Separación de los pigmentos del epazote por cromatografía

en capa fina y columna

Separación de los pigmentos del epazote por cromatografíaen capa fina y columna

Resumen:

Objetivos: Extraer los pigmentos del epazote haciendo uso de la cromatografía. Elegir mediante cromatografía en caa fia el eluyente o mzcla de eluyentes adecuados

para la realizar la separación por cromatografía en columna. Relizar Cromatografia en Capa Fina para cada eluato obtenido en la Cromatografia en

Columna. Realizar Rf a cada componente localizado en las cromatoplacas, si las hay.

Hipótesis:Siendo la cromatografía un método de separación se lograrán separar los pigmentos por diferencia de polaridades haciendo uso del eluyente o mezcla de eluyentes adecuados.

Parte experimental

Material: Vasos de precipitado 10 mL Buerta Pinzas para bureta Soporte universal Fracos pequeño de vidrio Portaobjetos Capilares Vaso de precipitado 150 mL Tubos de ensaye Gradilla Parrilla de calentamiento Pipetas de 10mL Embudo de talle corto Embudo de separaciñon

Anillo d hierro Mortero con pistilo Frascos ambar Balanza granataria Propipeta Encendedor

Reactivos: Epazote Agua destilada Arena Fluorsil Silica gel Algodón Acetato de etilo

Acetona Tolueno Hexano

Cloroformo Etanol

Procedimiento:Extracción del pigmento:

Se cortaón finamente 15g de hojas de epazote previaente limpio y seco, se colocó en un mortero y se adicionron 15mL de metanol, 15mL de hexano y 5mL de benceno, se triturarón las hojas con el pistilo.

Se filtro por gravedad con algodón los restos que tenía el algodón. Se trasvasó a un embudo de separación, se adicionaron 20mL de agua y se realizaron dos lavados de 20mL cada uno, se desecho la fase acuosa.

La fase orgánica se lavó con sulfato de sodio y se decanto a un frasco ambar para guardarla.

Cromatografía en capa fina:

Después de obtenido el pigmento se procedió a realizar la cromatografía en capa delgada, se prepararon las cromatoplacas realizando una suspensión de silica gel en acetato de etilo, aregando silica hasta obtener una pasta fluida. Se tomaron los portaobjetos y se les colcó un cantidad generosa de sla suspensión, se balancearon de un lado a otro hasta cubrir por copleto el cubreobjetos, dejando solo un parte libre en la zna superior para poder manipularlos de esa parte, se dejaron secar al aire.

Se tomo un capilar colocándolo bjo la pflama de un encendedor se giró hasta sentirlo blando, entonces se jalo firmemente por las puntas hasta separarlo, se rompió cuidadosamente una de las puntas cerradas, se utilizó como micropipeta sumergiéndolo cuidadosamente en el pigmento y se colocaron dos muestras en cada cromatoplaca aproximadamente a 1cm de altura del extremo inferior de la placa.

En las cámaras de elusión se colcaron los disolventes o eluyentes elegidos y un trozo de papel filtro, ordenados de menor a mayo polaridad es decir: hexano, tolueno, cloroformo, acetato de etilo y acetona. Se colocó una cromatoplaca dentro de cada cámara y se taparon para evitar las evaporaciñon de los eluyentes.

Cuando el eluyente llegó aproxmadamente a 1cm por debajo del final de la silica se retiraron las placas, se marcó con un lapicero hasta que altura eluyó y los centros de cada mancha.

Posteriormente se eligeron dos mezclas de eluyentes la primera de hexano/acetato de etilo y la segunda tolueno/acetato de etilo y se realizo una cromatografía en capa delgada con cada una.

Cromatografía en columna:

Después de elegir la mezcla de eluyente que dio una mejor separción, la cual fue acetato de etilo/Tolueno.Se tomo una bureta de 20mL y se preparo una columna cromatografica, usando como fase estacionaria Fluoracil. Con una pipeta pasteur se tomo aproximadamente 2mL del pigmento de Epazote y se adiciono a la columna.

Se uso la mezcla proporcional de Acetato de Etilo y Tolueno cambiando la polaridad de la mezcla, 10mL fue el volumen de cada mezcla asi al termino de cada volumen se obtuvieron eluatos.

Para los eluatos obtenidos se tuvo que evaporar el disolvente que los arrastro por la columna cromatografica, esto fue para concentrar la muestra obtenida. Con los eluatos concentrados se tomo una porción de cada uno con un capilar, en la cromatoplaca con fase estacionaria de Silica gel se coloco cada muestra con estos capilares, se coloco tres eluatos cada cromatoplaca y se les hizo eluir con los disolventes que fueron arrastrados en la columna cromatografica.

