, y además análisis

estadísticos para definir la diferencia significativa entre grupos.

47

2.2 Metodología

2.2.1 Adquisición de las especies

La adquisición de las especies vegetales de Matricaria chamomilla y Urtica

urens, se lo realizó en el Mercado Central de la ciudad de Guayaquil. Se

procedió a separar las hojas y raíces de Urtica urens y la sumidad florida (flores)

de Matricaria chamomilla; fueron llevadas al laboratorio de fitoquímica para su

cualificación y al laboratorio de PROGECA de la Universidad de Guayaquil −

Facultad de Ciencias Químicas para su cuantificación y extracción, estas

especies deberán de encontrarse frescas y en buen estado. Además, se tomó un

ejemplar de cada especie y fueron enviadas a la Facultad de Ciencias Naturales

al departamento de Botánica Sistemática del Herbario GUAY para la

identificación de los especímenes y su descripción (Anexo 1 - 2).

2.2.2 Parámetros Físico y Fisicoquímicos de las especies vegetales

2.2.2.1 Humedad

Se siguió el método que se encuentra descrito en el CIBE, (2015), por

Miranda, M. et. al:

Se pesó alrededor de 2 gramos de muestra triturada en un crisol de vidrio

(Anexo III).

Se desecó en la estufa a una temperatura de 105 ± 2 ˚C, durante 2 horas.

Se dejó enfriar el crisol con la muestra en el desecador, y se llevó hasta

peso constante (Gráfico IV).

48

Se calculó mediante la siguiente ecuación matemática:

Hg=M2-M1

M2-M*100

Hg= pérdida en peso por desecación (%).

M2= Masa de la cápsula con la muestra de ensayos (g).

M1= Masa de la cápsula con la muestra de ensayo desecada (g).

M= masa de la cápsula vacía.

Obtenido de (Miranda & Dranguet, 2015).

2.2.2.2 Cenizas

Según, Cabrera, H. et al. (2012), sigue los siguientes pasos para la

determinación del porcentaje de humedad:

Se pesó alrededor de 2 gramos de muestra triturada en un crisol de

porcelana (Anexo V).

Se llevó a carbonizar la muestra en la mufla a una temperatura de 600 ˚C.,

durante 2 horas. Se dejó enfriar el crisol con la muestra en el desecador y se

pesó (Anexo VI).

Se calculó mediante la siguiente ecuación matemática:

C=M2-M

M1-M*100

C= Porcentaje de cenizas totales en base hidratada.

M= Masa del crisol vacío (g).

M1= Masa del crisol con la porción de ensayo (g).

M2= Masa del crisol con la ceniza.

49

2.2.2.3 Screening −Tamizaje Fitoquímico

Siguiendo el método de Pereira, S et al. (2009), se realizó el Screening de la

siguiente manera:

2.2.2.3.1 Alcaloides

2.2.2.3.1.1 Ensayo de Dragendorff

En el caso que si el extracto esta disuelto en solvente orgánico, debe

evaporarse en baño de agua y el residuo redisolverlo en 1ml de HCl al 1% en

agua. Si se trata de un extracto acuoso, añadir 1 gota de HCl concentrado a la

alícuota, calentar suavemente y dejar enfriar hasta acidez.

Añadir a la solución acuosa acida 3 gotas del reactivo de Dragendorff, y proceder

a la observación: Opalescencia: (+), Turbidez definida: (++), Precipitado: (+++)

(Anexo VII).

2.2.2.3.1.2 Ensayo de Mayer

En una solución acida adicionar una pizca de ClNa en polvo, agitar y filtrar. Al

filtrado se le adiciona de 2 a 3 gotas de la solución reactiva de Mayer. Se

procede a reportar: Opalescencia: (+), Turbidez definida: (++), Precipitado: (+++).

Si se tratase de alcaloides cuaternarios o aminos-óxidos libres, estos

únicamente se encontrarán en extractos acuosos y para corroborar su presencia

la reacción debe ser (++) o (+++), pues si es de (+) esta puede ser la reacción de

una extracción incompleta de bases primarias, secundarias e incluso terciarias

(Anexo VII).

50

2.2.2.3.1.3 Ensayo de Wagner

Es necesario emplear una solución ácida y adicionar de 2 a 3 gotas del

reactivo de Wagner, y se reportan los resultados según la observación (Anexo

VII).

2.2.2.3.2 Saponinas

Proceder a medir 3 ml., del extracto acuoso y agitar vigorosamente, de

manera que permita observar la espuma persistente que indica la presencia de

saponinas (Anexo VIII).

2.2.2.3.3 Cumarinas

Colocar en un tubo de ensayo de 3 a 4 ml., de extracto acuoso de la muestra

vegetal, luego se cubre el tubo con un papel filtro humedecido en solución de

NaOH al 10% (Anexo IX). Colocar el tubo en baño maría por 5 minutos (Anexo

X), retirar el papel filtro del tubo y observar en luz ultravioleta. Presencia positiva

de cumarinas, se observa una fluorescencia verdosa o rosada en el papel filtro

(Anexo XI).

2.2.2.3.4 Triterpenos y/o esteroides

2.2.2.3.4.1 Ensayo de Lieberman-Bouchard

En ambos tipos de productos que posean el núcleo del androstano,

generalmente insaturado en el anillo B y la posición 5-6. La extracción debe

realizarse en una solución clorofórmica tomar 1 ml., del extracto adicionar 1 ml.,

51

de anhídrido acético y mezclar. Por la parte del tubo de ensayo se deja resbalar

de 2 a 3 gotas de Ácido Sulfúrico concentrado.

Se considera positivo al adquirir la siguiente coloración: Rosado-azul (muy

rápido); Verde intenso-visible (aunque rápido); Verde oscuro-negro- final de la

reacción (Anexo XII).

Las coloraciones pueden variar por interferencias producidas por carotenos,

xantofilas y esteroides saturados que puedan estar presentes.

2.2.2.3.5 Azúcares reductores

2.2.2.3.5.1 Ensayo de Fehling

Si se tratase de un extracto, cuyo solvente no sea agua dejar evaporar en

baño de agua y el residuo redisolverlo en 1-2ml., de agua, luego se adiciona

2ml., del reactivo y se calienta en baño de agua de 5 – 10 minutos la mezcla. Se

considera positivo en el caso de que se colorea de rojo o precipite de rojo

(Anexo XIII).

El reactivo se prepara de la siguiente forma:

Solución A: Se pesa 35g., de sulfato cúprico hidratado cristalizado y se

disuelve con agua hasta un volumen total de 100ml.

Solución B: Se pesa 150 g., de tartrato de Na y K y 40g., de Hidróxido de

Sodio y se disuelve con agua hasta un volumen de 100ml.

Las soluciones se mantienen preparadas de forma individual, y se mezcla de

igual cantidad en volumen de cada una de ellas en el momento de realizar el

ensayo, en la alícuota que se va a evaluar.

52

2.2.2.3.6 Compuestos fenólicos y/o taninos

2.2.2.3.6.1 Ensayo de Cloruro Férrico

Tomar una alícuota de 1 ml., del extracto hidroalcohólico y adicionar 3 gotas

de la solución de Cloruro Férrico al 5 o 10%. Si hay presencia de taninos se

obtiene una coloración azul, verde, pardo o negro (Gráfico XIV).

2.2.2.3.7 Flavonoides

2.2.2.3.7.1 Ensayo de Shinoda

Tomar 1 ml., de la alícuota de un extracto hidroalcohólico, diluir con 1 ml., de

ácido Clorhídrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metálico. Se

espera 5 minutos para añadirle 1ml., de alcohol amílico, se mezclan las fases y

se deja reposar hasta que se separen. Si la alícuota se encuentra en agua,

procede de igual forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico concentrado.

Se considera positivo cuando el alcohol amílico se colorea de amarillo, naranja,

carmelita o rojo; intensos en todos los casos.

53

2.2.3 Extractos Hidroalcohólicos

2.2.3.1 Extracción de principios activos de Matricaria Chamomilla y Urtica urens

Se preparó 1 litro de alcohol al 70%, diluyéndolo en agua tipo 1. La extracción

se la realizó por maceración usando alcohol al 70, donde por cada gramo de

planta se colocó 1 ml., de alcohol (Gráfico XV), y se dejó macerar por una

semana (Shaparin, 2000). Se filtró con ayuda de un algodón, permitiendo

separar el residuo, y así quedando el líquido libre de impurezas (Gráfico XVI).

