Análisis cualitativo de carbohidratos
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Análisis cualitativo de CarbohidratosHarold Andrés Salamanca Ortíz 20101150054
Andrea Catalina Rodríguez Murcia 20101150049
Carbohidratos• Moléculas con CHO (hidratos de carbono.
• Son aldehídos o cetonas con múltiples grupos hidroxilo.
• Almacenamiento de energía, síntesis de moléculas más complejas.
Ensayo General
Fundamento• Los polisacáridos, disacáridos o trisacáridos se hidrolizan y forman
monosacáridos (calentamiento con ácido mineral concentrado):
Fundamento• Estos monosacáridos se convierten en furfural o 5-hidroxi metil furfural
(calentamiento y ácido sulfúrico o fosfórico):
Fundamento
• Los furfurales formados son volatilizados con vapor y reaccionan con p-toluidina o anilina para formar bases de Shiff coloreadas:
Procedimiento
5-10 mg del compuesto
O unas gotas de solución
del compuesto a sequedad
Gotas de ácido fosfórico
Cubrir con un papel filtro mojado con 2 gotas de reactivo (sln 10%
de toluidina en HAc al 10%)
Ensayo de Molish
Fundamento • Identifica monosacáridos (pentosa o hexosa)
• Convierte el monosacárido en furfural (o sus derivados), el cual reacciona con alfa naftol formando un compuesto de coloración púrpura – violeta:
•
Procedimiento
20 mg del compuesto
1 mL de agua
2 gotas reactivo de
Molish Ácido sulfúrico
Por las
paredes del
tubo
Procedimiento
Consideraciones
• Algunos carbohidratos complejos pueden dar ensayos negativos, especialmente los insolubles en agua. Algunos
polialcoholes como las hexitas pueden dar ensayo positivo.
Diferenciación entre azúcares reductores-no reductores
Ensayo de Fehling
Fundamento• Identifica azúcares reductores de no reductores.
• Los carbohidratos reductores se oxidan a sales de ácidos aldónicos cuando el Cu 2+ del reactivo de fehling se reduce a Cu 1+.
Procedimiento
10 mg de compuesto
1 mL de sln A
1 mL de sln B
Debido a la formación de
óxido de cobre
Ensayo de Benedict
Fundamento• Tiene el mismo fundamento del ensayo de Fehling:
Procedimiento
10 mg de compuesto
2 mL de reactivo
benedict
Debido a la formación de
óxido de cobreCalentamiento a baño María
durante 3 minutos
Diferenciación entre monosacárido-disacárido
Ensayo de Barfoed
Fundamento• Los monosacáridos se oxidan más fácilmente que los disacáridos.
• El acetato de cobre cristalizado oxida al monosacárido reduciendo al Cu 2+ a Cu 1+. El precipitado se forma en 2 minutos. En disacáridos se forma en más tiempo:
Procedimiento
En 2 minutos
10 mg del compuesto
2 mL del reactivo
Diferenciación entre monosacáridos
Ensayo de Seliwanoff
Fundamento• Identificación de cetohexosas, diferenciándolas de las aldohexosas.
El calentamiento a más de 15
minutos produce la isomerización
de la D-Glucosa (aldosa) en D-
Fructosa (cetosa), por lo que la
glucosa da prueba positiva
La sacarosa siendo disacárido da
prueba positiva debido a su
hidrólisis ácida, dando la D-
glucosa y D-Fructosa
Procedimiento
En 2 minutos
1 mL de sln de azúcar al 5%
1 mL del reactivo
A baño María
Ensayos para pentosas
Ensayo de Bial
Fundamento• El HCl del reactivo de Bial convierte a la pentosa en furfural, la cual reacciona
con orcinol para formar un complejo de color verde
Procedimiento
Solución
carbohidrato al 5%
1 mL reactivo bial
Ensayo de Tollens
Fundamento• La pentosa se convierte en furfural con calentamiento en HCl, y se hace
reaccionar con un fenol (floroglucinol) para formar un complejo rojo:
Procedimiento
10 mg del compuesto + 5mL de HCl 6N
10 mg de fluoroglucinol
Calentar a baño María x 1 minuto
Coloración roja
Prueba de la Bencidina de Tauber
Fundamento Característico para identificación de pentosas.
Trabaja de forma similar que en la prueba de Tollens, pero en este caso, el ácido es acético y el compuesto con el que se condensa el furfural es una bencidina.
Procedimiento• 1 mL de sln de bencidina + 2 gotas de solución de carbohidrato
• Calentar a ebullición
• Enfriar rápidamente
Color violeta
Caracterización de azúcares por formación de osazonas
Fundamento
Fundamento• Las osazonas de diferentes azúcares tienen punto de fusión y características
diferentes:
• Hidrazona
• Color blancoManosa
• Al formarse se separa al principio como un aceiteArabinosa
• Se separa de forma cristalina
• No precipita en calienteLactosa
Procedimiento
En un tubo de ensayo
0,2 g de carbohidrato
0,4g de clorhidrato de fenilhidracina
puro
0,6g de acetato de sodio
cristalizado
4 mL de agua
Tapar con un corcho sin
ajustar
Baño maría a 100°C
Agitar el tubo ocasionalmente
sin retirar del baño
Anotar el tiempo de formación de
la osazona
Procedimiento alternativo
0,5 g de carbohidrato + 2mL de agua
1 mL HAc glacial + 3 mL agua + 1 mL fenilhidracina
pura
Agitar hasta obtener una sln
clara
Agregar la 2sln a sln de azúcar
Agitar cuidadosamente
Colocar el tubo en baño maría
Anotar el tiempo de formación de
la osazona
En cada tubo
por separado
ResultadosAzúcar Osazona
t de formación (min) Pto de fusión (°C)
Manosa 0,5 205
Fructosa 2 205
Glucosa 4 205
Xilosa 7 164
Ramnosa 9 185
Arabinosa 9 166
Galactosa 15-19 196
Sacarosa 30 205
Lactosa - 200
Maltosa - 208