Microscopia teoria

CURSO DE VERANOCURSO DE VERANO

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUÍ

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS

ESCUELA DE BIOLOGÍA

CURSO DE BIOLOGIA GENERAL

ELABORADO POR:

PROF. PABLO ANTONIO ACOSTA

Acosta, Pablo UNACHI, 2013

MICROSCOPIA OPTICA


* En nuestro trabajo con los seres vivos encontraremos diferentes tipos de microscopios con distintos aumentos, desde el microscopio estereoscópico de disección que aumenta de 4 a 40 veces, hasta el electrónico que puede aumentar hasta 100.000 veces. Generalmente trabajamos con microscopios compuestos semiprofesionales que aumentan de 100 a 1500 veces.

A.- Microscopía óptica:M.O. Simple: lupas monoculares y binoculares.M.O. Compuesta:Estereomicroscopios.De luz ultravioletaDe fluorescencia.De contraste de fases.De campo oscuroDe polarización*.Microscopía por luz reflejada.*

B.- Microscopía electrónica:De barrido.De transmisión.Confocal con barrido láser.

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Partes del microscopio óptico


MICROSCOPIA OPTICA

Preparación del objeto de estudio para microscopía óptica:

ESTUDIO “IN VIVO”:

a.1.- Examen en fresco:

Preparaciones húmedas. Gota pendiente.Gota de nigrosina.

a.2.- Coloración vital.

ESTUDIO “IN VITRO”:

b.1.- Fijación:b.2.- Inclusión b.3.- Corteb.4.- Tinciónb.5.- Montajeb.6.- Etiquetado Corte, tinción y montaje de preparaciones


MICROSCOPIA OPTICA

CORTES CON EL MICROTOMO DE MANO:

Material de caras planas:

1.- Se toma un trozo de un par de cm. de longitud, de barra de cortes.

2.- La barra de cortes se parte longitudinalmente con la punta del escarpelo en dos mitades.

3.- La pinza interna de presión del microtomo debe estar en la posición más baja. La

pinza sube o baja mediante giro del mando inferior.

4.- Aprisionar entre las dos mitades de la barra de cortes, el material que se desea cortar.

5.- Fijarlo con la pinza de presión del microtomo. El corte medio de la barra debe quedar

paralelo a las caras de la pinza de sujeción del microtomo.

Material cilíndrico: 1.- Se procede de forma análoga a como

se describe anteriormente en los puntos 1 y 2 para el material de caras planas.

2.- Para evitar la deformación del material se realizan unas excavaciones con la punta del escarpelo, longitudinalmente en el centro de ambas caras internas.

3.- A continuación se procede como en el punto 3 y 4.


MICROSCOPIA OPTICA

OBTENCIÓN DE LOS CORTES:1.- La barra de cortes que contiene el

material a cortar se coloca al nivel de la platina del microtomo. Se sube girando el mando inferior o se suprime todo lo que sobresale de la platina si la pinza estuviese en su posición más baja.

2.- Se da un pequeño giro al mando elevador de la pinza.

3.- con la navaja apoyada de plano sobre la platina, se obtiene el primer corte. El corte debe realizarse deslizando la navaja sobre la platina oblicuamente de forma suave y continua.

4.- Se eleva la pinza y se obtiene de igual manera un segundo corte.

5.- Los cortes se recogen con un pincel o pinzas depositándose, mojados en agua en la cubeta.

6.- Debe humedecerse el material en el que se están realizando los cortes bien con un pincel o poniendo una gota de agua en el filo de la navaja.


Estudio de células animales y vegetales. Orgánulos celulares vegetales

Montaje de preparaciones:

PREPARACIÓN EN AGUA NO DEFINITIVA:

1.- Porta en cubeta en plano inclinado. Se lleva el material laminar al porta extendiéndolo en el agua. Escurrir el agua. Con papel de filtro se embebe el agua sobrante.

2.- Se coloca el cubre y se presiona con la aguja haciendo salir el agua sobrante y el aire, se limpian las gotas sobrantes con papel del filtro.



PREPARACIÓN EN GLICERINA, NO DEFINITIVA:

Además de las manipulaciones 1-2-3 y 4 del montaje I, se realizarán:

5.- El porta se coloca sobre el pocillo de montar preparaciones. Secar cuidadosamente el agua de ambos lados del porta y la que quede cercana a la preparación, con una tira de papel de filtro.

6.- En el centro del corte de la preparación, se depositan un par de gotas de glicerina.

7.- Se coloca un cubreobjetos limpio apoyando primero un canto sobre el porta y dejándolo caer.

8.- con la aguja enmangada se sacan las gotas de aire y el exceso de glicerina.

9.- Con unas tiras de papel de filtro se limpia la preparación de restos de glicerina o de agua. El porta debe estar limpio antes de mirar por el microscopio la preparación.



PREPARACIÓN DEFINITIVA EN GLICERINA-GELATINA:

Además de los pasos 1.2-3-4 y 5 del montaje II se realizan las siguientes operaciones:

6.- Fundir lentamente a la llama del mechero, usando una cucharilla como 0,25 cm. cúbicos de gelatina-glicerinada. La fusión debe ser lenta para evitar burbujas. Se vierte encima de la preparación microscópica.

7.- Colocar un cubre sobre apoyando un canto del mismo sobre el porta dejándolo caer sobre el porta.

8.- Con la aguja enmangada se hace salir el exceso de gelatina y las burbujas de aire.

9.- La preparación debe reposar horizontalmente para evitar deslizamientos del cubre hasta que la gelatina esté endurecida.

Se coloca un cubre sobre el porta y con la aguja se expulsa el exceso de glicerina.



PREPARACIÓN DEFINITIVA EN EUPARAL:

Se realizan las cinco primeras manipulaciones del montaje anterior seguidas de:

6.- Secado de la preparación. Para ello se usan tiras de papel de filtro. Se pasa tres o cuatro veces el mango de la aguja enmangada, apretando sobre la cara superior del bloque de papel de filtro, para planchar las fibras y rugosidades.

7.- las tiras de papel de filtro se sujetan sobre el porta con los dedos de la mano izquierda. La superficie planchada con el mango de la aguja es que debe tomar contacto con la preparación.

8.- Secar la preparación, corriendo el dedo pulgar, un par de veces hacia fuera.

9.- el papel de filtro se levanta de la preparación en sentido inverso a como fue depositado. Se empieza por levantar el extremo izquierdo llevándolo hacia el lado derecho del portaobjetos.


10.- Se dejan caer unas gotas de alcohol de 60º sobre la preparación.

11.- El alcohol se deja escurrir sobre el pocillo, inclinando ligeramente el portaobjetos.

12.- Secar la preparación del alcohol como en los puntos 6, 7, 8 y 9 de este párrafo.

13.- Se vuelve a humedecer la preparación con unas gotas de alcohol de 70º.

14.- el alcohol sobrante se deja escurrir por el porta en el pocillo, inclinando el portaobjetos.

15.- Se vuelve a secar el alcohol como antes.

16.- A continuación se añade alcohol de 80º y se hace el mismo procedimiento de antes.

17.- Se repite lo mismo con alcoholes de graduaciones de 96º y absoluto. Así se va deshidratando la preparación.

18.- Colocar dos o tres gotas de euparal en el centro de la preparación..



Colocar dos o tres gotas de euparal en el centro de la preparación. Colocar un cubre y con la aguja presionar para

extraer el exceso de euparal y de aire.


Se limpia con papel de filtro por arriba y por abajo. Se debe conservar en horizontal hasta endurecerse el euparal.

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