2.2.3.2 Obtención de las mezclas hidroalcohólicas de Matricaria chamomilla y

Urtica urens

Para la preparación de las mezclas hidroalcohólicas a distintas

concentraciones, se tomó volúmenes diferentes de las extracciones realizadas

de la Matricaria chamomilla y Urtica urens (Anexo XVII) de la siguiente manera:

80O:20M 80 ml., de Ortiga y 20 ml., de Manzanilla.

50O:50M 50 ml., de Ortiga y 50 ml., de Manzanilla.

20O:80M 20 ml., de Ortiga y 80 ml., de Manzanilla.

54

2.2.4 Parámetros Físicos y Fisicoquímicos de los extractos

hidroalcohólicos y mezcla.

2.2.4.1 Características Organolépticas

2.2.4.1.1 Olor

Con un tira de papel de 1x10 cm., se introdujo en un extremo de la muestra.

Posteriormente oler y determinando su olor (Anexo XVIII).

2.2.4.1.2 Color

En un tubo de ensayo colocar 3 ml., de muestra, observar el color

(transparencia, opalescencia o separación de capas) (Anexo XIX).

55

2.2.4.2 Determinación de los Sólidos Totales

Se siguió el método que se encuentra descrito en el CIBE, (2015), por

Miranda, M. et. al:

Se tomó 5 ml., del extracto de las distintas muestras a una cápsula

previamente tarada a 105º C., se evaporó a baño de agua hasta casi

sequedad (Anexo XX).

Se llevó a la estufa y se dejó hasta peso constante (aproximadamente 3

horas) (Anexo XXI). Se retiró la cápsula de la estufa y se colocó en un

desecador hasta que alcance la temperatura ambiente (Anexo XXII).

La fórmula para determinar el porcentaje de sólidos totales, se calcula por la

siguiente formula:

St = Pr - P

V x 100

Donde:

P1= masa de la cápsula más el residuo (g).

P = masa de la cápsula vacía (g).

V = volumen de la porción de ensayo.

100 = factor matemático para el cálculo.

Observación: en caso de aceites esenciales se denomina como residuo de

evaporación (R).

56

2.2.4.3 Determinación de Densidad Relativa

Se siguió el método que se encuentra descrito en el CIBE, (2015), por

Miranda, M. et. al:

Se pesó el picnómetro vacío y seco. Posteriormente se enrasó con agua,

ajustando el líquido al nivel empleado y se pesó (Anexo XXIII).

Se secó el picnómetro y se enrasó con el extracto; y se repitió la misma

operación que en el paso anterior.

Para determinar la densidad relativa se calculó por la siguiente formula:

D25

M1-M

M2-M

Donde:

M1= peso del picnómetro con la muestra (g).

M2= peso del picnómetro con el agua (g).

M = peso del picnómetro vacío (g).

2.2.4.4 Determinación del pH de los extractos

Se realizó un ajuste del equipo con una solución reguladora de pH.

Posteriormente se procedió a determinar el valor del pH, de las muestras (Anexo

XXIV).

57

2.2.5 Cuantificación de principios activos

2.2.5.1 Cuantificación de quercetina

Estándar

Se pesó en una balanza analítica 20 mg., de estándar de quercetina

(flavonoides) en un matraz volumétrico, y se diluyó cuantitativamente con

alcohol al 80% (solución stock), hasta volumen final de 50 ml.

De esta solución se preparó una dilución primeria, tomando una alícuota

de 0,75 ml., y llevándolo a un matraz volumétrico de 25 ml.

A partir de esta dilución primaria se preparó los estándares para la curva

de calibrado (Gráfico XXV), tomando volumen de acuerdo indicado en la

Tabla V.

Tabla V

Diluciones para la elaboración de la curva de calibrado.

Alícuota

(ml)

Acetato de Potasio 1M

(µl)

Nitrato de Aluminio 10%

(µl)

VF etanol 80%

(ml)

0,5 200 200 4

1 200 200 4

1,5 200 200 4

2 200 200 4

2,5 200 200 4

3 200 200 4

3,5 200 200 4

4 200 200 4

Nota: µl= microlitros; ml= mililitros. Elaboración propia.

58

Se dejó en reposo por 40 min., y se leyó en el espectrofotómetro (Gráfico

XXVI).

Además, se usó como blanco alcohol al 80%.

Muestra

Para la cuantificación de quercetina en los extractos y en la mezcla, se

procedió según lo indica la Tabla VI y esto se realizó este análisis por triplicado

(Anexo XXVII).

Tabla VI

Tratamiento de los extractos para la cuantificación de quercetina.

Muestra Alícuota

(ml)

Acetato de

Potasio 1M (µl)

Nitrato de

Aluminio 10% (µl)

VF etanol

80% (ml)

Ortiga 1 400 400 10

Manzanilla 1 400 400 10

Mezcla 1 400 400 10

Nota: µl microlitros, ml mililitros. Elaboración propia.

Se dejó en reposo por 40 minutos, y se leyó en el espectrofotómetro UV a 415

nm.

59

2.2.5.2 Cuantificación de Taninos

Se trata de un método volumétrico por Lowenthal, J. pero descrito por Hart &

Fisher, (1984), usado para la cuantificación de taninos. Usando como indicador

el índigo de carmín y una solución titulante de permanganato de potasio (0,005

M). Este método consta de dos fases:

Primera Fase: Se procedió a tomar 1 ml., de la muestra, se agregó 5 ml., del

indicador índigo de carmín y 200 ml., de agua destilada. Valorar frente a la

solución de permanganato de potasio al 0,005 M, hasta una coloración azul,

posteriormente se desvanece a un verde claro. Valorar gota a gota hasta una

coloración amarilla. Consumo 1 (Anexo XXVIII).

Segunda Fase: Se procedió a tomar 1 ml., de la muestra en 50 ml., de

disolución de gelatina, agregar 100 ml., de solución ácida de ClNa y 10 g., de

caolín, se agitó la mezcla durante unos minutos, se esperó a que se sedimente

el residuo y se filtró. Se procedió a valorar con permanganato de potasio al 0,005

M de la misma forma que en la primera fase. Consumo 2 (Anexo XXIX).

60

2.2.6 ESTUDIO FARMACOLÓGICO

2.2.6.1 Material biológico

Se seleccionó ratas machos Wistar de 12 semanas de edad, con un peso

promedio de 240 ± 20 g, donde se conformó 5 grupos de 4 ratas cada uno, y se

distribuyeron en jaulas plásticas con tapa de rejilla metálica, donde además,

poseían un bebedero. Las jaulas fueron identificadas de la siguiente manera:

código del grupo, tipo de ensayo, fecha de inicio y fecha de terminó. Además los

animales fueron asignados con un número en la cola, llevando un control de

registro (Anexo XXXIV - XXXIX). Las condiciones ambientales que se registraron

durante el estudio fueron: temperatura de 22 ± 3 ˚C y una humedad 30 − 70%,

cumpliendo un ciclo circadiano de 12:12 (12 horas de luz y 12 horas de

oscuridad). El período de aclimatización de los animales fueron de

aproximadamente unos 7 días antes de iniciar el ensayo.

2.2.6.2 Materiales y Métodos “Actividad Antiinflamatoria”

2.2.6.2.1 Materiales

Jaulas plásticas, bebedero, balanza analítica, mortero, pistilo, vaso de

precipitación, cánula, pletismómetro.

2.2.6.2.2 Reactivos

Se utilizó como muestra los extractos y las mezclas que fueron objeto de

estudio, cloruro de sodio, carragenina 1%, Diclofenaco.

61

2.2.6.3 Método

El método que se empelará para medir la actividad antiinflamatoria, será el

que se encuentra reseñado en un estudio realizado por Lahoti, Kalra, & Tekur,

(2014).

2.2.6.3.1 Conformación de grupos tratamientos.

Se procedió a la selección de los animales que fueron sometidos a estudio,

los cuales fueron pesados en una balanza pesa animales (Shimadzu-UW82005);

se formó los distintos grupos a trabajar los mismos que se encuentran descritos

en la Tabla VII – VIII, registros de pesos iniciales (Anexo XXX). Y a partir de ello

se realizarán las administraciones a cada grupo (Anexo XXXV - XL).

62

Tabla VII

Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria: Urtica

urens y Matricaria chamomilla de las Mezclas hidroalcohólicas (Primer

Ensayo).

Grupo Fármaco

Volumen a

administrar

(ml/kg)

Dosis

(mg/kg)

Concentración de

las mezclas

hidroalcohólicas

A Control:

Negativo ClNa 0.9% 2 - -

B Control:

Positivo Diclofenaco 2 75 -

C Muestra Urtica urens y

Matricaria chamomilla 2 2,03 80O:20M

D Muestra Urtica urens y

Matricaria chamomilla 2

-

50O:50M

E Muestra Urtica urens y

Matricaria chamomilla 2 20O:80M

Nota. ml: mililitros; mg/kg: miligramos por kilogramos; 80O: 80 ml de Ortiga; 20O: 20

ml de Ortiga; 500: 50 ml de Ortiga; 80M: 80 ml de Manzanilla; 20M: 20 ml de

Manzanilla; 50M: 50 ml de Manzanilla. Elaboración propia.