Diagrama de flujoExtracción del pigmento:

Cromatografía en capa fina:

Macerar las hojas de epazote con 15mL de hexano, 15mL

de metanol y 5 mL de benceno

Filtrar por gravedad, recolectar el liquido y

colocarlo en un embudo de separción.

Hacer dos lavados con agua destilada, cada uno con

20mL. Desechar fase acuuosa.

Lavar la fase orgánica con Na2SO4 , decantarla y

colocarla en un frasco ambar.

Se preparó la papilla con la sílica gel y el

acetato de etilo.

se limpiaron las placas, se recubrierón y dejaron secar al aire

Cargar la placa con el extracto de epazote

Al terminar de eluir se retiraron las placas y

se marco hasta donde eluyó

Se colocaron las cromatoplacas dentro

de las caramas de elución

Se eligío la mezcla de eluyentes para

Cromatografi en columna.

Cromatografía en columna:

Esquemas:

Se sujeto la columna a un soporte y se

aseguraró.

Se colocó un trozo de algodon y arena al

fondo de la columa y se hizo una suspencion de

fluracil con tolueno.

se agregó a la columna y se colocó otra capa de arena en el extremo

superior.

Se tomó el pigmento y se cargo la columna, se adicionó lentamente la mezcla de eluyentes.

Se separaron y concentraron los

eluatos coloridosy se realizo cromatografía en capa fina de cada uno.

Resultados:Cromatografía en capa fina:

Se realizaron 8 cromatografías en capa fina las cuales se muestra a continuación:

Se calculo el Rf para cada uno de los componentes, obteniendo la siguiente tabla:

RF=Distanciarecorrida por elcopuestoDistanciarecorrida por el eluyente

Componente RF

1 0.45102 0.70493 0.74584 0.06785 0.82766 0.74147 0.24148 0.71679 0.6333

10 0.433311 0.06441

Al término de las cromatografías en capa fina se eligieron dos mezclas de eluyentes la priera fue 9 partes de hexano y 1 parte de acetato de etilo y la segunda fue 9 partes de tolueno y 1 de acetato de etilo obteniendo las siguientes cromatoplacas.

Obteniendo los siguientes RF :

Compuesto RF

1 0.66712 0.09803 0.79634 0.48155 0.29636 0.0926

Cromatografía en columna:

Para bajar cada componente de la mezcla se siguió las siguientes proporciones:

Tabla de proporciones de disolventes con un total de 10mL cada una:

Volumen de Acetato de Etilo (mL) Volumen de Tolueno (mL)

1 1 92 3 73 5 54 7 35 9 1

Tabla de proporción para los componentes verdes

Volumen de Acetato de Etilo (mL) Volumen de Acetona (mL)1 7 3

Se obtuvieron 11 eluatos 2 sin color y a los 9 restantes se les realizó cromatografía en capa fina, 3 en cada cromatoplaca, obteniendo asi lo siguiente.

Se calculo el Rf para cada uno de los componentes, obteniendo la siguiente tabla:

Rf =

componente Rf1 0.78262 0.52175 0.15223 0.80954 0.904766 0.52387 0.7143

Análisis de resultados:

Al realizar la cromatografía en capa delgada se observo que la mejor searación fue dad por el acetato de etilo, el cual es uneluyente uy polar, sin embargo se observó que arrastraba los pigmentos amarillos por lo cuál se buscó combinarlo con un eluyente menos polar para equilibrar la polaridad.

1 2 3 4 5 6 7

Distancia recorrida del problemaDistancia recorrida del eluyente

La mezcla de eluyentes que dio una mejor separación fue la mezcla 9:1 de tolueno acetato de etilo logrando separar 4 pigmentos distintos, con ello se llegó a que era la mezcla adecuada para llevar a cabo la cromatografía en columna.

Se tuvo que cambiar la proporción de los disolventes para aumentar la polaridad como resultado las 6 mezclas de disolventes, la última mezcla se prefirió cambiar Tolueno por Acetona por que los pigmentos verdes son más polares.

Se consiguió separar 7 pigmentos distintos siendo los verdes los mas polares y los amarillos de menor polaridad. Dichos pigmentos verdes pertenen al grupo de las clorofilas y xantofilas por lo tanto la planta del Epazote tiene dichos pigmentos, a demás de un pigmento grisaseo que de desconoce su identidad, pues con solo una croatografía no es posible determinar de que colorante se trata.

Concluisiones:

Referencias: