7/17/2019 Practica 7 Actividad Enzimatica

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PRACTICA Nº 9ACTIVIDADENZIMÁTICA

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 Actividad enzimáticaLas enzimas son proteínas

(excepto las ribozimas), quecatalizan las reacciones químicas

que ocurren en las células

La catalisis la realizan

disminuyendo la energía de

activación.

Factores que influyen en laactividad enzimática:● Temperatura

● pH

● Concentración de la enzima

● Concentración del sustrato

● Inhibidores

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 Alguna enzimas se encuentran inactivadas y reciben el nombre de Apoenzimas, para su

activación estas enzimas requieren de un cofactor o de una coenzima.

La enzima activa unida a los cofactores o a las coenzimas se denomina Holoenzimas.

Apoenzimas + Coenzima/Cofactor Holoenzima(Inactiva) (Activa)

Coenzimas (moléculas orgánicas, como vitaminas)

 Cofactores (moléculas inorgánicas, iones metálicos)

Se unen por interacción electrostática, puentes hidrógeno o fuerzas de

Vander Waals.

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La actividad catalítica de una enzima sobre un sustrato puede ser

descrita en dos parámetros:

●Vmax velocidad máxima de la reacción en concentraciones

saturantes del sustrato

●Km La constante de Michaelis que es una medida de la afinidad

de la enzima para el sustrato. Esta esta definida como la

concentración de sustrato en la cual se obtiene la mitad de la

velocidad máxima.

Las concentraciones de las moleculas en la celula varian, asi como

el valor del Km de las enzimas que actuan sobre ellas.

Generalmente la concentracion intracelular del sustrato es

aproximadamente la misma o mayor al valor del Km de la enzima a

la que se une.

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Clasificación de las enzimas:

1 Oxidoreductasas Transfieren electrones (iones hidronios o átomos de H)

2 Transferasas Transfieren Grupos

3 Hidrolasas Reacción de hidrólisis (transfiere una molécula de agua)4 Liasa Adiciona grupos a dobles enlaces o forma doble enlaces por remoción de grupos

5 Isomerasas Transfiere grupos dentro de moléculas para obtener formas isomericas

6 Ligasas Forma enlaces C-C, C-S, C-O y C-N por reacción de condensación acoplada a

ruptura de ATP

La mayoría de las enzimas cataliza la transferencia de electrones, atomos o grupos funcionales.

Las enzimas se clasifican en base a códigos y su nombre es asignado de acuerdo tipo de

reacción

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PRIMERA PARTE: Actividad de la enzima CATALASA EC

1.11.1.6

OBJETIVO.

Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal

La catalasa es una enzima oxidoreductasa que se encuentra en altas concentraciones en los

compartimientos intracelulares llamados peroxisomas

Las células contienen catalasa para eliminar el exceso de H2O2 que es un agente oxidante y

es dañino para las células

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PRIMERA PARTE: Actividad de la enzima CATALASA EC

1.11.1.6

La reacción enzimática se evaluara por el desprendimiento

de O2 determinada por la formación de burbujas en el tubo

de reacción

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SEGUNDA PARTE: Actividad de la enzima Alfa AMILASA EC 3.2.1.1.

La amilasa es una hidrolasa que digiere el glucógeno y el almidón para formar azucares simples.

Clasificación :

α-Amilasa (1,4-α-D-glucano-glucanohidrolasa; glucogenasa)

Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro. Actúan a lo largo de cualquier punto de la cadena

de los carbohidratos, descomponiéndolos en dextrina desde la amilopectina.

En fisiología humana tanto la procedente de la saliva como la pancreática son α-Amylasas. Puede

encontrarse en algunas plantas, hongos y bacterias.

β-Amilasa (1,4-α-D-glucano-maltohidrolasa; amilasa sacarogénica)

La β-amilasa es también sintetizada por bacterias, hongos y plantas. Actúa desde el extremo no

reductor de la cadena, catalizando la hidrólisis del segundo enlace α-1,4, rompiendo dos unidades de

glucosa (maltosa) a la vez. Muchos microorganismos también producen amilasa para degradar el

almidón extracelular. Los tejidos animales no contienen β-amilasa, aunque puede estar presente enmicroorganismos saprófitos del tracto gastrointestinal.

γ-Amilasa (Glucano 1,4-α-glucosidasa; aminoglucosidasa; Exo-1,4-α-glucosidasa; glucoamilasa; α-

glucosidasa lisosómica; 1,4-α-D-glucano glucohidrolasa)

 Además de romper el último enlace α(1-4)glicosídico en el extremo no reductor de la cadena de

amilosa y amilopectina, liberando glucosa, la γ-amilasa puede romper los enlaces glicosídicos α(1-6).

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AMILASA SALIVAL (PTIALINA):Reduce el almidón a maltosa y

dextrina. Se inactiva con los jugos

gástricos del estómago.

Condiciones óptimas de la Ptialina:

pH 5.6 - 6.9

Temperatura corporal 37ºC

AMILASA PANCREÁTICA:

Reduce el almidón a dextrina,maltosa o glucosa. No se inactiva

con el jugo gástrico.

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SEGUNDA PARTE: Actividad de la enzima Alfa AMILASA EC 3.2.1.1.

OBJETIVOS. Comprobar que sólo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan

óptimamente catalizando una reacción enzimática con su sustrato

 ALMIDON + AMILASA GLUCOSA MALTOSA DEXTRINA

1 2 3 4

 Almidón Almidón Almidón Sacarosa

+ + +

Saliva Saliva Saliva

T Amb T Amb 37 C T Amb

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 Actividad de la enzima amilasa

 ALMIDON + AMILASA GLUCOSA MALTOSA DEXTRINA

1 2 3 4

 Almidón Almidón Almidón Sacarosa

+ + +

Saliva Saliva Saliva

T Amb T Amb 37 C T Amb

La reacción enzimática se evaluara por la observación del cambio de coloración

de intensidad del reconocimiento del almidón por el lugol