63

2.2.6.3.2 Inducción del Edema Plantar

Doce horas antes de haber realizado el inicio a la evaluación de la actividad

antiinflamatoria, se les retiró el alimento a los animales, no así el agua. El día de

la prueba, se procedió a medir el volumen desplazado de agua de la pata trasera

derecha del animal (normal/inicial) en un pletismómetro. A continuación, se

administró la medicación a cada grupo respectivamente. Media hora después, se

les aplicó la carragenina al 1%, administrando así 0,1 ml., en la región suplantar

induciendo de esta manera la inflamación (Anexo XXXI).

Tabla VIII

Grupo Fármaco

Volumen a

administrar

(ml/Kg)

Dosis

(mg/kg)

Concentración

de las mezclas

hidroalcohólicas

A Control:

Negativo ClNa 0.9% 2 - -

B Control:

Positivo Diclofenaco 2 75 -

C Muestra Urtica urens y

Matricaria chamomilla 2 2,03 80O:20M

D Muestra Matricaria chamomilla 2 0,80 -

E Muestra Urtica urens 2 1,67 -

Grupos trabajados en la valoración para la Actividad Antiinflamatoria: Urtica

urens y Matricaria chamomilla de los extractos independientes frente a la mezcla

hidroalcohólica 80O:20M (Segundo Ensayo).

Nota. ml: mililitros; mg/kg: miligramos por kilogramos; 80O: 80 ml de Ortiga; 20O: 20 ml

de Ortiga; 500: 50 ml de Ortiga; 80M: 80 ml de Manzanilla; 20M: 20 ml de Manzanilla;

50M: 50 ml de Manzanilla. Elaboración propia.

64

2.2.6.3.3 Medición de la Inflamación plantar

Una vez que transcurrieron 3 horas después de la administración de la

carragenina, se procedió a medir el volumen de desplazamiento, a partir de este

tiempo se evaluó la inflamación a la primera hora, tercera hora, y finalmente a la

quinta hora (Anexo XXXII).

2.2.7 Bioética

Este estudio farmacológico se realizó aplicando los principios de Bioética de

experimentación con animales, que consiste en las 3 Rs: Reducción (menor

cantidad de animales), Refinamiento (uso de técnicas que eviten, y que no

causen dolor al animal) y Reemplazo (uso de animales de especies menores).

Durante este estudio se evitó todo sufrimiento innecesario, y asimismo, una

vez que se dio por terminado el ensayo se procedió a la eutanasia de acuerdo al

siguiente procedimiento:

En una cabina saturada de éter se colocó al animal, de manera que produzca

inconciencia, y así se procedió a realizar la dislocación cervical comprobando su

muerte.

65

2.2.8 Resultados

Los resultados constaron en tablas elaboradas en Excel que nos permitió,

realizar los cálculos correspondientes, además se elaboraron formatos que

receptaron los datos de las administraciones realizadas en los distintos grupos y

el volumen de desplazamiento de la pata trasera derecha, tanto normal como

inflamada.

2.2.9 Cálculos de los resultados

Los cálculos se realizaron en Excel, y a partir de ella se obtuvo el promedio

del volumen desplazado, y se aplicó la fórmula para obtener los porcentajes de

inflamación medida a través del tiempo.

% Inflamación= Vt - Vo

Vo

X 100

Donde:

Vt = Volumen (final) de la pata inflamada a un tiempo.

Vo = Volumen (inicial) normal.

2.2.10 Análisis de los resultados

Adicionalmente, se realizó un análisis estadístico, tanto del porcentaje de

inflamación, aplicando una comparación de medias (ANOVA), con la ayuda de

un programa estadístico con una probabilidad estadística <0,05.

66

2.3 Tipo de investigación

El tipo de investigación en el que se basa nuestro estudio es correlacional,

debido a que existen variables dependientes como el porcentaje de inflamación,

y las independientes como el tiempo y los diferentes niveles de concentración de

las mezclas hidro-alcohólicas, evaluando el efecto antiinflamatorio esperado.

2.4 Diseño experimental de la investigación

Este estudio se basa en el Diseño experimental verdadero, involucrando así al

diseño experimental de series cronológicas; pues se llega a emplear varios

grupos experimentales, realizando las correspondientes mediciones en

diferentes tiempos (1ra, 3ra y 5ta hora).

67

CAPÍTULO III

RECOLECCIÓN DE DATOS. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE

RESULTADOS

3.1 Análisis Físico y Fisicoquímicos

3.1.1 Humedad

Tabla IX

Tabla de resultados de los porcentajes de humedad en especies vegetales

Repeticiones Manzanilla (%) Ortiga (%)

1 83,52 70,36

2 83,47 70,11

3 82,90 71,17

83,30±0,34 70,55±0,55

Nota. Unidades expresadas en porcentaje de humedad (%). Elaboración propia.

La determinación de humedad de las especies (manzanilla y ortiga), se lo

realizó por triplicado para verificar que no existieran variaciones en los

resultados. La humedad promedio de la manzanilla fue de 83,30 y la ortiga de

70,55 (Tabla IX).

68

3.1.2 Cenizas

Tabla X

Tabla de resultados de los porcentajes de cenizas en especies vegetales

Repeticiones Manzanilla (%) Ortiga (%)

1 2,07 6,27

2 1,99 5,40

3 1,82 6,18

1,96±0,13 5,95±0,48

Nota. Unidades expresadas en porcentaje de cenizas (%). Elaboración propia.

La determinación de cenizas de las especies (manzanilla y ortiga), se realizó

por triplicado para verificar que no existieran variaciones en los resultados. La

ceniza promedio de la manzanilla fue de 1,96% y la ortiga de 5,95% (Tabla X).

69

3.1.3 Screening o Tamizaje Fitoquímico

Tabla XI

Screening Fitoquímico de las especies vegetales de ortiga (Urtica urens) y

manzanilla (Matricaria chamomilla), en extracto acuoso y hidroalcohólico.

Muestra Análisis Reacción Resultados

Manzanilla Ortiga

EXTRACTO

ACUOSO

Alcaloides

Dragendorff - +

Wagner - +

Bouchardat - +

Mayer - +

Saponinas Espuma ++ +++

Cumarinas Hidróxido de

Sodio ++ +

Taninos Cloruro

Férrico - ++

EXTRACTO

ALCOHÓLICO

Glucósidos

Fehling A + +

Fehling B + +

Benedict + +

Flavonoides Shinoda ++ +

Triterpenos

Anhídrido

Acético, Ac.

Sulfúrico,

Cloroformo

- ++

Antraquinonas

Benceno,

Hidróxido de

sodio

- -

Esteroides

Anhídrido

Acético, Ac.

Sulfúrico

- ++

Nota. (-) No hay desarrollo de la reacción; (+) Mínimo precipitado; (++) Moderado

precipitado o presencia de color; (+++) Abundante precipitado o color intenso.

Elaboración propia.

70

De acuerdo al sreening fitoquímico, realizado en las especies vegetales de

ortiga (Urtica urens) y manzanilla (Matricaria chamomilla) como se muestra en la

Tabla XI, se determinó cualitativamente la presencia de alcaloides, saponinas,

cumarinas, taninos en extracto acuoso; y glucósidos, flavonoides, triterpenos,

antraquinonas, esteroides en extracto hidroalcohólico.

Mediante el extracto acuoso, realizado en ambas especies vegetales se logra

identificar la presencia de ciertos metabolitos, tales como: alcaloides dando

positivo solo en ortiga (+); en el ensayo de saponinas se observó la presencia de

espuma dando positivo en ambas, pero siendo más predominante en la ortiga

indicando (+++); a la vez en el ensayo de cumarinas se observa mayor presencia

de esta en manzanilla que en ortiga (++); y finalmente se logra identificar (++)

taninos en ortiga, siendo negativo en manzanilla al no efectuarse la reacción.

Por lo consiguiente, en el extracto alcohólico de ambas especies vegetales se

identifica los siguientes metabolitos: se determinó la presencia de glucósidos en

ambos extractos; en cuanto a la determinación de flavonoides, presentó mayor

coloración en manzanilla dando así el ensayo positivo (++); se observó presencia

de triterpenos en ortiga por medio de la coloración; mediante el ensayo de

antraquinonas dio como resultado negativo en ambas especies; y finalmente en

el ensayo de esteroides dio como resultado positivo en ortiga indicando (++).

71

3.1.4 Análisis Físicos y Fisicoquímicos en los extractos hidroalcohólicos

independientes y mezcla Hidroalcohólica

Tabla XII

Caracterización Organoléptica de los extractos independientes y mezcla

hidroalcohólica (80O:20M)

Caracteres Ortiga Manzanilla Mezcla

(80O:20M)

Olor Herbáceo

característico Dulce a flores Dulce a flores

Color Verde Oscuro Amarillo

verdoso Verde Amarillento

Nota. 80O: 80 ml de ortiga y 20M: 20 ml de manzanilla. Elaboración propia.

Mediante el análisis organoléptico se logró apreciar las siguientes

características de los extractos alcohólicos de las especies vegetales y mezcla

hidroalcohólica (80O:20M) como lo muestra la Tabla XII; indicando que la ortiga

presenta un olor herbáceo característico de la misma; la manzanilla presenta un

olor dulce a flores, y la mezcla también posee un olor dulce a flores; mientras

que el color verde oscuro representa a la ortiga y el amarillo verdoso

corresponde a la manzanilla y ambas otorgan el color verde amarillento a la

mezcla estudiada.

72

Tabla XIII.

Determinación de Solidos Totales; Densidad Relativa, y pH de las especies

vegetales y mezcla hidroalcohólica (80O:20M)

Ensayos Unidades Ortiga Manzanilla Mezcla (80O:20M)

Sólidos Totales % 3,98 4,12 4,14

Densidad

0,9747 0,9753 0,9733

pH 9 6,8 8,3

Nota. (%) porcentaje de sólidos totales. Elaboración propia.

Mediante el estudio fisicoquímico se realizaron determinación en extractos

independientes y en la mezcla hidroalcohólica obteniéndose los siguientes

resultados como lo demuestra la tabla XIII.

3.2 Cuantificación de los principios activos presentes en las especies

vegetales y mezcla hidroalcohólica (80O:20M)

Se realizó la cuantificación de quercetina (flavonoides), en ambas especies

vegetales y taninos, en ortiga (Urtica urens).

73

3.2.1 Quercetina

Tabla XIV

Cuantificación de Quercetina de ambas especies vegetales y mezcla

hidroalcohólica (80O:20M) en alcohol al 70%

Repeticiones Ortiga (µg/ml) Manzanilla (µg/ml) Mezcla (80O:20M) µg/ml

1 29,6 84,9 44,2

2 33,4 85,4 40,6

3 36 68,3 43,4

33±3,22 79,53±9,73 42,73±1,89

Nota. Unidades en microgramos por ml (µg/ml). 80O: 80 ml de Ortiga; 20M: 20 ml de

manzanilla. Elaboración propia.

De acuerdo a los resultados obtenidos de la cuantificación de quercetina,

mediante el uso de una curva de calibrado (Anexo XXXIII) se determinó que por

cada ml; de extracto encontramos: ortiga 33 µg/ml; manzanilla 40,6 µg/ml, y de la

mezcla 80O:20M 43,4 (Tabla XIV).

74

3.2.2 Taninos

Tabla XV

Cuantificación de Taninos Totales de extracto de Urtica urens y mezcla

hidroalcohólica (80O:20M).

Repeticiones Ortiga (g/10ml) Mezcla 80O:20M (g/10ml)

1 0,00179 0,00134

2 0,00089 0,002134

3 0,00134 0,00134

0,00134 0,001607

Nota. g/10ml: gramo por cada 10 ml, 80O: 80 ml de Ortiga, 20M: 20 ml de manzanilla.

Elaboración propia.

De acuerdo a los resultados obtenidos de la cuantificación de taninos por

cada 10 ml de extracto encontramos: ortiga 0,00134, y de la mezcla 80O:20M

0,001607 (Tabla XV).

75

3.3 Evaluación de la actividad antiinflamatoria

3.3.1 Primera fase

Tabla XVI

Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su

respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la primera fase de la evaluación durante la Primera Hora post-

Inducción

GRUPOS

Promedio del

Volumen de

Desplazamiento

Inicial (ml)

SD

Promedio del

Volumen de

Desplazamiento

Inicial (ml)

SD

Diferencia

significativa

Probabilidad

(P<0,05)

Control

Negativo

(ClNa)

1,7 0,18 3,1 0,22 A

Control

Positivo

(Diclofenaco)

1,5 0,13 2,5 0,22 B

Mezcla

(20M:80O) 1,8 0,13 2,4 0,24 B

Mezcla

(50M:50O) 1,4 0,13 2,4 0,2 B

Mezcla

(80M:20O) 1,5 0,13 2,5 0,22 C

Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:

P<0,05. Elaboración propia.

76

Según, (Tabla XVI) en la primera hora de medición (post–inducción de

inflamación de la pata con carragenina); se puede observar que el grupo control

negativo, el cual no tenía ningún tratamiento el porcentaje de inflamación fue de

84 ± 7,4; para el control positivo tratado (diclofenaco) 64 ± 2,8; los grupos que

recibieron las mezclas de: (20 manzanilla – 80 ortiga) 37 ± 5,4; (50 manzanilla –

50 ortiga) 78 ± 10,7; (80 manzanilla – 20 ortiga) 62,3 ± 7,6. De acuerdo al

análisis estadístico de los datos se observa que presenta diferencias

significativas el grupo control negativo con el resto de grupos tratados, excepto

con el grupo que recibió el tratamiento de la mezcla hidroalcóholica de (50

manzanilla – 50 ortiga), en la que se observa que el porcentaje de inflamación no

presenta diferencias. En tanto que, los resultados analizados tanto del grupo

control positivo (diclofenaco) con la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla – 20

ortiga), presentaron un comportamiento similar. Sin embargo, la mezcla (20

manzanilla – 80 ortiga) fue la que presentó diferencias significativas al ser

comparada con los demás grupos; en cuanto a su porcentaje de inflamación, lo

que se puede inferir que se deba a la presencia de histamina en la ortiga, la

misma que tiene un elevado poder antiinflamatorio, aumentado el porcentaje de

inhibición, y a su vez disminuyendo el porcentaje de inflamación (Figura VIII)

(Anexo XXXVI - XXXVII).

Figura VIII. Porcentajes de Inflamación de los grupos tratamientos en la Primera Fase

de la primera hora. Elaboración propia

- 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00

100,00

A Controlnegativo

B Controlpositivo:

(Diclofenaco)

C Muestra(80 0:20M)

D Muestra(50O:50M)

E Muestra(20O:80M)

77

Tabla XVII

Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su

respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la primera fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-

inducción

GRUPOS Promedio del

Volumen de

Desplazamiento

Inicial (ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Volumen

Final

(ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Diferencia

significativa

Probabilidad

(P<0,05)

Control

Negativo

(ClNa)

1,7 0,18 2,8 0,32 A

Control

Positivo

(Diclofenaco)

1,5 0,13 2,3 0,13 BC

Mezcla

(20M:80O) 1,8 0,13 2,2 0,14 CD

Mezcla

(50M:50O) 1,4 0,13 2,2 0,13 AB

Mezcla

(80M:20O) 1,5 0,13 2,3 0,10 D

Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de

significancia: P<0,05. Elaboración propia.

78

En la tercera hora de la primera fase de evaluación (Tabla XVII), los datos

analizados reportaron que, entre los grupos presentaron diferencias significativas

al ser analizados estadísticamente. El grupo control negativo no tenía ningún

tratamiento el porcentaje de inflamación fue de 64,6 ± 3,9 para el control positivo

(diclofenaco); 47,9 ± 10,2; los grupos que recibieron las mezclas de: (20

manzanilla – 80 ortiga); 25,8 ± 3,9; (50 manzanilla – 50 ortiga); 59,8 ± 8,9; (80

manzanilla – 20 ortiga); 49,57 ± 7.0.

Se reporta que presenta diferencias significativas el grupo control negativo

con el resto de grupos tratados, excepto con el grupo que recibió el tratamiento

de la mezcla hidro-alcohólica de (50 manzanilla – 50 ortiga), en la que se

mantiene la misma tendencia que la primera hora de lectura. El grupo que fue

tratado con (80 manzanilla – 20 ortiga), tuvo proximidad en su respuesta al grupo

se enmarcó más (50 manzanilla-50 ortiga), este resultado también dada a su

tendencia fue comparable con el grupo control positivo. En tanto, que el grupo

que recibió la mezcla (20 manzanilla – 80ortiga), presentó un porcentaje de

inflamación mucho menor, inclusive con el fármaco que se sirvió como control

positivo que posee características antiinflamatorias (Figura IX) (Anexo XXXVI -

XXXVII).

79

Lo que demuestra que la asociación de ambas especies vegetales se

potencializan, esto se le puede atribuir a la presencia de algunos componentes

en la ortiga como son: flavonoides (quercetina), cumarinas, ácidos orgánicos

(gálico, fórmico), compuestos fenólicos, taninos, acetilcolina y una gran cantidad

de clorofila, histamina y serotonina. La clorofila tiene como función eliminar

toxinas de nuestro organismo, posee actividad antioxidante y antiinflamatorio.

Debido a la presencia de tricomas en las hojas de ortiga, estas presentan un alto

contenido de histamina y serotonina (produce picor), pero a su vez ayuda a

contrarrestar el dolor y la inflamación. Se conoce que los ácidos orgánicos

reducen los niveles de sustancias inflamatorias producidas por la activación de

las células T, inhibiendo la producción de células dendríticas maduras y la

producción de citoquinas pro-inflamatorias evitando que el sistema inmune active

el factor que produce inflamación la que puede desencadenar en una necrosis

tumoral.

Figura IX. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Primera Fase

de la tercera hora. Elaboración propia.

-

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

70,00

80,00

A Controlnegativo

B Controlpositivo:

(Diclofenaco)

C Muestra(80 0:20M)

D Muestra(50O:50M)

E Muestra(20O:80M)

80

Tabla XVIII

Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su

respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la primera fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-

inducción.

GRUPOS

Promedio del

Volumen de

desplazamiento

Inicial (ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Volumen

Final

(ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Diferencia

significativa

Probabilidad

(P<0,05)

Control

Negativo

(ClNa)

1,7 0,18 2,5 0,30 A

Control

Positivo

(Diclofenaco)

1,5 0,13 2,1 0,13 BC

Mezcla

(20M:80O) 1,8 0,13 2,0 0,14 C

Mezcla

(50M:50O) 1,4 0,13 1,9 0,10 AB

Mezcla

(80M:20O) 1,5 0,13 2,0 0,21 C

Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:

P<0,05. Elaboración propia.

En la quinta hora de la primera fase de evaluación, los grupos presentaron

diferencias significativas al ser analizados estadísticamente (Tabla XVIII). El

grupo control negativo no recibió ningún tratamiento el porcentaje de inflamación

fue de 48,6 ± 10; presentó diferencias entre grupos, excepto con el grupo que

fue tratado con (50 manzanilla – 50 ortiga) presentando una inflamación de

43,09 ± 7,13, el mismo que presentó semejanza con el grupo que recibió

diclofenaco 34,61 ± 4,43, en tanto que la mezcla de (80 manzanilla – 20 ortiga) a

81

esta hora se pudo notar que el porcentaje de inflamación 27,71 ± 5, estuvo por

debajo del control positivo.

En tanto, que con la mezcla, (20 manzanilla – 80 ortiga) el porcentaje de

inflamación fue mucho menor 14,35 ± 3,59, presentando diferencias con todos

los demás grupos (Figura X), de lo que se puede deducir que debido a la

presencia de los componentes que tienen la ortiga incorporados los de la

manzanilla sea este el caso de la presencia de los flavonoides, taninos y

compuestos fenólicos captadores de radicales libres que favorecen la actividad

desinflamatoria (Anexo XXXVI - XXXVII). A la vez los flavonoides (quercetina y

apigenina), que actúan sinérgicamente en el mecanismo de la acción inhibitoria

de las enzimas 5-lipooxigenasa y ciclooxigenasa. También interacciona los

flavonoides y los componentes del aceite esencial, en especial “la fracción

sesquiterpénica conformada por el α − bisabolol y los bisabolóxidos A y B” que

son los principales principios activos de la manzanilla que inhiben la acción

inflamatoria. Además, el ácido caféico inhibe parcialmente la biosíntesis de

metabolitos derivados del ácido araquidónico, y a su vez la síntesis de

prostaglandinas en extractos hidroalcohólicos porque en extracto acuoso no

presenta la misma actividad terapéutica, ya que el compuesto presenta baja

solubilidad en agua.

Figura X. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Primera fase de

la quinta hora. Elaboración propia.

-

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

A Controlnegativo

B Controlpositivo:

(Diclofenaco)

C Muestra(80 0:20M)

D Muestra(50O:50M)

E Muestra(20O:80M)

82

3.3.2 Segunda fase

Tabla XIX

Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su

respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Primera Hora post-

inducción.

GRUPOS

Promedio del

Volumen de

desplazamiento

Inicial (ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Volumen

Final

(ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Diferencia

significativa

Probabilidad

(P<0,05)

Control

Negativo

(ClNa)

1,4 0,06 2,5 0,08 A

Control

Positivo

(Diclofenaco)

1,5 0,13 2,4 0,15 B

Ortiga 1,4 0,34 2,4 0,39 B

Manzanilla 1,3 0,17 1,9 0,19 C

Mezcla

(80O:20M) 1,3 0,19 2,2 0,22 B

Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:

P<0,05. Elaboración propia.

83

En esta segunda fase de evaluación se realizó la medición de inflamación por

medio del volumen de agua desplazado (Tabla XIX). Consistió en evaluar si

existía diferencia, en relación al porcentaje de inflamación que presentaban los

grupos que recibieron extractos tanto de manzanilla y ortiga; obtenidas

(independientemente), con los animales que fueron tratados con la mezcla de

(20 manzanilla – 80ortiga), y aquellos a los que, se les administró diclofenaco.

En donde a la primera hora en que se realizó la medición de inflamación, los

porcentajes obtenidos fueron para el control negativo (Cl Na) 85,3 ± 5,6; para el

control positivo (diclofenaco) 66,8 ± 7,8; en el grupo tratado con ortiga 59,5 ±

12,7; para el grupo tratado con manzanilla 68,8 ± 12; y en la mezcla tratada (20

manzanilla – 80 ortiga) 42,2 ± 11,3 (Figura XI).

De lo que se puede establecer que el porcentaje presentado por la mezcla

fue menor que el del diclofenaco que en este estudio fue el control positivo, y

que es un fármaco comercial que se lo utiliza como antiinflamatorio (Anexo XLI –

Anexo XLII). En cuanto al control negativo este fue el que presentó mayor

porcentaje de inflamación existiendo diferencias significativas entre grupos. El

porcentaje presentado, tanto de ortiga como para manzanilla (extractos

independientes), no presentaban diferencias con el control positivo, es decir,

estos aunque son extractos aislados, también poseen actividad antiinflamatoria.

84

La explicación de estos resultados puede estar asociada al estudio realizado

por Wagner y Willer (1990), sobre la actividad antiflogística, en el que se aisló

una mezcla de léctina, y cinco polisacáridos ácidos de las raíces Urtica. Estos

compuestos mostraron actividades inmunológicas, estimulación de los linfocitos

T y los macrófagos inducida por la liberación de factor de necrosis tumoral

(TNF).

Figura XI. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda Fase

de la quinta hora. Elaboración propia.

-

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

70,00

80,00

90,00

100,00

A ControlNegativo

B ControlPositivo

(Diclofenaco)

C Muestra(Ortiga)

D Muestra(Manzanilla)

EMuestra(80O:20M)

85

Tabla XX

Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su

respectiva desviación estándar, y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Tercera Hora post-

inducción.

GRUPOS

Promedio del

Volumen de

desplazamiento

Inicial (ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Volumen

Final

(ml)

Desviación

Estándar

(SD)

Diferencia

significativa

Probabilidad

(P<0,05)

Control

Negativo

(ClNa)

1,7 0,18 2,8 0,32 A

Control

Positivo

(Diclofenaco)

1,5 0,13 2,3 0,13 CD

Ortiga 1,8 0,13 2,2 0,14 AB

Manzanilla 1,4 0,13 2,2 0,13 D

Mezcla

(80O:20M) 1,5 0,13 2,3 0,10 BC

Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de

significancia: P<0,05. Elaboración propia.

En la tercera hora del estudio se realizó la medición de inflamación por medio

del volumen de agua desplazado. A partir de los cuales se obtuvo el porcentaje

de inflamación, tales como: control negativo (Cl Na) 72,4 ± 10,2; para el control

positivo (diclofenaco) 41,6 ± 20,63; en el grupo tratado con ortiga 34,42 ± 5,6;

para el grupo tratado con manzanilla 56,34 ± 17; y en la mezcla tratada (20

manzanilla – 80 ortiga) 21,28 ± 5,84.

86

En la Tabla XX se demuestra que la diferencia que presenta el grupo

tratamiento (20 manzanilla – 80 ortiga) mantiene la misma tendencia que en la

primera hora de evaluación; es decir, que el porcentaje presentado por este

grupo está por debajo del grupo control positivo (diclofenaco); lo que implica que

exista diferencias significativas en relación con los otros grupos. En tanto, que de

acuerdo a la significancia estadística del porcentaje entre los grupos, se puede

indicar que guardan proximidad ascendente en el siguiente orden: el grupo

tratado con mezcla (80 ortiga – 20 manzanilla), ortiga (extracto aislado), seguido

del diclofenaco, manzanilla (extracto aislado), y finalmente el control negativo

con un elevado porcentaje de inflamación (Figura XII) (Anexo XLI – Anexo XLII).

Por ende, se puede inferir que el mecanismo de acción de los AINES, es la

de inhibir la enzima ciclooxigenasa, (encargadas de transformar el ácido

araquidónico en endoperóxidos cíclicos), es el responsable tanto de la actividad

terapéutica, debido a esto, es que se debe la respuesta obtenida con el

diclofenaco. Del mismo modo, estudios realizados sobre la actividad

antiinflamatoria del extracto hidroetánolico de ortiga, han demostrado que el

ácido cafeilmálico aislado (principal constituyente fenólico) inhiben parcialmente

entre un 20,8 y 68,2%, la biosíntesis de metabolitos derivados del ácido

araquidónico y de leucotrienos in vitro.

87

Otros estudios que fueron realizados por Kavalali y Tuncel, (1997) sobre el

extracto hidroetánolico de la ortiga, el ácido aislado presentaron capacidad de

inhibir la síntesis de prostaglandinas, en donde la actividad anti-inflamatoria U.

pilulifera (ortiga romana), se comprobó que estaba en dependencia de la dosis

de extracto de semilla que se le administro a las ratas, en donde se compara con

la indometacina y placebo usando un edema inducido por carragenina en pata

de rata. Los resultados mostraron una acción antiinflamatoria era similar entre el

extracto U. pilulifera con la indometacina y presentaban diferencias significativas

con el placebo. Estos resultados son semejantes con los obtenidos en este

estudio para la mezcla hidroalcóholica.

Figura XII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda Fase de

la tercera hora. Elaboración propia.

- 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 80,00 90,00

A ControlNegativo

B ControlPositivo

(Diclofenaco)

C Muestra(Ortiga)

D Muestra(Manzanilla)

EMuestra(80O:20M)

88

Tabla XXI

Promedio de volúmenes iniciales – finales desplazados de agua con su

respectiva desviación estándar y la diferencia significativa entre los grupos

tratados en la segunda fase de la evaluación durante la Quinta Hora post-

inducción.

GRUPOS

Promedio del

Volumen de

desplazamiento

Inicial (ml)

SD

Promedio del

Volumen de

desplazamiento

Inicial (ml)

SD

Diferencia

significativa

Probabilidad

(P<0,05)

Control

Negativo

(ClNa)

1,7 0,18 2,5 0,30 A

Control

Positivo

(Diclofenaco)

1,5 0,13 2,1 0,13 C

Ortiga 1,8 0,13 2,0 0,14 AB

Manzanilla 1,4 0,13 1,9 0,10 C

Mezcla

(80O:20M) 1,5 0,13 2,0 0,21 BC

Nota. *Letras iguales no presentan diferencia significativa. Nivel de significancia:

P<0,05. Elaboración propia.

La medición efectuada a la quinta hora exhibe volúmenes de agua

desplazado tanto al inicio de la experiencia, como al final de la misma, a partir de

los cuales se establece el grado de inflamación calculados a partir de los

porcentajes (Anexo XLI – Anexo XLII).

89

En cuanto al análisis estadístico realizado; el extracto mostró una actividad

anti- inflamatoria prolongada comparable a la eficacia farmacológica del

diclofenaco, de acuerdo a lo que se puede observar en la Tabla XXI en la que

los porcentajes muestran diferencias entre grupos, así los porcentajes para el:

control negativo (Cl Na) 45 ± 20; control positivo (diclofenaco) 22,9 ±2,95; el

grupo tratado con ortiga 18,3 ± 7; tratado con manzanilla 34,2 ± 5,4; y en la

mezcla tratada (20 manzanilla – 80 ortiga) 13,6 ± 5; este último grupo no

presentó diferencia con el grupo tratado con ortiga (extracto aislado). Se puede

indicar que ambas plantas medicinales (manzanilla y ortiga) presentan efecto

sinérgico debido a que poseen componentes activos con propiedades

antiinflamatorias como el ácido caféico, quercetina, taninos, cumarinas. Además,

la Ortiga contiene otros principios tales como: el ácido linoleico (precursor de las

prostaglandinas), hormonas que bloquean la producción de jugo gástrico,

vitamina B2 y mucilagos que actúan como citoprotectores debido a la reducción

de secreción gástrica al estimular la secreción de bicarbonato y moco, así

asegura protección de la mucosa gástrica.

Estudios realizados in vitro y en animales por Flury (1927), demuestran que la

irritación de la ortiga se debe a la presencia de un fluido que se produce en la

base del cabello urticante que contiene una pequeña cantidad de ácido fórmico

y, que es el que confiere la propiedad antiinflamatoria, disminuye el dolor de

articulaciones e intervienen en el alivio del reumatismo. En tanto que, la

manzanilla presenta un elevado porcentaje de “apigenina la misma que posee un

efecto inhibitorio de la activación transcripcional de la enzima ciclooxigenasa-2

(COX-2) que directamente interviene en la vía metabólica del ácido araquidónico,

que son los antecesores al desarrollo en un proceso de inflamación.

90

De acuerdo al análisis de todas la horas en la primera fase del estudio, se

puede indicar que, según la hipótesis planteada, no se cumplió, puesto que el

resultado esperado era que a partir de la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla -

20 ortiga) se obtendría el menor porcentaje de inflamación debido a que en la

manzanilla están presenten el camazuleno (principio activo que ejerce esta

actividad estudiada); no obstante, la mejor respuesta obtenida fue a partir de la

mezcla de (20 manzanilla − 80 ortiga) debido a otros componentes que se

encuentran presentes en la ortiga (ácido fórmico), por lo que hace que la

hipótesis sea rechazada. En lo concerniente, a la segunda fase en relación a

todas las horas de evaluación, se puede indicar que lo expuesto para la primera

fase se comprueba el rechazo de la hipótesis sobre la respuesta anticipada que

se dio sobre la mezcla hidroalcóholica (80 manzanilla -20 ortiga), debido a que

en esta etapa la mezcla de (20 manzanilla- 80 ortiga) la inhibición fue mayor, la

misma que se encuentra reflejada en el porcentaje de inflamación presentado

(Figura XIII).

Figura XIII. Porcentajes de inflamación de los grupos tratamientos en la Segunda Fase

de la quinta hora. Elaboración propia.

-

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

A ControlNegativo

B ControlPositivo

(Diclofenaco)

C Muestra(Ortiga)

D Muestra(Manzanilla)

EMuestra(80O:20M)

91

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Conclusiones

1) Con respecto a las caracterizaciones fisicoquímicas de las especies

vegetales se analizó el porcentaje de humedad, obteniendo así 83,30% para

Manzanilla y 70,55% para Ortiga; a la vez se determinó el porcentaje de

cenizas del cual se halló 1,96% Manzanilla y 5,95% Ortiga; a través del

tamizaje fitoquímico, se confirmó la presencia de los metabolitos, tales como

alcaloides, saponinas, taninos, y cumarinas en el extracto acuoso de ortiga;

se encontró mayor presencia de cumarinas y ausencia de taninos, en el

extracto acuoso de manzanilla. Por lo consiguiente se realizan los análisis

en extractos alcohólicos donde se identificó la presencia de glucósidos en

ambos extractos; en cuanto a la determinación de flavonoides, presentó

mayor coloración en manzanilla dando así el ensayo positivo; se observó

presencia de triterpenos en ortiga por medio de la coloración; mediante el

ensayo de antraquinonas dio como resultado negativo en ambas especies; y

finalmente en el ensayo de esteroides dio como resultado positivo en ortiga

indicando.

2) A la vez se realizaron análisis de caracterización organoléptica tanto de los

extractos independientes como de la mezcla; obteniendo así coloración

verde oscuro y olor herbáceo característico en el extracto hidroalcohólico de

ortiga; olor dulce a flores con coloración amarilla verdosa para el extracto

hidroalcohólico de manzanilla; y finalmente se identificó una coloración

verde amarillenta con un olor dulce a flores para la mezcla hidroalcohólica

(80 Ortiga – 20 Manzanilla). Se determinó el análisis de sólidos totales

obteniendo así 3,98% para Ortiga; 4,12% para Manzanilla, y 4,14 para la

mezcla hidroalcohólica (80 Ortiga – 20 Manzanilla). De igual manera se

determinó la densidad específica y el pH adquiriendo 0,9747 de densidad y

9 de pH para Ortiga; 0,9753 de densidad y 6,8 de pH para Manzanilla y

finalmente 0,9733 de densidad y 8,3 de pH para la mezcla hidroalcohólica

(80 Ortiga – 20 Manzanilla).

92

3) En cuanto a la cuantificación de los principios activos se pudo determinar

que la concentración de quercetina en manzanilla: 0,07953 mg/ml, en

ortiga quercetina (0,033 mg/ml) y taninos (1,34 mg/ml), en la mezcla

hidroalcóholica de manzanilla y ortiga fue de quercetina (0,04273 mg/ml), y

taninos (0,1607 mg/ml)

4) De los resultados obtenidos se puede argumentar que se manifiesta una

actividad marcada (antinflamatoria) en la primera fase, primera hora; fue la

que exhibió la mezcla hidroalcohólica de (80 ortiga - 20 manzanilla) con una

dosis de 2,03 mg/kg; el porcentaje de inflamación que presentó la pata

(36,98%). Este porcentaje, inclusive fue menor que el evaluado con el

diclofenaco (63,91%), fármaco utilizado como control (Anexo XXXVIII).

Durante esta etapa, la tendencia en cuanto a la inhibición de inflamación

mostrado por la mezcla hidroalcohólica de (80O:20M), se mantuvo para la

tercera y quinta hora de evaluación.

5) Del mismo modo, en la segunda fase del experimento, primera hora de

evaluación, se determinó que el porcentaje de inflamación para la mezcla

(80O:20M) 42,21%, siendo la dosis trabajada la misma que se ensayó en la

primera fase de evaluación, para los extractos de: ortiga (aislado) 59,54,

manzanilla (aislado) 68,78; diclofenaco 66,78 (Anexo XLIII). Por lo que se

puede inferir que la acción sinérgica de la mezcla (80O:20M) a la dosis

ensayada de 2,03 mg/kg presentó mayor efecto antiinflamatorio que los

extractos alcohólicos aislados de la manzanilla y ortiga, cuyas dosis

trabajadas fue de 0,80mg/kg; 1,67 mg/kg respectivamente.

93

Recomendaciones

Por lo trascendente que resulta la información generada en este trabajo,

sobre la efectividad que presenta la mezcla hidroalcohólica, pero debido a que

pueden presentarse interacciones entre los fármacos y plantas medicinales, los

que pudieran dar origen a efectos no deseados, o afectar a la farmacocinética y

farmacodinamia. Se debe de recurrir a la realización de otros estudios

posteriores, tales como:

La ejecución de ensayos toxicológicos, farmacocinéticos, microbiológicos de

las mezclas hidroalcóholicas, para poder inferir acerca de la inocuidad y

riesgos en el consumo humano.

A la vez se sugiere, efectuar estudios in vitro a partir de las concentraciones

y dosis ensayadas para determinar la efectividad terapéutica como

antibiótico que además se le atribuyen a estas especies.

Se sugiere realizar estudios de otros efectos terapéuticos a partir de los

compuestos que poseen ambas especies, para poder determinar si a la

dosis ensayada actúa eficazmente en otros tratamientos.

Luego de realizar los estudios preclínicos, se requiere ir a la siguiente fase

de estudios clínicos.

Finalmente, se propone la elaboración de una forma farmacéutica con todos

sus análisis de control de calidad correspondiente, y así establecer un

producto fitoterapéutico en el mercado nacional.

Abarcando los análisis, se sugiere realizarlos por método de cromatografía

de líquidos, para poder llegar a cuantificar los análitos específicos sea este

tanto para flavonoides (quercetina) y taninos totales (condensados o

hidrolizables).

94

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101

Anexos

Anexo I.

Certificados Taxonómico de la Urtica urens, emitido por el Herbario GUAY de la Facultad

de Ciencias Naturales.

102

Anexo II.

Certificado Taxonómico de la Matricaria chamomilla, emitido por el Herbario GUAY de la

Facultad de Ciencias Naturales.

103

Anexo III. Peso de crisol tarado y

muestra, pérdida de humedad.

Anexo IV. Temperatura de 105±2 ˚C por

2 horas en la estufa.

Anexo V. Peso de las muestras.

Anexo VI. Mufla temperatura de 600 ˚C, enfriar y pesar

Anexo VII. Identificación de alcaloides

(opalescencia, turbidez o precipitado).

Gráfico VIII. Identificación de Saponinas

(presencia de espuma).

104

Gráfico IX. Papel filtro humedecido con

NaOH al 10%.

Anexo X. Baño María por 5 minutos.

Gráfico XI. Identificación de

Cumarinas (coloración verdosa).

Anexo XII. Identificación de triterpenos y/o

esteroides (rosado azul, Verde intenso, verde

oscuro).

Anexo XIII. Identificación de azucares reductores (colorea rojo o precipite rojo)

Anexo XIV. Identificación de compuestos fenólicos (presencia de color azul, verde, pardo o negro)

105

Anexo XV. Macerar con alcohol al 70

Anexo XVI. Separar y filtrar

Anexo XVII. Elaboración de las mezclas hidroalcohólicas

Anexo XVIII. Determinación del olor de los extractos independientes y la mezcla.

Anexo XIX. Determinación del color de los extractos independientes y la mezcla.

Anexo XX. Determinación de sólidos totales

106

Anexo XXI. Estufa por aproximadamente 3 horas.

Anexo XXII. Desecador hasta alcanzar una temperatura ambiente.

Anexo XXIII. Densidad relativa de las muestras de los extractos independientes y de la mezcla

Anexo XXIV. Medición del pH mediante el uso de un pH-metro de las muestras (independientes y mezcla)

Anexo XXV. Preparación de la curva de calibrado (quercetina)

Anexo XXVI. Lecturas en el espectrofotómetro a 415 nm.

107

Anexo XXVII. Cuantificación de quercetina en las muestras (extractos independientes y la mezcla)

Anexo XXVIII. Primera fase, consumo 1

Anexo XXIX. Segunda fase, consumo 2

Anexo XXX. Selección de animales

Anexo XXXI. Inducción del edema plantar

108

Anexo XXXII. Medición del edema plantar

Anexo XXXIII. Curva de calibrado de quercetina.

y = 0,0491x + 0,0018R² = 0,9936

0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0 2 4 6 8 10 12 14

AB

SOR

BA

NC

IA

CONCENTRACION

CURVA DE CALIBRADO QUERCETINA

109

Anexo XXXIV. Tabla de registro de pesos de los animales de experimentación de los

Grupos Controles y Grupos tratamientos correspondientes a la Primera Fase.

Grupo A: Grupo Control

Negativo (ClNa)

Grupo B: Grupo Control

Positivo (Diclofenaco)

Grupo C: Grupo

Muestra (80O:20M)

Grupo C: Grupo

Muestra (50O:50M)

Grupo C: Grupo

Muestra (20O:80M)

#Rata Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g)

1 316,15 293,4 301,1 298,4 301,3

2 304,5 289,8 303,2 297,4 298,4

3 300,7 280,8 291,3 292,5 289,7

4 303,5 275,3 285,5 279,7 288,4

306,21 284,83 295,28 292 294,45

SD 6,82 8,27 8,33 8,60 6,37

Nota. Se muestra los pesos de los animales de experimentación empleados en los

grupos controles tanto negativo (ClNa) como positivo (Diclofenaco) Vs a los grupos

tratamientos de Ortiga y Manzanilla con diferentes concentraciones (80O:20M);

(50O:50M); (20O:80M) correspondientemente.

Anexo XXXV. Tabla de registro de las administraciones de los grupos controles y Grupos

tratamientos correspondientes a la Primera Fase.

Grupo A: Grupo Control

Negativo

Grupo B: Grupo Control

Positivo

Grupo C: Grupo

Muestra (80O:20M)

Grupo C: Grupo

Muestra (50O:50M)

Grupo C: Grupo

Muestra (20O:80M)

#Rata (ml) (ml) (ml) (ml) (ml)

1 2 2 2 2 2

2 2 2 2 2 2

3 2 2 2 2 2

4 2 2 2 2 2

110

Anexo XXXVI. Tabla de registro de las patas con inducción de carragenina durante los periodos de tiempo transcurridos en el ensayo.

Nota. P N: Pata normal, P I: Pata inflamada, ml: mililitros. La pata normal esta dado en volumen de desplazamiento inicial, sin administración de

carragenina. La pata inflamada, es aquella que ya se encuentra administrado la carragenina y producirá una inflamación a nivel plantar de la

pata de la rata. Esto se medirá una vez transcurrido las 3 horas de la administración de la carragenina y aplicado los tratamientos a cada uno de

los grupos (1ra, 3ra y 5ta hora).

Grupo Control Negativo Grupo Control Positivo Grupo Control Muestra

80O:20M Grupo Control Muestra

50O:50M Grupo Control Muestra

20O:80M

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

#Rata P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

1 1,8 3,4 3,1 2,9 1,5 2,7 2,6 2,3 2,2 2,3 2,3 2,2 1,3 2,7 2,5 1,5 1,5 2,3 2,6 2

2 1,9 3 2,8 2,6 1,5 3,1 3 2 1,9 2,7 2,6 1,9 1,2 2,6 2,3 1,6 1,5 2,2 2,2 1,9

3 1,6 3 2,7 2,4 1,4 3 2,8 2 1,7 2,5 2,4 1,7 1,5 2,4 2,2 1,8 1,4 2,6 2,5 2

4 1,3 3,1 2,8 2,5 1,8 2,9 2,7 2,2 1,6 2 2 1,6 1,8 2,6 2,7 2,1 2,1 2,1 2,1 2,3

2,13 3,13 2,85 2,60 1,84 2,93 2,78 2,13 1,85 2,38 2,33 1,85 1,60 2,58 2,43 1,75 1,84 2,30 2,35 2,05

SD 0,55 0,19 0,17 0,22 0,34 0,17 0,17 0,15 0,26 0,30 0,25 0,26 0,29 0,13 0,22 0,26 0,33 0,22 0,24 0,17

111

Anexo XXXVII. Tabla de registro de los porcentajes de inflamación (edema plantar), durante los períodos de tiempo transcurridos en el ensayo.

Porcentajes de inflamación en los distintos grupos tratados a la 1ra, 3ra y 5ta hora. Donde se puede observar cual es el grupo que posee mejor

poder como antiinflamatorio al comprarlos con el control negativo y con el control positivo vs las mezclas hidroalcohólicas.

Grupo Control Negativo

Grupo Control Positivo

Grupo Control Muestra 80O:20M

Grupo Control Muestra 50O:50M

Grupo Control Muestra 20O:80M

1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h

#Rata P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml)

1 77,78 66,67 61,11 60 46,67 33,33 42,11 26,00 15,79 92,31 61,54 46,15 60,00 46,67 33,00

2 78,95 63,16 36,84 66,67 60,00 40,00 38,89 22,00 11,11 75,00 66,67 50,00 53,33 53,33 26,00

3 87,50 68,75 50,00 64,29 50,00 35,71 37,50 31,00 18,75 66,67 46,67 33,33 71,43 57,14 21,00

4 93,33 60,00 46,67 64,71 35,29 29,41 29,41 23,53 11,76 78,57 64,29 42,86 64,71 41,18 29,00

84,39 64,64 48,65 63,9 47,99 34,61 36,98 25,63 14,35 78,14 59,79 43,09 62,37 49,58 27,25

SD 7,4 3,86 10,01 2,8 10,19 4,43 5,40 3,94 3,59 10,68 9,00 7,13 7,63 7,08 5,06

112

Anexo XXXVIII. Promedio de los porcentajes de inflamación de los distintos grupos

tratados con las diferentes concentraciones de mezclas hidroalcohólica de ortiga y

manzanilla vs diclofenaco

Tiempo (hs)

Grupo Control Negativo

(%)

Grupo Control Positivo

(%)

Grupo Control Muestra 80O:20M

(%)

Grupo Control Muestra 50O:50M

(%)

Grupo Control Muestra 20O:80M

(%)

1 84,39 63,91 36,98 78,14 62,37

3 64,64 47,99 25,63 59,79 49,58

5 48,65 34,61 14,35 43,09 27,25

Anexo XXXIX. Tabla de registro de pesos de los animales de experimentación de los

Grupos Controles y Grupos tratamientos correspondientes a la Segunda Fase.

Grupo A: Grupo Control

Negativo

Grupo B: Grupo Control Positivo

Grupo C:

Grupo Muestra (Ortiga)

Grupo C: Grupo

Muestra (Manzanilla)

Grupo C: Grupo

Muestra (80O:20M)

#Rata Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g) Peso (g)

1 239,10 255,9 256,80 224,30 269,30

2 239,40 260,1 258,50 221,10 270,10

3 246,60 252,8 239,40 225,70 275,30

4 237,70 240,9 258,90 226,90 270,10

240,70 252,425 253,40 224,50 271,20

SD 4,00 8,25 9,38 2,50 2,76

113

Anexo XL. Tabla de registro de las administraciones de los Grupos Controles y Grupos

tratamientos correspondientes a la Segunda Fase.

Grupo A: Grupo Control Negativo

Grupo B: Grupo

Control Positivo

Grupo C: Grupo

Muestra (Ortiga)

Grupo C: Grupo Muestra

(Manzanilla)

Grupo C: Grupo

Muestra (80O:20M)

#Rata (ml) (ml) (ml) (ml) (ml)

1 2 2 2 2 2

2 2 2 2 2 2

3 2 2 2 2 2

4 2 2 2 2 2

114

Anexo XLI. Tabla de registro de las patas con inducción de carragenina durante los periodos de tiempo transcurridos en el ensayo.

Grupo Control Negativo Grupo Control Positivo Grupo Control Muestra

Ortiga Grupo Control Muestra

Manzanilla Grupo Control Muestra

80O:20M

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

1ra h

3ra h

5ta h

#Rata P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P N (ml)

P I (ml)

P I (ml)

P I (ml)

1 1,00 2,80 2,50 1,80 1,5 2,7 2,6 2,3 1,50 2,30 1,90 1,70 1,90 2,70 2,30 1,90 1,10 1,80 1,40 1,30

2 1,40 3,20 2,50 1,80 1,5 3,1 3 2 1,70 2,20 2,10 1,70 1,10 2,20 1,90 1,10 1,40 2,00 1,60 1,60

3 1,30 2,80 2,50 2,00 1,4 3 2,8 2 1,50 2,30 2,20 1,90 1,40 2,40 2,30 1,40 1,30 2,20 2,00 1,50

4 1,30 2,50 2,30 2,20 1,8 2,9 2,7 2,2 1,40 2,50 2,20 1,70 1,30 2,30 2,30 1,30 1,50 2,00 1,60 1,60

1,25 2,83 2,45 1,95 1,84 2,93 2,78 2,13 1,53 2,33 2,10 1,75 1,43 2,40 2,20 1,43 1,33 2,00 1,65 1,50

SD 0,17 0,29 0,10 0,19 0,34 0,17 0,17 0,15 0,13 0,13 0,14 0,10 0,34 0,22 0,20 0,34 0,17 0,16 0,25 0,14

115

Anexo XLII. Tabla de registro de los porcentajes de inflamación (edema plantar), durante los periodos de tiempo transcurridos en el ensayo.

Grupo Control Negativo

Grupo Control Positivo

Grupo Control Muestra Ortiga

Grupo Control Muestra Manzanilla

Grupo Control Muestra 80O:20M

1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h 1ra h 3ra h 5ta h

#Rata P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml) P I

(ml)

1

79,00

57,14

28,57

56,25

12,50

18,75

53,3

26,67

13,33

52,6

47,37

26,32

45,45

27,27

18,18

2

86,00

78,57

28,57

66,67

58,33

25,00

52,9

35,29

11,76

81,8

81,82

36,36

42,86

21,43

14,29

3

85,00

76,92

53,85

69,23

53,85

23,08

53,3

40,00

26,67

71,4

50,00

35,71

53,85

23,08

15,38

4

92,00

76,92

69,23

75,00

41,67

25,00

78,6

35,71

21,43

69,2

46,15

38,46

26,67

13,33

6,67

85,30

72,39

45,05

66,79

41,59

22,96

59,5

34,42

18,30

68,8

56,34

34,21

42,21

21,28

13,63

SD

5,6

10,19

20,04

7,84

20,63

2,95

12,69

5,59

7,00

12,08

17,06

5,39

11,37

5,84

4,92

116

Anexo XLIII. Promedio de los porcentajes de inflamación de los Grupos Controles y

Grupos tratamientos de Ortiga y Manzanilla independientemente Vs Mezcla

Hidroalcohólica (80O- 20M).

Tiempo (hs)

Grupo Control Negativo

(%)

Grupo Control Positivo

(%)

Grupo Control Ortiga (%)

Grupo Control Manzanilla (%)

Grupo Control Muestra 80O:20M

(%)

1 85,30 66,78 59,54 68,78 42,21

3 72,39 41,58 34,42 56,34 21,28

5 45,05 22,96 18,30 34,21 13,63

117

118

119